导读:本文包含了孤雌发育论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:囊胚,胚胎,胞嘧啶,白蚁,细胞,甲基,卵泡。
孤雌发育论文文献综述
简洪禹,张志鹏,麻朝晖,董焕声,潘庆杰[1]（2019）在《不同繁殖季节驴卵母细胞体外成熟与孤雌激活胚胎发育情况研究》一文中研究指出为了研究驴在繁殖与非繁殖季节卵母细胞体外成熟与孤雌激活胚胎发育情况,试验以3—9月份为繁殖季节,其他月份为难繁殖季节,从屠宰场采集驴卵巢,统计分析不同繁殖季节卵巢形状的差异,采用抽吸法和切割法获取卵母细胞,并对卵母细胞进行体外成熟诱导,对成熟的卵母细胞进行孤雌激活,分析激活胚胎的发育情况。结果表明:繁殖季节与非繁殖季节卵巢形状差异明显。在繁殖季节,卵巢内卵泡液增多且卵泡体积变大,导致卵巢体积增大,总卵泡、中卵泡、小卵泡数量显着多于非繁殖季节(P<0.05);繁殖季节卵母细胞回收率为85.38%,非繁殖季节卵母细胞回收率为72.18%,两者差异显着(P<0.05);繁殖季节驴卵母细胞体外培养成熟率为50.10%,非繁殖季节时成熟率为34.74%,两者差异显着(P<0.05);繁殖季节卵裂率为31.0%,非繁殖季节卵裂率为29.0%,两者无显着差异(P>0.05)。说明繁殖季节卵母细胞体外成熟情况优于非繁殖季节,非繁殖季节较难获得成熟卵母细胞,但是获得成熟卵母细胞激活发育后无明显差异。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年20期）
张曼玲,金永,赵丽华,王晨宇,刘曼菱[2]（2019）在《生长因子对猪卵母细胞成熟及孤雌胚胎发育的影响》一文中研究指出主要探讨了叁种生长因子对猪卵母细胞成熟及孤雌胚胎发育及多能基因表达的影响,结果表明:成熟液中添加生长因子后可显着提高卵母细胞成熟率;成熟液和发育液中都添加生长因子后胚胎卵裂率、囊胚率及胚胎质量均显着升高;添加生长因子可极显着提高孤雌囊胚中多能基因的表达.本研究为提高猪卵母细胞成熟及胚胎早期发育奠定了基础,进而为获得更利于分离培养猪胚胎干细胞系的囊胚材料提供了参考.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
高伟[3]（2019）在《抗坏血酸通过TET蛋白促进小鼠孤雌胚胎发育的研究》一文中研究指出TET(ten-eleven translocation)蛋白最初以在21世纪早期急性髓细胞白血病患者中鉴定的染色体易位命名,是存在于生物体内的一种α-酮戊二酸(α-KG)和Fe~(2+)依赖的双加氧酶,在DNA去甲基化的过程具有催化作用的酶,对胚胎的发育起关键性作用。小鼠的精子和卵子结合后,会发生一系列的表观遗传重编程,其中很重要的DNA甲基化会发生一个改变,甲基化状态的改变主要发生在父本基因组上,发生去甲基化的一个过程。5mC是全基因组甲基化的代表性胞嘧啶,若基因发生去甲基化的过程,基因组5mC会氧化成为5hmC。而5mC和5hmC的表达量作为总体甲基化的评价标准。以上5mC会氧化成为5hmC的过程主要是TET蛋白主要利用氢键结合以及5mC嘧啶环的堆积作用将5mC转化为5hmC。抗坏血酸(Vc)是一种Fe~(2+)和α-KG依赖性双加氧酶的辅助因子,是一种TET蛋白的激动剂,能够刺激TET蛋白的表达;而DMOG(二甲基烯丙基甘氨酸)是2-氧戊二酸辅因子的结构类似物,可作为2-氧戊二酸(2-OG)依赖性双加氧酶的小分子抑制剂,是一种TET蛋白的抑制剂,能够抑制TET表达。表观遗传修饰与小鼠的早期胚胎发育潜力具有很大的相关性,DNA甲基化被认为是参与印记的表观遗传修饰之一,被认为是一个主要的表观遗传修饰。甲基化印迹的异常可能孤雌胚胎发育失败的一部分原因。为了研究TET蛋白在孤雌胚胎发育中的作用,在早期胚胎发育期间的培养基中添加Vc和DMOG进行处理。结果显示,Vc处理可提高孤雌胚胎的囊胚率(26.57±0.53%与20.73±0.46相比)。可以显着的提高孤雌胚胎的发育能力。