导读:本文包含了穿梭载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,瘟病,杆菌,基因,抗药,转染,质粒。
穿梭载体论文文献综述
范丽娟,苏奇,李建龙,高曦[1]（2018）在《miR-181a重组穿梭载体的构建及其对人骨肉瘤细胞迁移侵袭能力的影响》一文中研究指出目的探讨miR-181a对人骨肉瘤细胞迁移侵袭能力的影响。方法通过构建miR-181a重组穿梭载体,并将其转染到人骨肉瘤细胞MG63中,以Transwell实验检测人骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力。结果 pGV314-miR-181a重组穿梭载体组相对于空白对照组及pGV314空载体组,细胞迁移和侵袭的能力获得增强,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-181a能显着提升人骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力。(本文来源于《福建医药杂志》期刊2018年01期）
李建,张磊,张媛,彭国瑞,王秀丽[2]（2017）在《大肠埃希氏菌-胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建》一文中研究指出合成胸膜肺炎放线杆菌质粒pKMA2425上长度为126 bp及2214 bp的2个DNA片段,克隆到大肠埃希氏菌质粒pGSI中,获得重组质粒pGSIA。PCR扩增pTKRED上的大观霉素抗性基因及线性化的pGSIA(126 bpDNA片段-pGSI-2214 bpDNA片段),连接,电转化胸膜肺炎放线杆菌,在大观霉素的选择压力下筛选鉴定到连接正确的质粒,命名为pGSIAS。pGSIAS测序结果符合预期。在大观霉素的选择压力下,含有pGSIAS的胸膜肺炎放线杆菌血清1~10型菌株均生长良好;在氨苄青霉素的选择压力下,含有pGSIAS的大肠埃希氏菌生长良好。结果表明本研究构建的大肠埃希氏菌-胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体pGSIAS序列正确,在胸膜肺炎放线杆菌及大肠埃希氏菌中均能复制并表达质粒上的相关基因。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2017年08期）
刘柏含,牛银杰,赵丽丽,弥春霞,陈洪岩[3]（2017）在《鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析》一文中研究指出目的本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础。方法选择已经证实的US区域的US2-SORF3、US7-US8和UL区域中的UL15-UL18的非编码区作为插入位点构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,经细胞同源重组,收集细胞上清,进行噬斑筛选及纯化。结果成功构建了叁个带有EGFP标签的穿梭载体,p Blusecript II SK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用p UC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑。结论拯救鸭瘟重组毒的研究中,p Blusecript II SK载体可能不是最佳的适用载体,也可能是插入位点为病毒复制的必须区。(本文来源于《实验动物科学》期刊2017年03期）
刘柏含,牛银杰,赵丽丽,孙畅,尹海畅[4]（2016）在《鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析》一文中研究指出鸭瘟病毒为疱疹病毒科成员,其基因组约为150KB,含有多个复制非必须区。本实验选择已经证实的US2-SORF3、US7-US8和UL15-UI18的非编码区作为插入位点构建构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,收毒,进行噬斑筛选。结果以pBlusecriptⅡSK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用pUC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑。说明拯救鸭瘟重组毒的研究中,pBlusecriptⅡ载体可能不是最佳的适用载体,为以后重组病毒的拯救提供实验依据。(本文来源于《中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集》期刊2016-10-19）
罗声栋,卢姗姗,胡燕,王涛,于永慧[5]（2016）在《贝氏柯克斯体穿梭载体构建及转化方法建立》一文中研究指出目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan~R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-Kan~R串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果:构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论:建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2016年05期）
