高效表达论文_蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳

导读:本文包含了高效表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,神经细胞,蛋白,高效,酪氨酸,密码子,曲霉。

高效表达论文文献综述

蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳^[1]（2019）在《靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建》一文中研究指出性反转是指动物表现的性别特征与其应有的性别相反的现象。性反转小鼠可作为动物模型研究哺乳动物性别分化机制、性别控制技术以及研究人类性别连锁疾病发病机理和防治方法。已有研究证明,在胚胎期敲除雄性小鼠的Y染色体将获得XO基因型的性反转小鼠。本研究设计了6个不同的sgRNA,使共能介导Cas9蛋白作用于小鼠Y染色体上的多拷贝基因—Rbmy(RNA-binding motif gene),通过比较不同的sgRNA介导Cas9对靶序列的切割效率,最终筛选出一条能够高效介导Cas9靶向Rbmy基因的sgRNA6,该sgRNA6在体外切割效率达到100%,细胞内切割突变效率为15.4%,利用该sgRNA6构建了靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体。利用该载体转染小鼠雄性睾丸间质瘤细胞,成功获得了XO基因型的单细胞克隆团。本研究所构建的靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体可用于小鼠胚胎注射,为获得Y染色体敲除的XO型性反转小鼠模型提供基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年12期）

宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权^[2]（2019）在《磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达》一文中研究指出为了从磷矿区土壤分离高效溶磷菌,为开发施用于矿区复垦的高效微生物解磷菌肥提供试验基础,利用磷酸钙培养平板筛选磷矿区土壤中的解磷菌,采用PCR法扩增16S rDNA序列进行鉴定,探讨不同碳源、氮源、起始pH值和温度下菌株的生长情况,另外还进一步克隆表达该菌株的碱性磷酸酶。结果显示,经筛选得到1株高活性的解磷菌,16S rDNA鉴定其为成团泛生菌(Pantoea agglomerans);该菌株最佳碳源为甘油、氮源为NH4Cl类无机氮,起始pH值为9,培养温度为33℃;在最适培养条件下,有效溶磷量达到了287.48 mg/L;成功克隆了该菌株中的碱性磷酸酶基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,重组菌裂解液活性为原始菌株裂解液的32.77倍。分离得到的菌株及重组表达的碱性磷酸酶在矿区复垦、农业种植和工业上均具有广泛的应用前景。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年11期）

水燕,管政兵,叶俊贤,史永红,刘国锋^[3]（2019）在《克氏原螯虾i-型溶菌酶在巴斯德毕赤酵母中的高效胞外表达及其抑菌活性（英文）》一文中研究指出为开发虾类来源的溶菌酶,本研究建立了利用巴斯德毕赤酵母表达系统高效分泌表达重组克氏原螯虾无脊椎动物型溶菌酶1(简称"pc-iLys1")的方法。经密码子偏好性优化后的pc-iLys1 cDNA在毕赤酵母菌株SMD1168中成功地实现胞外分泌表达,重组蛋白分子质量约为17.1 kDa。在摇瓶中对诱导表达条件进行优化,获得的相对最佳表达条件为:培养基pH 7.0,培养温度28℃,甲醇体积分数1.5%,诱导表达时间96 h。采用该优化条件,进一步利用分批补料策略在5 L发酵罐中进行高密度培养诱导,120 h后获得重组pc-iLys1,其酶活性达到2 052.6 U/mL,最终,酵母干细胞质量浓度达98.1 g/L。抑菌实验表明,重组pc-iLys1对多种革兰氏阳性和阴性细菌均具有明显的抑制活性。总之,本研究实现了克氏原螯虾i-型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达,为其大规模制备打下了基础。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2019年05期）