相比之下,DMOG降低了孤雌胚胎的囊胚率(11.18±0.13%与20.73±0.46相比),对孤雌胚胎的发育起到抑制作用。我们利用实时定量PCR和免疫荧光染色的方法对孤雌胚胎中5mC和5hmC的表达以及叁种TET蛋白的表达进行了分析,实时定量PCR和免疫荧光染色结果显示,与正常受精(Con)胚胎相比,孤雌胚胎(PA)中TET1,TET2和TET3表达都显着降低。我们的结果表明,在孤雌胚胎中Vc刺激了TET,促进了蛋白的表达。而用DMOG处理显着抑制TET蛋白的表达。此外,在孤雌胚胎中用Vc处理后5hmC表达增加,其促进5mC向5hmC的转化,而DMOG处理的时候其抑制作用。总之,这些结果表明在孤雌胚胎发育过程中TET蛋白的表达起介导5mC向5hmC转化的重要作用。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
罗亚琰[4]（2019）在《亚甲蓝对猪卵母细胞体外成熟及其孤雌胚发育的影响》一文中研究指出亚甲蓝(Methylene blue,MB)是一种广泛应用于生物和医学领域的一种吩噻嗪盐,研究表明MB在线粒体中可以充当电子载体增强呼吸链功能,减轻细胞线粒体损伤、改善氧化应激和提高线粒体中ATP生成。目前尚未见亚甲蓝对生殖细胞保护作用的研究报道。因此,本研究旨在探讨亚甲蓝对猪卵母细胞体外成熟(In Vitro Maturation,IVM)和孤雌胚胎体外发育的影响,为进一步优化猪卵母细胞体外成熟体系提供理论依据。首先探讨IVM液添加不同浓度MB(对照组:0nM;试验组:10nM、50nM、100nM、200nM)处理40h-44h后对猪卵母细胞的影响。通过统计卵丘细胞扩展情况及卵母细胞第一极体排出率、MⅡ期卵母细胞孤雌激活后早期胚胎卵裂率、囊胚率,得出较优MB处理浓度。结果显示,体外成熟培养液中添加10nmol/L浓度MB组的卵丘细胞扩展分值(2.588±0.018)和卵母细胞第一极体排出率(69.73±3.56)显着高于0nmol/L对照组(2.372±0.029、60.13±3.31)(P<0.05);随后,孤雌激活早期胚胎发育后显示,10nmol/L处理组的卵裂率(84.24±1.7)和囊胚率(34.54±3.56)均显着高于对照组0nmol/L(75.71±3.24、25.69±3.85)(P<0.05),但其余各添加组和对照组的卵裂率和囊胚率相比无显着差异(P>0.05)。其次根据各浓度MB的处理效果,选择10nmol/L的MB浓度处理猪卵母细胞44h-46h,进一步探讨其可能的作用机制。结果发现:相比0nmol/L对照组,10nmol/L的MB处理组可以显着降低卵母细胞内活性氧的荧光强度(12.8±3.28VS 7.5±3.19,P<0.05);10nmol/L MB处理组可以显着提高卵母细胞内总谷胱甘肽含量(13.95±2.78 VS 11.86±1.28,P<0.05)和线粒体膜电位水平(13.42±3,98VS 20.7±2.67,P<0.05)。并在对卵母细胞母系基因的表达中发现,添加10nmol/L的MB处理组可以显着提高卵母细胞内CyclinB1、SHMT2、PGC1α的表达(P<0.05);对C-MOS、CDC2、ELASTIN的表达作用效果不显着(P>0.05)。研究结果表明:(1)在猪卵母细胞体外成熟和孤雌胚发育阶段,添加10nmol/L亚甲蓝能有效促进卵母细胞的成熟及后续的孤雌胚胎发育。(2)亚甲蓝可能通过以下途径发挥作用以促进卵母细胞成熟:促进卵丘细胞增殖、扩展、降低细胞凋亡,维持正常的生理活动;清除卵母细胞内自由基,提高卵母细胞内氧化系统的抗氧化能力;提高卵母细胞内线粒体活性,使线粒体增加更多的生物合成,以便于提供卵母细胞成熟过程中所需的物质,提高其质量。(本文来源于《贵州大学》期刊2019-05-01）
