山羊ATF6基因重组慢病毒干扰载体的构建及鉴定

论文摘要

为了研究ATF6通路介导的山羊胎盘滋养层细胞（goat trophoblast cell,GTC）凋亡的作用机制,需要构建激活转录因子6（ATF6）基因慢病毒干扰载体用于试验。采用RNA干扰技术,设计合成以山羊ATF6基因CDS区为靶点的shRNA,构建重组慢病毒载体、慢病毒包装、慢病毒转染、RT-qPCR和Western blot等方法,筛选出干扰效率达60%的shRNA干扰片段,构建出可用于今后ATF6通路相关研究的重组慢病病毒干扰载体,为山羊妊娠相关研究提供材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 细胞、菌株和质粒
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 设计合成山羊ATF6基因CDS区靶向shRNA
•     1.2.2 获取shRNA双链
•     1.2.3 pCD513B-U6质粒的线性化
•     1.2.4 重组干扰慢病毒载体构建
•       1.2.4.1 shRNA双链与线性化pCD513B-U6的连接及转化
•       1.2.4.2 重组干扰慢病毒载体的提取、鉴定及制备
•     1.2.5 山羊ATF6基因重组干扰慢病毒包装
•       1.2.5.1 慢病毒包装质粒的酶切鉴定及制备
•       1.2.5.2 重组干扰慢病毒包装
•     1.2.6 山羊ATF6基因重组干扰慢病毒效率鉴定
•       1.2.6.1 慢病毒转染EEC细胞
•       1.2.6.2 干扰效率鉴定
• 2 结果
•   2.1 pCD513B-U6质粒的双酶切鉴定结果
•   2.2 ATF6重组干扰慢病毒载体的PCR鉴定
•   2.3 ATF6重组干扰慢病毒载体的测序鉴定
•   2.4 慢病毒包装质粒的酶切鉴定
•   2.5 慢病毒包装
•   2.6 慢病毒干扰效率鉴定
•     2.6.1 干扰慢病毒转染EEC
•     2.6.2 qRT-PCR检测结果
•     2.6.3 Western blot检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 付饶,李会玲,王磊,杨迪琦,温鑫,靳亚平

关键词: 激活转录因子,内质网应激,短发夹,慢病毒

来源: 动物医学进展 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西北农林科技大学动物医学院,陕西省畜牧技术推广总站

基金: 国家自然科学基金项目(31372499,31772817)

分类号: S827;Q78

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.05.005

页码: 22-27

总页数: 6

文件大小: 1611K

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