泛素相关修饰蛋白SUMO-2对RAW264.7细胞内布鲁氏菌16M存活的影响

论文摘要

为探究泛素相关修饰蛋白SUMO-2对布鲁氏菌16M的影响,本试验构建了SUMO-2基因干扰和过表达小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,并用布鲁氏菌16M进行侵染。参照GenBank中SUMO-2基因序列设计特异性干扰片段和过表达引物,克隆成功后连接至相应的慢病毒载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,选取阳性克隆菌提取质粒转染HEK-293FT细胞,将重组的慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用布鲁氏菌16M分别侵染构建成功的干扰和过表达细胞模型。通过实时荧光定量PCR检测SUMO-2 mRNA的转录水平,Western blotting检测SUMO-2蛋白的表达,ELISA检测IFN-γ和TNF-α水平,菌落计数来确定布鲁氏菌在细胞中的存活能力。结果显示,与对照组相比,干扰组SUMO-2 mRNA水平极显著降低（P<0.01）,过表达组SUMO-2 mRNA水平极显著升高（P<0.01）,成功构建了SUMO-2干扰和过表达细胞模型。Western blotting结果显示,布鲁氏菌16M感染能以时间依赖的方式下调SUMO-2蛋白的表达。经菌落计数后发现,SUMO-2过表达后布鲁氏菌的数量极显著减少（P<0.01）,抑制布鲁氏菌16M的细胞内繁殖。而SUMO-2干扰后布鲁氏菌的数量显著或极显著增加（P<0.05;P<0.01）,促进布鲁氏菌16M的细胞内繁殖。同时,经SUMO-2过表达后,IFN-γ和TNF-α水平极显著升高（P<0.01）。经SUMO-2干扰后,TNF-α水平显著降低（P<0.05）,IFN-γ水平极显著降低（P<0.01）,SUMO-2在RAW264.7细胞中的表达变化也影响IFN-γ和TNF-α的产生。综上所述,SUMO-2蛋白在布鲁氏菌胞内存活中起着重要作用,可能有助于阐明布鲁氏菌感染的致病机制。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 SUMO-2慢病毒干扰载体的构建
•     1.2.2 SUMO-2慢病毒过表达载体的构建
•     1.2.3 SUMO-2稳定干扰及过表达细胞系的鉴定
•     1.2.4 布鲁氏菌16M感染细胞模型的建立及肿瘤坏死因子-α （TNF-α） 和干扰素-γ （IFN-γ） 水平检测
•     1.2.5 布鲁氏菌在不同细胞群中的存活能力
•     1.2.6 Western blotting检测SUMO-2蛋白的表达
•     1.2.7 统计分析
• 2 结 果
•   2.1 干扰pLL3.7慢病毒载体的构建
•   2.2 过表达pLEX-EGFP慢病毒载体的鉴定
•   2.3 实时荧光定量检测SUMO-2基因相对表达
•   2.4 布鲁氏菌16M感染SUMO-2 RAW264.7细胞模型后TNF-α、IFN-γ水平
•   2.5 布鲁氏菌16M在SUMO-2 RAW264.7细胞中的存活情况
•   2.6 Western blotting检测SUMO-2蛋白的表达
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邓肖玉,易继海,李启峰,何金科,杨琴,王月丽,王震,王勇,陈创夫

关键词: 布鲁氏菌,过表达,干扰,菌落计数

来源: 中国畜牧兽医 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 石河子大学动物科技学院,石河子大学生命科学学院

基金: 国家自然科学基金项目(U1803236),兵团重大科技项目(2017AA003)

分类号: S852.614

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.08.008

页码: 2257-2264

总页数: 8

文件大小: 1973K

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