新型耐热β-1,4-木糖苷酶的重组表达及酶学性质

论文摘要

【目的】拟对来源于热解纤维素果汁杆菌的新型β-木糖苷酶基因（CoXyl B）进行重组表达和酶学性质研究。【方法】在大肠杆菌系统中成功表达CoXyl B基因,并通过镍柱亲和层析、强阴离子交换和凝胶层析等纯化方法获得纯酶。【结果】对CoXyl B酶学性质的研究结果显示,在以4-对硝基苯酚-β-D-木糖苷为底物时,该酶的最适反应温度为90℃,最适反应pH为6.0。在40–70℃范围内CoXyl B酶活较高且比较稳定。在pH 5.0–6.0之间,70℃孵育1 h后,CoXyl B的相对酶活仍保留80%以上。Ag+、高浓度的SDS和PMSF对酶活力的抑制作用较显著,而高浓度Mg2+、Li+和EDTA对酶活力的激活作用较为明显。CoXyl B的kcat和Km值分别为5.0×10–3s–1和1.9 mmol/L。薄层层析色谱显示CoXyl B具有降解木二糖、木三糖和木四糖的能力。【结论】本研究鉴定出CoXyl B为一种新型的极端耐热木糖苷酶,CoXyl B的酶学性质研究将为其在食品热加工以及生物降解领域中的应用提供参考。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 质粒和菌株:
•     1.1.2 试剂:
•   1.2 重组酶的异源表达
•   1.3 重组酶的纯化
•   1.4 重组酶的酶活测定方法
•   1.5 重组酶的最适温度、热稳定性、最适pH和pH稳定性测定
•     1.5.1 最适温度测定:
•     1.5.2 最适pH测定:
•     1.5.3 热稳定性测定:
•     1.5.4 pH稳定性测定:
•   1.6 金属离子和化学试剂对酶活的影响测定
•   1.7 动力学参数测定
•   1.8 薄层层析色谱 （TLC） 水解产物分析
•   1.9 重组Co Xyl B生物学信息分析
• 2 结果和分析
•   2.1 β-木糖苷酶Co Xyl B的同源比对分析
•   2.2 重组Co Xyl B的异源表达与纯化
•   2.3 重组Co Xyl B酶学性质分析
•     2.3.1 温度和pH对酶活的影响:
•     2.3.2金属离子与化学试剂对Co Xyl B的影响:
•     2.3.3 Co Xyl B动力学参数的测定:
•     2.3.4 Co Xyl B水解产物分析:
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄颖,姚雪妍,刘腾飞,米硕甫,孙丽超,辛凤姣

关键词: 热解纤维素果汁杆菌属,极端耐热,木糖苷酶,重组表达,酶学性质

来源: 微生物学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 中国农业科学院农产品加工研究所,北京中医药大学,中国科学院过程工程研究所

基金: 国家重点研发计划(2017YFD0400204),国家自然科学基金(31571963,31700701)~~

分类号: Q55

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180263

页码: 689-699

总页数: 11

文件大小: 962K

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