导读:本文包含了胚胎体外培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胚胎,体外,干细胞,胆碱能,生殖细胞,子代,神经。
胚胎体外培养论文文献综述
严继贵,赵正梅,盛夕曼,杨宇清[1]（2019）在《IL-10对体外培养胚胎大鼠中脑NSCs增殖分化的影响》一文中研究指出目的:观察白细胞介素-10(IL-10)对体外培养胎鼠大鼠中脑神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法:将孕14d的SD胎鼠中脑制成单细胞悬液,悬浮培养5d,分别行NSCs免疫荧光鉴定、传代及加入IL-10诱导分化实验。实验分空白对照组和IL-10组。在倒置显微镜下观察各组细胞的生长状况,用免疫荧光染色法检测巢蛋白(nestin)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)、神经元特异烯醇化酶(NSE)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达。结果:IL-10组Nestin、caspase-3、GFAP表达与对照组有统计学差异(P<0.05);两组在NSE的表达上差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-10能促进NSCs增殖及向神经胶质细胞分化,但对其向神经元分化无明显影响,NSCs数量的增多亦可能与抑制caspase-3表达相关。(本文来源于《长江大学学报(自然科学版)》期刊2019年12期）
余卓然,张雪,高放,安铁洙,孔庆然[2]（2019）在《猪胚胎体外培养体系优化对胚胎干细胞建系的影响》一文中研究指出为提高体外胚胎发育质量和体外胚胎建立胚胎干细胞系效率,研究以N2B27为基础的干细胞培养体系对猪孤雌胚胎体外发育和后续建立胚胎干细胞系的影响。设立3个试验组:PZM-3组,孤雌激活的胚胎全程PZM-3培养体系中培养; N2B27组,孤雌激活的胚胎全程N2B27培养体系中培养; PZM-3-N2B27组,孤雌胚胎在PZM-3培养体系中培养至桑葚胚后更换为N2B27培养体系。结果表明,N2B27组无法获得囊胚,但PZM-3-N2B27组胚胎可正常发育至囊胚,囊胚率未显着提高,但囊胚细胞总数显着提高(P<0.05)。PZM-3-N2B27组获得孤雌囊胚用于建立猪胚胎干细胞系,显着提高原代克隆形成率(P<0.05),获得猪胚胎干细胞系呈碱性磷酸酶阳性,表达Oct4、Sox2和Nanog等多能性基因。结果表明,采用PZM-3和N2B27培养体系结合获得的猪孤雌囊胚利于猪胚胎干细胞系建立。研究为进一步优化猪胚胎体外培养体系,获得初始态胚胎干细胞系提供参考。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2019年09期）
郭诗萌[3]（2019）在《猪早期胚胎发育中体外培养体系优化及OCT4、NANOG功能研究》一文中研究指出早期胚胎发育研究是认知特定物种个体发生和发育规律的基础,对其机制解析为现代生物学和医学发展做出了巨大的贡献。目前,人类对其它哺乳动物早期胚胎发育规律的认知主要局限于小鼠等少数模式动物,这阻碍了生命科学研究成果在畜牧生产和医疗领域的应用。猪在畜牧生产和生物医学模型方面都具有重要价值,因此其是小鼠等小型模式动物之外研究热度较高的大型模式动物之一。胚胎细胞命运决定和分化是胚胎发育的基础,其调控机制是发育生物学重要的研究领域。内细胞团(Inner cell mass,ICM)和滋养层(Trophectoderm,TE)的形成是由哺乳动物胚胎发育的第一次细胞命运决定与分化决定的,也是哺乳动物特有的胚胎细胞分化过程。内细胞团的发育命运是形成胚体本身的全部组织细胞和胚外内胚层组织细胞,滋养层的发育命运是形成胎儿胎盘绒毛膜的外胚层组织细胞,在胚胎着床过程中发挥不可替代的作用。体外培养体系是获得猪着床前胚胎的重要方法。然而,我们目前无法从现有的培养体系中获得高质量的胚胎。胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)被认为有益于体外胚胎发育,能够提高囊胚率及囊胚细胞数。然而由于其成分的复杂性以及未知性,FBS促进体外胚胎发育的作用机制以及后续发育能力仍然未知。这限制了FBS在猪胚胎体外培养中的应用。