姜文杰,李英花,姚雪瑞,赵予晗,高青山[5]（2018）在《冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响》一文中研究指出为研究持续不同时间的冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响,本研究以猪孤雌胚胎为材料,采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR技术检测不同时间的冷(31℃)、热应激(41℃)处理对猪孤雌胚胎发育后囊胚发育率、细胞数、细胞凋亡率、自噬相关基因及细胞凋亡相关基因mRNA转录水平的影响。结果显示,热应激12h后囊胚发育率显着低于对照组(P<0.05),冷应激18h后囊胚发育率显着低于对照组(P<0.05),而冷应激组囊胚发育率高于热应激组。热应激12h和冷应激18h后均导致囊胚内细胞数显着低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率显着高于对照组(P<0.05),且冷应激组的细胞凋亡率低于热应激组。冷、热应激组自噬相关蛋白LC3的表达均高于对照组;冷、热应激中自噬相关基因Atg6和Atg8的表达均极显着高于对照组(P<0.01),Lamp2基因的表达均显着高于对照组(P<0.05),热应激组中的Atg6和Atg8基因的表达高于冷应激组。通过检测细胞凋亡相关基因mRNA的转录水平发现,冷、热应激组中细胞凋亡相关基因Bak、Casp-3、Fas的表达均极显着高于对照组(P<0.01),Bcl-xl基因的表达均显着低于对照组(P<0.05)。综上,猪孤雌胚胎对冷应激(31℃)的耐受性比对热应激(41℃)强,且热应激可诱导体外培养的猪孤雌胚胎自噬及凋亡相关基因的表达,从而降低孤雌胚胎发育的能力。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年09期）
郭润发,宋玉然,海棠,周琪,周佳勃[6]（2017）在《生理浓度氨基酸对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响》一文中研究指出猪作为模式动物由来已久,相比小鼠等模式生物在生理学、解剖学和疾病发生机理等方面都与人类极为相似,使其比其他动物模型在生物和医学研究领域中都具有更为重要的研究和应用价值。体外成熟卵母细胞是进行转基因猪、克隆猪等研究的重要支持,卵母细胞的质量和胚胎发育能力密切相关。但是猪的体外成熟卵母细胞在成熟和受精的能力上都比体内差,这说明体外成熟环境与体内生理环境下存在较大差异~([1])。随着科学技术手段的发展,研究人员发(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2017年13期）
朱秀生[7]（2017）在《LPA对猪孤雌胚胎早期发育及多能性标志基因的影响》一文中研究指出猪作为我国的大家畜,对我国的农业经济发展起着重要的作用。目前来说获得猪多能干细胞的主要方法是通过体外分离和重编程,但是存在的主要问题都是没有获得“naive”状态的猪ES细胞。为了进一步促进猪胚胎早期发育,获得更利于分离培养获得naive多能性状态的胚胎干细胞(ES)的囊胚材料,我们在本实验探讨Lysophosphatidic acid(LPA)对猪孤雌胚胎早期发育以及相关多能性基因表达的影响并对其信号通路进行了初步探讨。以期为下一步分离获得猪ES获得良好的材料。研究结果总结如下:1.LPA(Lysophosphatidic acid)对猪孤雌胚胎早期发育以及相关胚层的影响。首先对LPA作用的浓度进行探索,从囊赔率、卵裂率以及囊胚细胞数来看,发现50μM的LPA处理浓度要显着优于其他处理组,并且囊胚质量也优于对照组。为了进一步确认前面的试验结果,我们从蛋白水平选用了 OCT4抗体进行了免疫荧光染色,结果显示,50μM的LPA处理浓度免疫荧光强度也优于其他实验组和对照组,所以确定了 50μM的LPA处理浓度进行了后续的实验。随后探索了LPA对原始内胚层、原始外胚层以及滋养层标志基因的影响。QRT-PCR结果显示:LPA对原始外胚层标志基因没有显着影响,但是LPA可以显着上调滋养层标志基因的表达并且可以极显着地下调原始内胚层标志基因的表达。