人脂肪干细胞（ADSCs）的分离培养及多向分化潜能研究

论文摘要

本研究在标准化cGMP条件下从人体脂肪组织分离获得脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells,ADSCs）,并在无血清培养条件下大规模扩增培养,并对获得的细胞质量进行标准化鉴定及功能验证。建立无分化、大规模扩增培养,预期形成一套国际标准培养体系。在密闭运输脂肪抽吸物至实验室,实验中采用酶消化法及差速离心方法分离得到基质血管分离段（Stromal Vascular Fraction,SVF）,差速贴壁方法纯化ADSCs,并在所配制的无血清培养基中扩增培养。采用流式检测鉴定脂肪干细胞（ADSCs）表面标记物。取第三代ADSCs细胞培养于6孔板之内,用含有脂肪分化、成骨分化和软骨分化诱导剂的培养基中分别进行诱导分化2-3周时间,并分别用2%油红染色剂、茜素红染色剂及用阿利新蓝冰醋酸染色剂分别染色鉴定其细胞分化状况。在实验中我们分离纯化所得到的细胞在无血清培养条件下稳定培养至10代以上时并无出现分化现象,细胞形态呈细、短、小梭形、细胞饱满、大小均一且漩涡状生长。细胞培养密度为5000/cm2时,倍增时间为20-25 h,细胞直径范围在16-20μm时细胞生长活力强,无衰老现象。而流式实验结果显示ADSCs细胞的表型特征非常一致,90%以上ADSCs具有间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）表面标记物CD90,CD105,CD44,CD73,CD146,CD166及CD29。ADSCs还与成纤维细胞和周细胞共同的细胞表面抗原,ADSCs低表达造血系干细胞标记物（CD45,HLA-DR）和内皮标记物（CD31）。脂肪干细胞免疫表型统一,表明得到高纯度脂肪干细胞,并具备MSC表型特征。ADSCs定向诱导分化实验结果显示,细胞在含有脂肪细胞、成骨细胞及成软骨细胞分化诱导剂的培养基中成功分化为所预期的目的细胞。我们成功分离纯化ADSCs并建立了原代培养体系,所得到的ADSCs细胞具有良好的形态学特征与优异的免疫表型。ADSCs具备定向分化为成脂肪、成骨及成软骨细胞的分化潜能。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 第一章 脂肪干细胞研究进展
•   1 脂肪干细胞（ADSCs）前人研究的主要成果
•   2 脂肪干细胞的生物学特征
•   3 脂肪干细胞在再生医学细胞治疗及组织工程中的应用
•     3.1 ADSCs在心脏病学中应用
•     3.2 ADSCs分泌体
•     3.3 ADSCs在皮肤组织工程中应用
•     3.4 ADSCs在成骨组织中应用
• 第二章 脂肪干细胞分离、培养及鉴定
•   引言
•   2.1 实验材料和方法
•     2.1.1 实验材料及试剂
•     2.1.2 仪器设备及耗材
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 ADSCs细胞分离
•     2.2.2 脂肪干细胞的培养
•     2.2.3 人脂肪组织来源干细胞倍增时间及直径检测
•     2.2.4 人脂肪组织来源干细胞的鉴定
•   2.3 实验结果
•     2.3.1 脂肪细胞的分离
•     2.3.2 脂肪干细胞原代细胞培养及体外扩增
•     2.3.3 脂肪干细胞倍增时间及细胞直径
•     2.3.4 脂肪干细胞免疫表型鉴定
• 第三章 脂肪干细胞多向分化潜能研究
•   引言
•   1 脂肪干细胞（ADSCs）向脂肪细胞分化机理
•   2 脂肪干细胞（ADSCs）向成骨细胞分化机理
•   3 脂肪干细胞（ADSCs）向软骨细胞分化机理
•     3.1 实验所用试剂
•     3.2 脂肪干细胞诱导分化实验方法
•     3.3 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 已发表论文

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 乌月汗

导师: 阿拉坦高勒

关键词: 脂肪干细胞,原代培养体系,免疫表型,分化潜能

来源: 内蒙古大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,生物学,基础医学

单位: 内蒙古大学

分类号: R329.2;Q813.11

总页数: 51

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