共表达N-乙酰转移酶提高Aspergillus nidulans α-葡糖苷酶在毕氏酵母中的表达研究

论文摘要

葡糖苷酶以低聚寡糖为底物,通过切割非还原末端α-1,4糖苷键以获得葡萄糖基,同时转苷生成α-1,6糖苷键,广泛应用于低聚异麦芽糖生产、代谢生理研究、疾病预防治疗等各个领域。Aspergillus nidulans来源的α-葡糖苷酶在毕氏酵母中外源表达时存在酶活较低、蛋白质降解等问题,为进一步提高α-葡糖苷酶表达量,共表达N-乙酰转移酶（Mpr1）以降低发酵过程细胞受到的氧化胁迫,提高酶活。以实验室保藏的P. pastoris KM71/pPIC9K-AgbB为出发菌株,构建共表达菌株Pichia pastoris KM71/pPIC9K-AgbB/pPICZA-Mpr1,经过摇瓶发酵120h,α-葡糖苷酶转苷酶酶活和蛋白质含量可达22. 56U/ml和0. 52mg/ml,分别是出发菌株摇瓶产酶的1. 92倍和1. 27倍。在此基础上进行3. 6L罐发酵温度和甲醇诱导浓度优化,在25℃,以1%的甲醇浓度诱导发酵最高酶活和蛋白质含量可达128. 12U/ml和1. 81mg/ml,分别是起始菌株上罐产酶的1. 96倍和1. 50倍。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 酶和试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 PCR扩增Mpr1基因
•     1.2.2 构建表达载体pPICZA-Mpr1
•     1.2.3 构建共表达P.pastoris KM71/pPIC9K-AgdB/pPICZA-Mpr1重组菌株
•     1.2.4 P.pastoris KM71/pPIC9K-AgdB/pPICZA-Mpr1重组菌株的筛选
•     1.2.5 酶活及蛋白质含量测定
•     1.2.6 重组菌株3.6L罐发酵优化
• 2 结果与讨论
•   2.1 出发菌株P.pastoris KM71/p PIC9K-AgdB 3.6L罐发酵特性
•   2.2 共表达载体p PICZA-Mpr1的构建
•   2.3 共表达菌株P.pastoris KM71/p PIC9K-AgdB/p PICZA-Mpr1的高拷贝筛选
•   2.4 温度对P.pastoris KM71/p PIC9K-Agd B/p PICZA-Mpr1重组菌株3.6L发酵罐发酵影响
•   2.5 甲醇诱导浓度对P.pastoris KM71/p PIC9K-AgdB/p PICZA-Mpr1重组菌3L罐发酵的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 任莉琼,吴敬,陈晟

关键词: 乙酰转移酶,葡糖苷酶,毕氏酵母,共表达,发酵优化

来源: 中国生物工程杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学食品科学与技术国家重点实验室生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室

基金: 国家杰出青年基金(31425020),国家自然科学基金(31571776),中央高校基本科研业务费专项资金(JUSRP51706A),江苏省重点研发计划(社会发展)(BE2015751)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20191009

页码: 75-81

总页数: 7

文件大小: 212K

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