赵天宇,赵佳琪,范业宁,马春平,张东红[6]（2016）在《pIRES2-MLAA34-EGFP穿梭载体的构建及表达》一文中研究指出目的构建p IRES2-MLAA34-EGFP重组质粒,并对其进行原核诱导表达。方法用RT-PCR的方法从U937细胞中提取MLAA-34基因,利用酶切、T4连接等分子生物学技术将MLAA-34目的基因克隆至p IRES2-EGFP表达载体中,经PCR、酶切等技术对构建的重组表达载体p IRES2-MLAA34-EGFP进行鉴定后,转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达。结果扩增出MLAA-34全长基因1 014 bp,构建了p IRES2-MLAA34-EGFP重组质粒,经PCR和双酶切鉴定,与预期大小一致。重组质粒在大肠杆菌中经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。结论成功构建了p IRES2-MLAA34-EGFP重组质粒,并使其在大肠杆菌中高效表达。(本文来源于《吉林医药学院学报》期刊2016年03期）
曾娟娟,王磊,赵迪,吕阳,王蕾[7]（2015）在《绿色荧光蛋白穿梭载体的构建及其在嗜酸乳杆菌中的应用》一文中研究指出为深入研究嗜酸乳杆菌的作用机理,以温敏型穿梭载体pSET4s为基本骨架,将绿色荧光蛋白(GFP)和嗜酸乳杆菌上、下游同源臂插入该载体,构建GFP标记的穿梭表达载体pSET4s-P1-GFP-P2。利用电转化方法将穿梭表达载体pSET4s-P1-GFP-P2转化入嗜酸乳杆菌,通过抗性和温度双重筛选获得能稳定表达GFP的重组嗜酸乳杆菌,将Western blotting和荧光显微镜观察验证的重组菌命名为ΔMG6243(GFP)。利用荧光显微镜观察和平板计数的方法对重组菌进行遗传稳定性和生物学特性研究。结果显示,重组菌在蓝光激发下可见明显绿色荧光,连传10代仍可见明显荧光,与野生菌相比,其生长特性、酸碱盐耐受性均无显着差别。结果表明,本试验已成功构建稳定表达GFP基因的重组嗜酸乳杆菌,利用温敏型穿梭载体pSET4s实现了外源基因在嗜酸乳杆菌中非抗性、整合型表达,为嗜酸乳杆菌基因重组菌的构建奠定了基础,同时GFP的标记作用也为嗜酸乳杆菌在动物体内分布、定植规律和作用机理创造了可行的条件。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2015年10期）
李莉莉,王湛,周玉柏,张芳,沈思嗣[8]（2015）在《带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定》一文中研究指出构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA)。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两侧插入TKL的同源序列。pZL-EGFP与MVA病毒共转染BHK-21细胞后经10代传代,一次噬斑筛选以获得携带有外源基因且EGFP已被删除的rMVA。最终获得的rMVA通过PCR和Western Blot方法对pZL-EGFP的功能进行鉴定。成功构建出具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,包装获得的重组痘苗病毒可在传代过程中自动删除标记基因EGFP。基因删除未影响重组病毒的活力,外源蛋白的表达具有良好的稳定性。pZL-EGFP能与MVA病毒在BHK-21细胞内发生同源重组并包装出rMVA,其携带的标记基因可在病毒传代过程中通过分子内同源重组被自动删除,基因删除不影响重组病毒的活力及外源基因的表达,这为进一步的研究奠定了坚实的基础。(本文来源于《病毒学报》期刊2015年05期）
王洪成,邵蔚蓝[9]（2015）在《一种新型无抗药基因的粟酒裂殖酵母-细菌穿梭载体》一文中研究指出筛选标记是质粒载体所必备的基本元件。抗药基因是微生物转基因的有效筛选标记,目前所使用的在不同微生物和大肠杆菌之间共用的穿梭载体都含有用作筛选标记的抗药基因。通过这些载体转基因可能导致抗药基因的扩散,其生物安全性问题长久以来一直是限制微生物转基因技术推广应用的关键因素。营养缺陷型筛选标记可以避免抗药基因的传播,具有生物安全性。但是自然环境或自然培养基中富含氨基酸、核苷酸等营养成分,使相关的营养缺陷型筛选标记不能够维持筛选压力。同时,由于细菌易于回复突变,营养缺陷型筛选标记在细菌如大肠杆菌中未能有效运用。谷氨酰胺:6-磷酸果糖氨基转移酶(Gfa)又称6-磷酸葡萄糖胺合成酶(Glm);它是一种胞内酶,催化底物谷氨酰胺和6-磷酸果糖形成6-磷酸葡萄糖胺和谷氨酸,即氨基己糖合成代谢途径中的第一步反应。Gfa几乎存在于每个物种和组织中,是生命活动所必需的。我们首次用实验证明葡萄糖胺合成酶基因可以是一种既适用于真菌又适用于细菌的生物安全性的筛选标记基因。