朱艳平,邢瑞林,李润芷,何勇,申一兰^[4]（2019）在《SUMO融合系统高效表达可溶性IBDV NB株VP2 S-P域蛋白》一文中研究指出鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)导致机体出现免疫抑制。VP2是IBDV主要保护性抗原表位的结构蛋白,Shell域和Projection域位于IBDV VP2蛋白的胞外区和跨膜区,包含VP2主要的抗原位点。前期研究在Shell域筛选到能够与IBDV多抗结合的多肽。因此,本研究利用PCR扩增Shell域和Projection域的基因,添加小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier, SUMO)作为标签,构建SUMO系统高效表达系统,诱导表达获得VP2 Shell域和Projection域的可溶性融合蛋白,命名为SUMOVP2-S-P。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,出现与预期蛋白大小相符合的可疑条带;Western blotting鉴定结果显示,SUMO-VP2-S-P重组蛋白能够与His单抗特异性结合。初步结果表明,SUMO-VP2-S-P重组蛋白为我们需要的目的蛋白,为后期蛋白纯化建立IBDV抗体快速检测方法提供材料基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年09期）

段成宝,刘钢^[5]（2019）在《利用黑曲霉高效表达外源蛋白策略》一文中研究指出黑曲霉Aspergillus niger作为一种广泛存在于自然界的丝状真菌,是极为重要的工业微生物,不仅是重要的柠檬酸生产菌,同时还在表达多种蛋白和生产次级代谢产物等方面应用广泛。虽然黑曲霉用于商业化生产外源蛋白已经有很长的历史,但大多数外源蛋白的表达水平不高,亟需研究高效表达外源蛋白的策略。文中概述了通过选用强启动子、增加基因拷贝数、使用蛋白酶缺陷菌株、采用基因融合表达、增加糖基化修饰等策略来增强黑曲霉表达外源蛋白的进展,旨在为深入开展该领域的研究工作提供参考。(本文来源于《菌物研究》期刊2019年03期）

阎光宇,余蕾,何建林,孙继鹏^[6]（2019）在《牡蛎金属硫蛋白重组毕赤酵母菌株高效诱导表达工艺研究》一文中研究指出金属硫蛋白(MT)作为一类广泛存在并高度可诱导的多功能内源性蛋白,具有重金属解毒、抗辐射、清除自由基等功能,近年来已成为研究和开发的热点。为解决MT原料来源的瓶颈问题,本文以一株海洋源MT重组巴斯德毕赤酵母菌株(GS~(-1)15-MT)为研究对象,对其进行培育条件(温度、pH、溶氧、接种量)、诱导表达条件(溶氧、甲醇浓度、菌株生产状况、诱导时间、诱导金属及浓度)综合优化,以获得MT高效表达最佳工艺。结果显示,GS~(-1)15-MT的最佳生长条件为培育温度30℃,培养基初始pH为9,摇床转速240r·min~(-1),接种量4%;最佳MT诱导发酵条件为摇床转速为220r·min~(-1),甲醇浓度为5%,菌液OD_(600)为9.7,诱导24h,Cu~(2+)诱导浓度50μmol·L~(-1)。在以上优化条件下,MT表达量达0.328mg·mL~(-1)。本结果可为海洋源MT的规模化工业生产提供一定理论依据。(本文来源于《生物产业技术》期刊2019年05期）

王艳慧,陶妍^[7]（2019）在《叁疣梭子蟹PtCrustin2抗菌肽基因优化及其在毕赤酵母中高效表达》一文中研究指出Crustin是一系列富含半胱氨酸的甲壳动物来源的抗菌肽,是甲壳动物非特异性免疫机制中的重要免疫因子,其生物学功能由C端的成熟肽区域决定。参考叁疣梭子蟹(Portunus trituberculatus) Pt Crustin2成熟肽的c DNA序列,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏爱性对其相关密码子进行优化,合成5'端含XhoⅠ限制性位点和Kex2信号肽酶切位点、3'端含XbaⅠ限制性位点和6×his标签的目的基因"sm Pt Crustin2";以p PICZαA为表达载体,构建重组表达载体p PICZαA-sm Pt Crustin2,将其转入毕赤酵母X-33细胞后,通过含高浓度博来霉素的抗性平板筛选高拷贝甲醇利用快速型酵母转化子;筛选获得的酵母转化子在28℃、250 r/min条件下,使用0. 5%甲醇诱导表达目的蛋白,并通过固化金属离子亲和层析(IMAC)对其进行分离纯化。Tricine-SDS-PAGE分析显示:纯化的重组体sm Pt Crustin2的分子量约为9. 6 ku,并形成分子量约20 ku的二聚体。Western Blot分析进一步证明了纯化产物为预期的目的蛋白。建立的毕赤酵母表达系统获得了表达量为22. 4 mg/L的重组体sm Pt Crustin2。(本文来源于《生物学杂志》期刊2019年04期）