以上结果表明,LPA可以促进早期猪孤雌囊胚的发育,并且对猪早期胚胎原始内胚层有着重要的影响。2.LPA作用于猪孤雌胚胎相关信号通路的探索。首先探索FGF信号通路对猪孤雌胚胎原始内胚层的影响,QRT-PCR结果显示:30ng/mL的bFGF可以显着上调猪囊胚原始内胚层GATT4基因。在同时添加LPA和bFGF后,猪囊胚原始内胚层标志基因GATA4和单独添加LPA时结果一致,即GATA4基因显着下降。随后探索LPA是否通过ROCK信号通路起作用。使用ROCK信号通路抑制剂Y27632抑制ROCK信号通路表达以后再添加LPA后,猪囊胚原始内胚层标志基因GATA4没有显着变化。以上结果表明,与小鼠早期胚胎一样,FGF信号通路任然可以调节猪的原始内胚层的发育,而LPA主要通过ROCK信号通路对猪原始内胚层起作用,并且作用强度可能大于FGF信号通路。3.为了更进一步的研究LPA对猪早期囊胚发育中多能性基因表达的影响,对“naive”和“primed”两类候选基因进行了定量测定,结果显示:LPA对“naive”态基因没有显着影响,但是能显着下调“primed”多能基因NODAL和Activin-A的表达,并且能显着提高ES细胞自我更新因子OCT4和c-Myc的表达。以上结果表明:LPA可以促进猪孤雌胚胎早期发育,并且可能通过抑制primed多能基因的表达来促进和维持“naive”状态细胞的多能性,以上的研究结果有望促进naive猪ES细胞系的分离培养及建系。(本文来源于《广西大学》期刊2017-06-01）
郭晓慧[8]（2017）在《散白蚁卵巢发育及孤雌卵相关基因表达研究》一文中研究指出尖唇散白蚁Reticulitermes aculbialis和黄胸散白蚁R.flaviceps是我国重要的白蚁危害种类。本研究以尖唇散白蚁和黄胸散白蚁为材料,通过建立雌雌配对组(FF组)和雌雄配对组(FM组)人工巢群,采用显微组织观察、荧光染色、石蜡切片、荧光定量PCR、统计学分析等技术,系统地研究了两个种的产卵量、卵孔数、卵巢发育、未受精卵胚胎形成及发育相关基因的表达量,并对比了具有孤雌生殖能力的尖唇散白蚁和不具有孤雌生殖能力的黄胸散白蚁胚胎发育过程中在形态学与遗传学水平上的差异,旨在探究白蚁孤雌生殖的影响因子与调控机制。研究结论如下。(1)依据卵巢中最大卵母细胞的成熟程度,将卵巢分为五个阶段,A:前卵黄形成期卵母细胞阶段,B:早期卵黄形成期卵母细胞阶段,C:后期卵黄形成期卵母细胞阶段,D:成熟卵母细胞阶段,E:侧输卵管卵母细胞阶段。我们发现黄胸散白蚁FF组和FM组卵巢处在A和B阶段的总比率分别为53.33%和58.33%,尖唇散白蚁FF组和FM组处在C和D阶段的总比率分别为99.98%和75%,表明尖唇散白蚁卵巢发育与黄胸散白蚁卵巢相比更成熟。尖唇散白蚁和黄胸散白蚁FF组初建巢到产卵的时间间隔分别为35.12±2.59天和26.64±3.78天,八月份单个巢平均月产卵量分别为18.24±3.18,11.53±4.51,九月份单个巢平均月产卵量分别为11.16±4.26,3.67±1.24,表明尖唇散白蚁FF组产卵量要高于黄胸散白蚁FF组,且黄胸散白蚁九月份产卵量迅速降低。尖唇散白蚁FF组和FM组,黄胸散白蚁FF组和FM组的卵孔数分别为6.31±1.89,8.18±3.22,8.15±2.67,8.43±3.05,除黄胸散白蚁FF组卵孔数显着低于其他各组外,其他组间均无显着性差异。(2)尖唇散白蚁与黄胸散白蚁卵巢中成熟卵母细胞均存在一个卵核,刚产出孤雌卵存在2-5个卵核,表明两个种卵母细胞都在排卵过程中被激活且发生1-2次卵裂。尖唇散白蚁孤雌卵卵核数在产出5h为16-22个,10h为35-42个,24h为51-60个,48h为67-84个,卵裂速度逐渐减慢,且卵核向卵后端移动,3-5d形成胚盘,7-10天胚带形成,10-15d胚带延伸;黄胸散白蚁孤雌卵卵核数在产出5h为6-10个,48h为28-37个,5-7d为71-85个,且卵核移动至卵后端;黄胸散白蚁卵裂速度显着低于尖唇散白蚁,且8-10d时约86%的孤雌卵发育停滞在胚盘形成期,停滞卵卵黄细胞成块状聚集在卵的中央,卵两端呈中空状态。