本实验在体外受精后第4天向培养液中添加10%FBS。结果表明,与对照组相比,添加FBS不会提高囊胚率,但是囊胚孵化率显着提高(33±6%vs 19±12%;P<0.05)。但4天添加FBS的胚胎具有明显内细胞团,并且ICM的细胞数以及ICM细胞占总细胞数的比率明显高于对照组,而且发现大部分囊胚可以在体外培养至第8天。此外,我们的研究证明,FBS能够通过激活ROCK(RhoA/Rho-kinase)信号通路从而促进猪胚胎体外发育。在体外培养过程中添加ROCK信号通路抑制剂Y-27632能够显着抑制囊胚的形成。添加FBS,能够在一定程度上补偿Y-27632造成的影响,获得囊胚。同时我们发现添加FBS培养后,猪囊胚中ROCK信号通路关键因子ROCK1和ROCK2的表达水平明显增加。免疫荧光实验也证明,磷酸化RhoA/Rho-kinase也在细胞核中明显的富集。这些结果表明,FBS能够通过激活ROCK信号通路促进猪早期胚胎体外发育,同时也为FBS在猪体外培养体系中的应用以及进一步研究其促进胚胎发育的机制奠定了基础。Oct4(又称Oct3)由Pou5f1基因编码,是POU(Pit-Oct-Unc)家族的同源域转录因子,是多能性调控网络中的关键因子。在小鼠早期胚胎发育过程中,Oct4被认为是内细胞团的标记基因。我们实验室的早期研究表明,猪合子期胚胎敲低OCT4后,大部分胚胎会发育阻滞在8-细胞阶段。在研究中我们发现,在猪早期胚胎发育过程中,OCT4蛋白在猪囊胚的几乎所有细胞中均广泛表达。为了探究猪囊胚滋养层OCT4在植入前胚胎发育中是否具有功能,选取体外培养第5.5天的小腔囊胚,通过病毒感染特异性敲低滋养层中OCT4的表达(OCT4~(TE-KD))。在体外培养至第7天时,OCT4~(TE-KD)囊胚的形态未发生任何明显地变化(直径:224±35μm vs 247±29μm1)。为了检测TE中敲低OCT4对胚胎后续发育的影响,我们将第6天的OCT4~(TE-KD)囊胚进行移植,移植后第2天冲取胚胎,对第8天胚胎进行检测。结果发现,OCT4~(TE-KD)胚胎的形态发生明显的变化,直径小于对照组胚胎。OCT4~(TE-KD)囊胚内细胞团与滋养层细胞数均显着低于对照组囊胚(183±58 vs 83±39;161±54 vs 73±35;P<0.05)。细胞凋亡相关基因BCL2A1的表达量明显降低,TUNEL检测结果表明,OCT4~(TE-KD)囊胚细胞发生严重的凋亡。移植后第3天获取第9天胚胎进行检测,发现胚胎直径仅为对照组胚胎的1/2,并且大量死亡。收集第6天OCT4~(TE-KD)囊胚滋养层和第8天胚胎进行转录组测序分析,结果表明,特异性敲低猪滋养层中OCT4后,会引起转录组发生一定变化,发生凋亡,最后胚胎无法存活。转录因子Nanog在维持小鼠和人胚胎干细胞的多能性中起重要作用,并且在小鼠胚胎发育中内细胞团的分化起重要作用。然而,关于猪NANOG的功能研究知之甚少。因此,针对NANOG在猪早期胚胎中的表达模式和功能,我们进行了初步研究。首先利用Q-PCR和荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)的方法,证明了NANOG mRNA在从猪1-细胞期到囊胚期胚胎中均有表达。NANOG蛋白在4-细胞胚胎细胞核中开始表达,随后表达量下降,仅在8-细胞胚胎的部分细胞中表达,然而在早期囊胚期和中期囊胚中基本检测不到NANOG蛋白表达。培养体系中添加FBS,将胚胎培养至第8天,发现NANOG蛋白仅在上胚层(Epiblast,EPI)中表达。为了探究NANOG在猪早期胚胎发育中的功能,我们分别对NANOG进行敲低和过表达。结果表明,MII期敲低NANOG,胚胎发育阻滞在8-细胞期,囊胚形成率显着降低(36±2%vs 16±9%;P<0.05)。在4-细胞期通过病毒感染对NANOG进行敲低,发现囊胚阶段没有上胚层的形成,即敲低NANOG影响猪囊胚内细胞团向上胚层分化。这说明NANOG在猪胚胎上胚层形成中是不可缺少的。另一方面,过表达NANOG虽然不影响胚胎卵裂,但同样影响囊胚的形成。这些结果为猪NANOG在多能性调控中的作用研究奠定了基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
