鸭腺病毒3型Hexon基因的克隆及SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

论文摘要

鸭腺病毒3型（duck adenovirus type 3,DAdV-3）是近年来我国新发鸭源禽腺病毒。本试验根据NCBI数据库中DAdV-3 Hexon基因特征,设计特异性引物,获得番鸭源DAdV-3福建株（命名为W1FJ株）Hexon基因全长,明确其分子特征,并基于此建立检测DAdV-3的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果表明,克隆的W1FJ株Hexon基因全长为2 814 bp,编码937个氨基酸,和DAdV-3（CH-GD-12-2014株）核苷酸同源性为100%,但和鸭源禽腺病毒B型（也称鸭腺病毒2型,DAdV-2,GR株）核苷酸同源性仅为76.6%。Hexon蛋白遗传进化分析表明,W1FJ株和CH-GD-12-2014株在遗传进化上形成一个独立的分支,与鸭源禽腺病毒B型和鹅源禽腺病毒A型（goose aviadenovirus A）在遗传进化上明显不同,建议将其命名为鸭源禽腺病毒C型（duck aviadenovirus C）。建立的检测DAdV-3的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,灵敏度高,最低检测限为61拷贝/μL;特异性强,和鸭群常见传染病病原均无交叉反应,扩增产物的熔解曲线只出现1个特异性单峰,Tm值为（81.48±0.25）℃;重复性好,组内和组间重复试验变异系数分别为0.49%～1.64%和0.67%～2.40%。本试验为DAdV-3的科学分类和后续开展DAdV-3感染的流行病学调查及致病机理研究奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 毒株和菌株
•   1.2 试剂
•   1.3 Hexon基因克隆与序列分析
•     1.3.1 Hexon基因分段扩增
•     1.3.2 Hexon基因序列分析
•     1.3.3 相关毒株信息
•   1.4 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
•     1.4.1 实时荧光定量PCR的引物设计
•     1.4.2 反应条件优化
•     1.4.3 标准曲线的建立
•     1.4.4 敏感性试验
•     1.4.5 特异性试验
•     1.4.6 重复性试验
•   1.5 临床样品检测
• 2 结果
•   2.1 Hexon基因的特征
•   2.2 优化后的实时荧光定量PCR反应条件
•   2.3 实时荧光定量PCR标准曲线的建立
•   2.4 敏感性试验
•   2.5 实时荧光定量PCR的特异性分析
•   2.6 实时荧光定量PCR的重复性
•   2.7 临床样品的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈翠腾,万春和,程龙飞,傅光华,施少华,刘荣昌,陈珍,朱春华,黄瑜

关键词: 鸭腺病毒型,基因,实时荧光定量方法

来源: 中国兽医学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室

基金: 现代农业产业体系建设专项资金资助项目(CARS-42),福建省属公益类科研院所基本科研专项资助项目(2017R1023-6),福建省农科院特色现代农业产业发展自由探索科研课题资助项目(AA2018-4),福建省财政专项资助项目(FJFS-2017)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.06.11

页码: 1104-1112

总页数: 9

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