我们敲除了大肠杆菌(Escherichia coli)的Gfa编码基因glmS和粟裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的Gfa编码基因gfa1,构建了两种gfa缺失菌株。在粟酒裂殖酵母常用表达载体pREP3X基础上,通过改造其筛选标记基因,构建了一个含新型筛选标记基因gfa表达盒的新质粒pGFA。该pGFA质粒使得gfa缺陷型的大肠杆菌和粟酒裂殖酵母都能在富营养培养基(TB或YES)上发挥筛选功能,从而使得整个克隆表达过程完全摆脱了对抗生素筛选的依赖。优化后的穿梭质粒具有序列长度短、易于转化操作、不含有抗药基因的特点,从而为重组酶的生物安全性工业化生产提供了有利条件。(本文来源于《2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会论文摘要集》期刊2015-08-21）
郭佳,尹衍新,蒋明,于丽华,蒋韵[10]（2015）在《人C-Met胞外区慢病毒穿梭载体构建及在293T细胞中的表达》一文中研究指出本研究构建含人肝细胞生长因子受体(C-Met)胞外区基因的慢病毒表达载体,并将其转染293T细胞,真核表达并纯化获得人C-Met胞外段蛋白。采用RT-PCR扩增人C-Met胞外区(ED)基因,构建慢病毒表达载体p RRL-CMV-ED,磷酸钙法转染293T细胞,RT-PCR及Western blot法检测ED基因在293T细胞中mRNA的转录和蛋白表达。PCR扩增及测序结果表明成功构建了p RRL-CMV-ED慢病毒表达载体,PCR扩增的目的基因大小为2 700bp左右;转染p RRL-CMV-ED的293T细胞上清经镍柱亲和纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在105kD处有明显蛋白条带;Western及ELISA结果显示,纯化蛋白为C-Met胞外区蛋白且能与肝细胞生长因子(HGF)特异性结合。本研究结果可能为制备C-Met单克隆抗体以及筛选阻断HGF/C-Met信号通路的中和抗体奠定基础。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2015年02期）
穿梭载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
合成胸膜肺炎放线杆菌质粒pKMA2425上长度为126 bp及2214 bp的2个DNA片段,克隆到大肠埃希氏菌质粒pGSI中,获得重组质粒pGSIA。PCR扩增pTKRED上的大观霉素抗性基因及线性化的pGSIA(126 bpDNA片段-pGSI-2214 bpDNA片段),连接,电转化胸膜肺炎放线杆菌,在大观霉素的选择压力下筛选鉴定到连接正确的质粒,命名为pGSIAS。pGSIAS测序结果符合预期。在大观霉素的选择压力下,含有pGSIAS的胸膜肺炎放线杆菌血清1~10型菌株均生长良好;在氨苄青霉素的选择压力下,含有pGSIAS的大肠埃希氏菌生长良好。结果表明本研究构建的大肠埃希氏菌-胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体pGSIAS序列正确,在胸膜肺炎放线杆菌及大肠埃希氏菌中均能复制并表达质粒上的相关基因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
穿梭载体论文参考文献
[1].范丽娟,苏奇,李建龙,高曦.miR-181a重组穿梭载体的构建及其对人骨肉瘤细胞迁移侵袭能力的影响[J].福建医药杂志.2018
[2].李建,张磊,张媛,彭国瑞,王秀丽.大肠埃希氏菌-胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建[J].中国兽药杂志.2017
[3].刘柏含,牛银杰,赵丽丽,弥春霞,陈洪岩.鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析[J].实验动物科学.2017
[4].刘柏含,牛银杰,赵丽丽,孙畅,尹海畅.鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析[C].中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集.2016
[5].罗声栋,卢姗姗,胡燕,王涛,于永慧.贝氏柯克斯体穿梭载体构建及转化方法建立[J].生物技术通讯.2016
[6].赵天宇,赵佳琪,范业宁,马春平,张东红.pIRES2-MLAA34-EGFP穿梭载体的构建及表达[J].吉林医药学院学报.2016
[7].曾娟娟,王磊,赵迪,吕阳,王蕾.绿色荧光蛋白穿梭载体的构建及其在嗜酸乳杆菌中的应用[J].中国畜牧兽医.2015
[8].李莉莉,王湛,周玉柏,张芳,沈思嗣.带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定[J].病毒学报.2015
[9].王洪成,邵蔚蓝.一种新型无抗药基因的粟酒裂殖酵母-细菌穿梭载体[C].2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会论文摘要集.2015
[10].郭佳,尹衍新,蒋明,于丽华,蒋韵.人C-Met胞外区慢病毒穿梭载体构建及在293T细胞中的表达[J].生物医学工程学杂志.2015
论文知识图