张潇,张金枝,刘真真,林艳[4]（2019）在《胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养向胆碱能神经元的分化》一文中研究指出目的在一定条件下对胚胎大鼠脊髓神经干细胞进行体外培养与诱导,观察其向胆碱能神经元的分化情况,并进行鉴定。方法选取孕龄17 d的Wistar大鼠5只,利用胚胎大鼠进行脊髓源神经干细胞分离与培养,并进行神经上皮干细胞蛋白(Nestin)的细胞免疫荧光鉴定。对神经干细胞进行胆碱能神经元定向诱导分化,对照组为单纯诱导培养基,其余各组以诱导培养基为基础,添加生长因子,分为维甲酸(RA)组、音猬因子(SHH)组、SHH+神经营养因子-3(NT-3)组、SHH+RA组,每组1只。细胞诱导分化14 d后,进行细胞免疫荧光染色,观察各组胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞比率与细胞分化情况。结果经诱导分化后,神经干细胞向胆碱能神经元进行分化。培养14 d,大部分神经细胞从神经干细胞球中央迁出,神经细胞间突起发生交错,呈现出网状结构。经免疫荧光检测,可观察到细胞胞质呈现出红色荧光。对照组未发现Ch AT阳性细胞,SHH、RA诱导组可观察到少量的Ch AT阳性细胞,SHH+NT-3组和SHH+RA组则可以观察到较多的Ch AT阳性细胞。经统计学比较,SHH+NT-3组和SHH+RA组Ch AT阳性细胞比率均显着高于对照组、RA组、SHH组,差异均具有统计学意义(P <0.05),且SHH+NT-3组和SHH+RA组组间比较,对照组、RA组、SHH组两两比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论在添加一定生长因子的条件下对胚胎大鼠脊髓神经干细胞进行体外培养,可以诱导其向胆碱能神经元分化。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2019年07期）
董玲凤,张静雯,黄建洲,池霖生,陈棪焜[5]（2019）在《激素替代治疗解冻移植周期中体外培养时间对卵裂期胚胎移植临床结局的影响》一文中研究指出目的研究体外培养时间对激素替代治疗-冻融胚胎移植(HRT-FET)周期中解冻优质卵裂期胚胎临床结局的影响。方法回顾性分析2016年1月1日至2017年12月31日期间在我院生殖中心实施HRT-FET助孕治疗的270个周期的临床资料。根据解冻后不同的体外培养时间分为两组:正常解冻组(168个周期):移植当天早上解冻,解冻后体外培养2~3h移植;提前解冻组(102个周期):移植前1d解冻,体外培养17~18h后移植。比较两组患者的临床妊娠率、种植率、早期流产率。结果两组患者的女方年龄、不孕年限、体重指数(BMI)及子宫内膜厚度等一般资料比较均无显着性差异(P>0.05)。提前解冻组与正常解冻组的临床妊娠率(58.82%vs.58.33%)、胚胎种植率(38.73%vs.39.58%)、早期流产率(11.67%vs.9.18%)比较均无显着性差异(P>0.05)。结论 HRT-FET周期中,延长解冻后优质卵裂期胚胎的体外培养时间不能显着改善临床结局。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2019年01期）
张同殿,张连栋,许丽丽,李和程,马玉波[6]（2018）在《大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法的建立》一文中研究指出目的:建立大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法。方法:取SPF级性成熟(体重200～250 g) SD雄性大鼠3只、雌性6只,根据阴道涂片判断雌鼠所属的发情时期,在其发情期及发情前期按照1∶2合笼,发现精子则记为怀孕0. 5 d(0. 5 dpc)。解剖显微镜下分离出15. 5 dpc胚胎睾丸,一式2份,1份直接进行HE染色,另1份置于软琼脂糖培养系统,37℃、5%CO_2进行培养,分为对照组和hC G组。培养当天为d0,倒置显微镜记录培养睾丸生长情况,每天更换并收集d1、d2、d3、d4培养液及d4的睾丸组织。检测培养液睾酮浓度,培养结束后睾丸固定脱水包埋进行组织学研究。结果:应用阴道涂片方法可高效获得15. 5 dpc大鼠,HE染色提示能准确分离出15. 5 dpc胚胎睾丸。倒置显微镜下可见培养睾丸发育良好,体积逐渐增大,生精小管逐渐增粗、迂曲、清晰。培养液中可检测到睾酮,且睾酮浓度逐渐增高,d3时达到峰值; hC G可刺激睾酮分泌。HE染色可见培养后睾丸组织结构完整,无中央坏死现象发生,组织内有典型的生精小管,可见生殖母细胞、支持细胞及间质细胞;透射电镜下可见生精小管管腔中的生殖母细胞、支持细胞以及管腔外的间质细胞,细胞内的线粒体、内质网等细胞器,未见明显肿胀。结论:大鼠胚胎睾丸组织可在软琼脂糖培养系统中生长良好、保持活性,并向培养液中分泌睾酮。(本文来源于《中华男科学杂志》期刊2018年11期）