(3)我们测定了 8种与发育相关的基因在黄胸散白蚁FF组和尖唇散白蚁FF组中的表达量。对比同一个种内雌虫与卵巢的表达量,除尖唇散白蚁csf基因表达量在卵巢和成虫中无显着性差异外,黄胸散白蚁csf基因以及两个种中的cdc2,cyclin B,cyclin B3,mapkapk,cdc42,tnk2,ssp4基因在雌性生殖器官中的表达量都显着高于同种雌性成虫(P<0.05),表明这些基因在卵巢中的表达上调;对比同一个种卵巢与产出的卵的基因表达量,两个种卵巢中cdc2,cyclin B,cyclin B3,mapkapk,cdc42,ssp4基因以及尖唇散白蚁中tnk2基因的表达量均显着高于其在相同种产出的卵中的表达量(P<0.05),其余无明显差异,可能是由于卵产出后与发育相关的母源mRNA迅速降解。两个种间比较,尖唇散白蚁雌虫的cyclin,cyclinB3基因表达量显着高于黄胸散白蚁雌虫;cdc2,cyclin B,cyclin B3,mapkapk,cdc42,tnk2基因在尖唇散白蚁卵巢中的表达量显着高于黄胸散白蚁卵巢,与之相反csf基因在黄胸散白蚁卵巢中的表达量显着高于尖唇散白蚁卵巢,推测上述7个基因与卵巢发育和卵子成熟有关;尖唇散白蚁卵的tnk2基因含量显着高于黄胸散白蚁卵(P<0.05),表明该基因可能与孤雌卵胚胎发育有关。(本文来源于《西北大学》期刊2017-06-01）
邓彬[9]（2017）在《BGJ398对猪孤雌胚胎发育及滋养层发育潜能相关基因表达的影响》一文中研究指出胚胎由一个全能的受精卵分裂形成多个发育潜力几乎相同的卵裂球,随着胚胎的形态的不断变化,形成一个空腔,此时,卵裂球随之分化形成内细胞团(Inner cell mass,ICM),后续发育成为胎体和部分胎盘组织,和外层的滋养层细胞(Trophoblast,TE),其后发育成为胎盘部分。TE在胚胎植入和妊娠维持中起重要作用。前人研究表明抑制水牛早期囊胚内FGF信号通路能够提高囊胚整体的细胞数,而且细胞数的增加主要来自滋养层。另外在猪的研究也表明,抑制FGF信号通路可以在不影响胚胎正常发育和相关多能性基因的表达的前提下,显着提高滋养层标志基因CDX2的表达量,然而激活FGF信号通路可以使得CDX2的表达量明显下降。虽然机理暂时不明,但是这有可能成为一个极其有前景的研究方向。目前对猪早期胚胎内滋养层的研究甚少,对于在早期胚胎内滋养层的发育情况,并没有一个衡量其发育潜力的标准。通常都以滋养层标志基因CDX2的表达量作为滋养层细胞发育情况的标准。基于滋养层在胚胎在子宫中的定位、附着、侵入过程中的重要地位,建立一个衡量其发育潜力的标准以及提高其细胞数和相关标志/功能基因的表达,为提高后续的胚胎移植效率提供了一种非常有实际意义的探讨。本研究主要内容如下:对成熟卵细胞进行孤雌激活(Parthenogenetic activation,PA)后,分别添加浓度为5μM、10μM、15μM、20μM的FGF信号通路抑制剂BGJ-398到基础培养基内培养168h收集囊胚,与DMSO对照组对比囊胚率、囊胚内滋养层细胞数和相关基因表达量进行比较。结果发现:1.在基础培养基内添加BGJ398并不影响囊胚的形成和正常发育,但是与DMSO对照组相比,5μM组囊胚率有显着提高(29.64%vs 22.97%,P<0.05),10μM组囊胚率有一定增长但是差异并不显着(24.68%vs 22.97%,P>0.05)。当浓度增加到15μM、20μM时,囊胚率降低,说明浓度过高对囊胚的形成起到抑制作用。对囊胚进行Hoechst染色细胞手动计数,与对照组相比,5μM组囊胚细胞数有显着提高(54.2±7.92vs45.16±8.75,P<0.05),10μM组囊胚细胞数有一定增长但是差异并不显着(45.16±8.75 vs 48.2±4.32,P>0.05),15μM、20μM组囊胚平均细胞数均少于对照组。