表达禽腺病毒4型中国流行株Fiber2蛋白重组新城疫病毒的构建与鉴定

论文摘要

利用NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,将禽腺病毒4型（FAdV-4）中国流行株的全长Fiber2基因插入到NDV基因组的P和M基因之间,构建并拯救出重组病毒rLaSota-Fiber2。利用RT-PCR和序列测定,以及Western blot对重组病毒进行了鉴定。结果显示,Fiber2基因插入位置和方向正确,Fiber2蛋白得到正确表达,表达形式为可溶的游离形式而非嵌入到NDV颗粒中。第10代重组病毒的鸡胚致病性试验和在鸡胚中的生长特性研究结果显示,重组病毒的半数鸡胚感染量(EID50)最高可达108.5/100μL,鸡胚平均致死时间（MDT）为120 h, 1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）和6周龄鸡静脉接种致病指数（IVPI）均为0,重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株的低致病特性和对鸡胚良好的高滴度生长适应性。重组病毒与亲本LaSota株生长滴度在相近时间达到峰值,生长动力学特性与亲本株无明显差异。本试验构建的表达FAdV-4中国流行株Fiber2基因的重组病毒rLaSota-Fiber2有望为同时防控NDV和FAdV-4的感染提供安全、廉价和高效的辅助工具。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞和病毒
•   1.2 质粒和主要试剂
•   1.3 表达Fiber2蛋白的重组NDV 基因组cDNA的构建
•   1.4 重组病毒拯救
•   1.5 重组病毒鉴定
•     1.5.1 重组病毒的RT-PCR鉴定
•     1.5.2 重组病毒Western blot鉴定
•   1.6 重组病毒的致病性分析
•   1.7 重组病毒rLaSota-Fiber2在鸡胚中的生长特性
• 2 结果
•   2.1 表达Fiber2基因的重组病毒的拯救
•   2.2 重组病毒rLaSota-Fiber2的RT-PCR鉴定
•   2.3 重组病毒rLaSota-Fiber2表达蛋白Western blot鉴定
•   2.4 重组病毒的致病性分析
•   2.5 重组病毒在鸡胚中的生长特性
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田开月,张玉菡,杨盼盼,郭慧芳,李宁,杨霞,边传周,王增,赵军

关键词: 禽腺病毒型,蛋白,重组新城疫病毒,疫苗

来源: 中国兽医学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学牧医工程学院,河南牧业经济学院动物医学院

基金: 国家重点研发计划资助项目(2016YFD0500800,2016YFD0501100),国家自然科学基金资助项目(31772771)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.09.07

页码: 1697-1702

总页数: 6

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