低离子强度下调节pH值对鲤肌球蛋白空间构象的影响

论文摘要

探讨了低离子强度（0.05 mol/L KCl）条件下,调节pH对鲤肌球蛋白空间构象的影响。试验结果表明:肌球蛋白于酸性pH（2.5,3.5）或碱性pH（11.5,12.5）处理后,溶解度均达到90%以上。pH调节处理后,肌球蛋白Ca2+-ATPase完全失活,即使调回中性也无法恢复,说明肌球蛋白头部结构遭到破坏。圆二色谱分析发现α-螺旋含量没有变化,表明pH调节处理对肌球蛋白尾部二级结构没有影响。此外,经不同pH条件下的酸、碱处理,肌球蛋白的色氨酸荧光发生淬灭,表面疏水性升高,巯基含量降低,胰凝乳蛋白酶酶切位点发生改变,这些都表明肌球蛋白的三级结构遭到破坏。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 肌球蛋白的纯化
•       肌球蛋白的提取参照Kato和Konno[11]的方法进行, 绞碎的鲤鱼肉中加入10倍体积预冷的0.1 mol/L KCl-20 mmol/L TrisHCl （p H 7.5） 搅匀, 4℃, 5 000 g离心5 min, 取沉淀重复上述操作3次。将收集的沉淀悬浊于上述缓冲液中, 13 000 r/min组织均质2～3次, 每次间隔30 s。然后离心 （5 000 g, 10 min, 4℃） , 收集沉淀。沉淀漂洗3次后, 悬浊于0.1 mol/L KCl, 20mmol/L Tris-HCl （pH 7.5） 缓冲液中, 经两层纱布过滤所得滤液为肌原纤维蛋白。用3 mol/L KCl将肌原纤维蛋白溶液的盐浓度调至0.5 mol/L, 加入2 mmol/L Mg-ATP, 然后加入硫酸铵粉末至饱和度40%, 静止30 min离心收集上清, 再将上清液中硫酸铵饱和度调至50%, 离心所得沉淀溶解于0.5 mol/L KCl-20 mmol/L Tris-HCl （pH 7.5） 中, 透析除硫酸铵。最后离心 （12 000 g, 20 min, 4℃） 所得溶液即为鲤肌球蛋白。
•     1.3.2 鲤肌球蛋白的酸碱处理
•     1.3.3 肌球蛋白溶解性变化
•     1.3.4 肌球蛋白Ca2+-ATPase活性
•     1.3.5 圆二色谱 （CD） 分析
•     1.3.6 色氨酸荧光分析
•     1.3.7 表面疏水性测定
•     1.3.8 总巯基含量测定
•     1.3.9 肌球蛋白的胰凝乳蛋白酶消化特性
• 2 结果与分析
•   2.1 肌球蛋白的分离纯化
•   2.2肌球蛋白的溶解性变化
•   2.3肌球蛋白的Ca2+-ATPase活性变化
•   2.4 肌球蛋白的α螺旋含量变化
•   2.5 肌球蛋白的色氨酸荧光分析
•   2.6 肌球蛋白的表面疏水性
•   2.7 肌球蛋白的巯基含量
•   2.8 肌球蛋白的胰凝乳蛋白酶消化特性
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田元勇,王伟,宋扬,刘俊荣

关键词: 鲤肌球蛋白,调节,空间构象改变,酶切位点

来源: 中国食品学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 大连海洋大学食品科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金面上项目(31271980)

分类号: TS254.1

DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.03.010

页码: 86-92

总页数: 7

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