曹代男,段好冉,魏玉峰,葛研,龚世平[7]（2018）在《红耳龟胚胎成纤维细胞体外培养》一文中研究指出红耳龟(Trachemysscriptaelegans)是世界上最危险的100种入侵物种之一,该种对环境适应能力极强。目前尚未见有关红耳龟细胞体外培养的研究报道,本研究旨在探索和建立快速稳定的红耳龟胚胎成纤维细胞分离培养体系,为进一步从细胞层面研究红耳龟对极端环境的耐受机制提供材料和方法支撑。本研究取发育至13或14期的红耳龟胚胎,采用酶消化法和差速贴壁法获得红耳龟胚胎成纤维细胞,在体外进行原代培养和传代培养;采用噻唑蓝(MTT)比色法分别绘制红耳龟胚胎成纤维细胞在不同温度、接种浓度和血清浓度下的生长曲线;采用反转录PCR对培养的红耳龟胚胎成纤维细胞进行分子水平的鉴定;采用脂质体转染法对红耳龟胚胎成纤维细胞进行基因转染。结果表明:1)红耳龟胚胎成纤维细胞呈典型的梭形、不规则星形或多边形,达到一定密度时呈多层生长,排列紊乱,随着传代次数的增加,细胞体积增大,梭形细胞有拉长趋势,细胞可至少传至15代;2)红耳龟胚胎成纤维细胞在30～34℃条件下的生长状态良好,其生长速率随着温度的升高而增高;其接种密度不宜低于1.25×104个/cm~2;其最佳血清浓度为10%;3)反转录PCR检测到成纤维细胞标记基因vim和acta2在红耳龟胚胎成纤维细胞中表达;4)脂质体转染法可以介导外源绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白进入到红耳龟胚胎成纤维细胞内表达,转染效率约为30%。本研究成功地在体外分离培养了红耳龟胚胎成纤维细胞,该细胞系可应用于外源基因转染和表达。(本文来源于《动物学杂志》期刊2018年05期）
巴音达拉·夏格德尔,康陈萍,郝卫东[8]（2018）在《矮壮素对体外培养大鼠胚胎生长的迟滞作用及其对GH-IGF-1轴的影响》一文中研究指出目的探索矮壮素引起胚胎生长迟缓的机制。方法取孕9.5天的SD大鼠胚胎进行全胚胎培养。矮壮素染毒剂量依次为0μg/ml、50μg/ml、150μg/ml、500μg/ml。37度旋转培养48小时后测量各剂量组胚胎的卵黄囊直径。用Brown评分法评价胚胎发育指标。用ELISA法测各组胚胎中生长激素GH及其受体GHR,以及胰岛素样生长因子1(IGF-1)的含量。结果 (1)矮壮素在50μg/ml的剂量下能够引起胚胎生长迟缓(P<0.01),但不造成胚胎畸形。在150μg/ml的剂量下,矮壮素能够进一步引起胚胎生长迟缓并造成胚胎发育畸形(P<0.01)。(2)各组胚胎中GH及其受体GHR,IGF-1的含量随矮壮素浓度的升高而升高,呈现剂量反应关系。150μg/ml与500μg/ml剂量组的胚胎中,GH、GHR,以及IGF-1的表达与对照组相比差异显着。(P<0.01)结论 (1)矮壮素能够在50μg/ml的浓度下抑制胚胎生长但不造成胚胎畸形。在较高的剂量(150μg/ml)下能够延缓胚胎的生长并造成胚胎生长畸形。(2)由于矮壮素染毒引起了胚胎中GH、GHR,及IGF-1水平升高。提示矮壮素不是通过直接影响GH-IGFs水平而影响胚胎生长发育的。(本文来源于《中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次中青年学者科技论坛论文摘要》期刊2018-10-19）
颜晓红,李友筑,周卫东,林莉,吴荣锋[9]（2018）在《密闭式体外培养系统对胚胎发育及小鼠学习和记忆能力的影响》一文中研究指出目的探讨密闭式培养系统对胚胎发育及子代小鼠学习和记忆能力的影响。方法建立胚胎密闭式培养体系,分组为密闭培养组和常规培养组(对照组),比较两种培养方式小鼠胚胎的发育和着床情况;Morris水迷宫实验和小鼠跳台实验研究两种培养方式获取的胚胎移植后新生小鼠学习和记忆能力。结果密闭培养组小鼠胚胎发育和着床能力与常规培养组相比无显着差异(P>0.05);Morris水迷宫和小鼠跳台实验结果显示,密闭培养组小鼠胚胎移植后新生小鼠学习和记忆能力与常规培养组无显着差异(P>0.05)。结论密闭培养体系培养的胚胎与常规培养得到的胚胎相比,在胚胎质量、着床能力以及子代小鼠学习和记忆能力方面均无统计学差异。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2018年10期）
