抗牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

论文摘要

目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheities virus,IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法采用超速离心纯化的IBRV全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫后血清抗体呈阳性的小鼠脾细胞,通过融合剂PEG与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接免疫荧光法(IFA)筛选杂交瘤细胞,并制备腹水,分析单抗的生物学特性。结果筛选出1株稳定分泌抗IBRV gD蛋白单抗的杂交瘤细胞,命名为3C1。单抗的重链为IgG1亚类,轻链为kappa链;上清和腹水效价分别为1∶40和1∶12 800;单抗可与IBRV及gD重组蛋白分别在相对分子质量71 000和96 000处发生特异性反应,可与感染IBRV的MDBK细胞发生特异性结合,产生荧光。结论成功制备了抗IBRV gD蛋白的单克隆抗体,为深入研究gD蛋白功能及IBR的临床诊断方法筛选等提供了数据材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞、质粒及毒株
•   1.2 实验动物
•   1.3 主要试剂
•   1.4 免疫原的制备
•   1.5 免疫原的鉴定
•   1.6 重组质粒的构建
•   1.7重组蛋白的表达
•   1.8 动物免疫
•   1.9 细胞融合、筛选及腹水制备
•   1.10抗原片的制备
•   1.1 1 单克隆抗体的初步鉴定
•     1.1 1.1 亚类鉴定
•     1.1 1. 2 效价测定
•     1.1 1. 3 间接免疫荧光分析
•     1.1 1. 4 Western blot鉴定
• 2 结果
•   2.1 免疫原的鉴定
•   2.2 重组质粒的鉴定
•   2.3 重组蛋白的鉴定
•   2.4 杂交瘤细胞株的筛选
•   2.5 单克隆抗体的鉴定
•     2.5.1 亚类
•     2.5.2 效价
•     2.5.3 间接免疫荧光分析
•     2.5.4 Western blot分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 贾晓雪,赵微,倪宏波

关键词: 牛传染性鼻气管炎病毒,蛋白,单克隆抗体

来源: 中国生物制品学杂志 2019年07期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 黑龙江八一农垦大学动物科技学院

基金: 黑龙江八一农垦大学校级研究生创新(YJSCX2018-Y27)

分类号: S852.4

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002550

页码: 777-780+785

总页数: 5

文件大小: 260K

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