选取最优浓度实验组5μM对囊胚多能性相关基因表达量进行检测。结果表明相对于对照组,处理组的多能性相关基因KLF4的表达量显着提高了 6.28倍(P<0.05),而OCT4表达量为对照组的1.50倍(P>0.05),差异不显着;原始外胚层标志基因SOX2的表达量显着提高了 3.45倍(P<0.05);囊胚内滋养层标志基因CDX2表达量显着提高了 2.93倍(P<0.05)。2.BGJ398促进以猪PA囊胚滋养层相关标志基因的表达。通过PCR检测我们发现:GATA3,TEAD4,CCDX2,OCT4,TERT,OEMES,FGFR2在囊胚中均有表达。但是PPARγ,HAND1,MMP2,MMP9以及ELF5,CYP11A1,HSD17B1没有检测到表达。上述结果提示GATA3,TEAD4,CDX2,OCT4,TERT,OEMES,FGFR2可以作为后续实验中滋养层细胞检测的评价基因。选取5μM处理组和有报道过的10μM处理组的囊胚对筛选出的滋养层标志物表达量进行定量分析,研究结果发现,与对照组相比,调控滋养层形成与分化的CDX2的上游基因GATA3表达量在5μM组和10μM组分别提高了 1.49倍和2.14倍(P>0.05),但差异不显着;端粒酶活性基因TERT的表达得到了显着提高,与对照组相比分别提高了 3.03倍和1.70倍(P<0.05);CDX2上游调控因子TEAD4表达量也得到显着提高,5μM组和10μM组表达量分别为对照组的2.00倍和2.09倍(P<0.05);FGFR2由于通路抑制表达量随着抑制剂浓度上升而降低;5μM组和10μM组EOMES表达量分别为对照组的3.18倍(P<0.05)和1.52倍(P>0.05)。上述实验结果说明BGJ398能够促进滋养层细胞功能相关基因GATA3,TEAD4 CDX2,OCT4,TERT,OEES表达量的显着提高,推测 BJG398能够提高滋养层细胞发育潜力,从而可能间接提高胚胎着床能力。综上所述,在猪胚胎培养基添加5μMBGJ398,能够促进PA囊胚率以及囊胚细胞数,同时促进多能性相关基因以及与囊胚滋养层细胞发育潜力相关标志基因的表达,为下一步探讨提高猪胚胎移植成功率奠定基础。(本文来源于《广西大学》期刊2017-06-01）
张宇辰[10]（2017）在《茴香霉素结合电激活对猪孤雌激活和体细胞核移植胚胎的体外发育的影响》一文中研究指出孤雌激活与体细胞核移植在动物育种、生产转基因动物、建立动物模型、保护珍稀濒危动物、提供人造器官异种移植研究以及发育生物学的研究等方面有着重要的作用与意义。而卵母细胞激活是影响孤雌激活和体细胞核移植效率的重要因素之一。同时也是确定孤雌激活和核移植以及随后的克隆胚胎的发育的基本要素之一。因此,如何有效提高卵母细胞激活效率具有十分重要的意义。而茴香霉素是一种蛋白合成抑制剂,首次在牛孤雌激活胚胎和体细胞核移植激活处理上应用,发现能够显着提高牛的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎囊胚率并提高囊胚质量。但茴香霉素应用在猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎尚未见报道。所以在本研究中,我们利用蛋白质合成抑制剂茴香霉素在电激活后处理猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎来观察实验效果。我们获得以下试验结果:1.茴香霉素,CB组与未处理组对比胚胎排出第二极体。实验发现茴香霉素和未处理组与CB组相比在排出第二极体上差异显着。(51.9%and 51.6%vs.14.3%p<0.05),结果说明茴香霉素不能抑制第二极体的排出。2.茴香霉素在1μg/mL与其他各个浓度下的胚胎发育到2-4细胞阶段有显着差异(table3-2)。通过Hoechest 33342染色的方法观察茴香霉素处理组与对照组(CB)在囊胚的细胞数上没有着显着性差异(table2),0.01 μg/mL,0.1 μg/mL药物浓度与1 μg/mL及对照组在达到囊胚的效率上有显着地差异(31.8%and 27.1%vs.0 and 16.7%,p<0.05)。