贾雪婷,张澍田,黄晓峰[10]（2018）在《运用树脂支撑体外培养系统观察小鼠食管胚胎发育的可行性研究》一文中研究指出目的探讨树脂支撑体外培养系统观察小鼠食管胚胎发育的可行性。方法选用健康C57BL/6J小鼠,分离胚胎期(embryonic day,E)第16.5天(E16.5)小鼠食管组织,置于树脂片和硝酸纤维素膜上,培养于含20%胎牛血清、0.1%维生素C、1%L-谷氨酰胺和1%庆大霉素/链霉素的DMEM液,5%CO2、37℃恒温箱中培养6 d,与在体E16.5d和出生后(postnatal day,PN)第0.5天(PN0.5)食管组织一同进行苏木素-伊红染色,抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体、抗平滑肌肌动蛋白(SMA)抗体和抗肌细胞生成素(myogenin)抗体免疫组织化学染色。结果 (1)培养后食管组织结构完整,上皮层与肌层较培养前明显增厚;(2)培养后食管各层仍广泛分布具有增殖能力的细胞,与E16.5相比PCNA阳性率差异无统计学意义(P=1.000);(3)培养后平滑肌仍保持清晰分层,骨骼肌成肌细胞增多,且分布模式与PN0.5一致。结论树脂支撑体外培养系统可以为探索小鼠食管正常发育过程及疾病的发病机制提供一个较为简便实用的模型。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2018年16期）
胚胎体外培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为提高体外胚胎发育质量和体外胚胎建立胚胎干细胞系效率,研究以N2B27为基础的干细胞培养体系对猪孤雌胚胎体外发育和后续建立胚胎干细胞系的影响。设立3个试验组:PZM-3组,孤雌激活的胚胎全程PZM-3培养体系中培养; N2B27组,孤雌激活的胚胎全程N2B27培养体系中培养; PZM-3-N2B27组,孤雌胚胎在PZM-3培养体系中培养至桑葚胚后更换为N2B27培养体系。结果表明,N2B27组无法获得囊胚,但PZM-3-N2B27组胚胎可正常发育至囊胚,囊胚率未显着提高,但囊胚细胞总数显着提高(P<0.05)。PZM-3-N2B27组获得孤雌囊胚用于建立猪胚胎干细胞系,显着提高原代克隆形成率(P<0.05),获得猪胚胎干细胞系呈碱性磷酸酶阳性,表达Oct4、Sox2和Nanog等多能性基因。结果表明,采用PZM-3和N2B27培养体系结合获得的猪孤雌囊胚利于猪胚胎干细胞系建立。研究为进一步优化猪胚胎体外培养体系,获得初始态胚胎干细胞系提供参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胚胎体外培养论文参考文献
[1].严继贵,赵正梅,盛夕曼,杨宇清.IL-10对体外培养胚胎大鼠中脑NSCs增殖分化的影响[J].长江大学学报(自然科学版).2019
[2].余卓然,张雪,高放,安铁洙,孔庆然.猪胚胎体外培养体系优化对胚胎干细胞建系的影响[J].东北农业大学学报.2019
[3].郭诗萌.猪早期胚胎发育中体外培养体系优化及OCT4、NANOG功能研究[D].东北农业大学.2019
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[8].巴音达拉·夏格德尔,康陈萍,郝卫东.矮壮素对体外培养大鼠胚胎生长的迟滞作用及其对GH-IGF-1轴的影响[C].中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次中青年学者科技论坛论文摘要.2018
[9].颜晓红,李友筑,周卫东,林莉,吴荣锋.密闭式体外培养系统对胚胎发育及小鼠学习和记忆能力的影响[J].生殖医学杂志.2018
[10].贾雪婷,张澍田,黄晓峰.运用树脂支撑体外培养系统观察小鼠食管胚胎发育的可行性研究[J].临床和实验医学杂志.2018
论文知识图