在最佳浓度下的茴香霉素处理不同的时间下观察胚胎发育能力。分别测量了 Oh,2h,4h,6h,下胚胎的发育能力,结果显示:茴香霉素是在处理2,4,6h下孤雌激活胚胎有最好的发育能力(39.5%,33.3%and29.2%vs.20.3%,p<0.05)。同样,在胚胎发育到 2-4 细胞时期,以及囊胚平均细胞数上都没有显着差异。以上结果表明:茴香霉素的最佳处理条件为0.01 μg/mL下作用2h。3.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对孤雌激活胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显着性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,能够显着提高孤雌激活胚胎发育能力(37.6%and 30.0%vs 19.9%,p<0.05)。4.孤雌激活胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下测量MPF活性,结果显示茴香霉素处理下的孤雌生殖胚胎MPF水平明显低于对照组(361.3 pg/ml vs 254.2 pg/mL,p<0.05)。5.在染色体我们对激活7天左右的分别来自茴香霉素处理组,6-DMAP处理组和对照组(CB)处理的早期囊胚进行核型分析。结果显示茴香霉素与6-DMAP处理组和对照(CB)差异显着(33.3%vs60%and 50%,p<0.05)以上结果表明:在茴香霉素处理下可以降低囊胚染色体异常比例。6.PA胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下通过RT-PCR检测多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax),实验结果表明茴香霉素对PA囊胚的多能性基因和凋亡基因并无显着性影响。7.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对SCNT胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显着性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组与未处理组相比,能够显着提高SCNT胚胎发育能力(18.3%vs 4.2%p<0.05)。结论:1)茴香霉素能够通过改变MPF活性来影响孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎的发育能力。2)茴香霉素能够显着降低孤雌激活囊胚染色体异常比例。3)茴香霉素对孤雌激活囊胚的多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax)并无显着影响。其中,茴香霉素处理的最佳条件为0.01 μg/mL,2h。(本文来源于《延边大学》期刊2017-05-19）
孤雌发育论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
主要探讨了叁种生长因子对猪卵母细胞成熟及孤雌胚胎发育及多能基因表达的影响,结果表明:成熟液中添加生长因子后可显着提高卵母细胞成熟率;成熟液和发育液中都添加生长因子后胚胎卵裂率、囊胚率及胚胎质量均显着升高;添加生长因子可极显着提高孤雌囊胚中多能基因的表达.本研究为提高猪卵母细胞成熟及胚胎早期发育奠定了基础,进而为获得更利于分离培养猪胚胎干细胞系的囊胚材料提供了参考.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
孤雌发育论文参考文献
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