尚佳琦,王琪,田超,张汝楠,赵帅^[8]（2019）在《高效氯氰菊酯对大鼠脑组织TH及TNF-α蛋白表达影响的研究》一文中研究指出目的通过动物实验观察高效氯氰菊酯对大鼠脑(TH)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组,高效氯氰菊酯低剂量组(20 mg/kg)、中剂量组(40 mg/kg)、高剂量组(60 mg/kg)。经口灌胃染毒,时间为30天,观察高效氯氰菊酯对大鼠的一般状况及体重变化,计算食物利用率、脏器系数,免疫组化方法检测TH在脑组织中表达情况,Western blot法检测TNF-α的蛋白表达水平。结果与对照组[(314.82±10.89)g]比较,高效氯氰菊酯能够导致大鼠体重[(287.38±18.17)g]下降(P<0.01),食物利用率显着降低[对照组为(20.31±4.33)%,高剂量组为(18.83±4.22)%,P<0.01]。高剂量组脏体比[(0.71±0.07)%]、中剂量组脑体比[(0.69±0.08)%]均高于对照组[(0.59±0.09)%](均P<0.05)。与对照组相比,高、中剂量组黑质纹状体内TH含量显着降低。高、中剂量组黑质纹状体内TNF-α含量明显高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论高效氯氰菊酯会导致大鼠脑组织内TH含量的减少和TNF-α含量的增加,因此会造成脑组织的损伤。(本文来源于《职业与健康》期刊2019年16期）

杨慧,刘吉山,李书光,王艳,于新友^[9]（2019）在《兔出血症病毒次要衣壳蛋白VP12在大肠杆菌体内高效表达及特性研究》一文中研究指出试验旨在通过原核高效表达RHDV VP12蛋白,检测同源组织疫苗免疫后该蛋白抗体的产生情况。RT-PCR扩增获得抗原遗传变异株SQ-1株兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)次要衣壳蛋白VP12基因,定向克隆插入pET32a多克隆位点,构建Trx-His tag融合原核表达载体,PCR与序列测定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定分析表达产物活性。测序结果显示,所扩增VP12基因ORF(开放阅读框)为354 bp,编码117个氨基酸,IPTG诱导后目的基因获得表达,融合载体Trx-His tag的重组VP12蛋白分子量为31 ku,与预期一致,且表达蛋白存在可溶性与包涵体两种形式;Western blot结果显示,可溶性表达蛋白与兔瘟肝组织灭活疫苗免疫后攻毒制备的RHDV阳性抗体能发生良好的抗原抗体杂交反应,说明该蛋白具有良好的反应原性。研究结果为开展RHDV VP12蛋白生物学与免疫学特性研究、开发诊断试剂奠定了基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年08期）

徐瑜辰,覃莲菊,宁松,曹孟,李真真^[10]（2019）在《高效诱导人胚胎干细胞分化为表达生殖功能调控相关基因的下丘脑神经细胞》一文中研究指出目的优化体外诱导人胚胎干细胞向类下丘脑弓状核神经细胞分化方案、提高分化效率;明确分化神经细胞中是否表达生殖功能调控相关基因。方法利用接受辅助生殖技术治疗患者捐赠的冷冻胚胎建立人胚胎干细胞系CCRM14;饲养层上培养CCRM14,经纯化后消化为单细胞、诱导其向下丘脑神经细胞分化。分化策略:神经分化早期抑制转化生长因子β和骨形态发生蛋白信号通路;接着激活sonic hedgehog信号通路,促使下丘脑神经前体细胞生成;随后抑制Notch信号通路,添加脑源性神经营养因子诱导类下丘脑弓状核神经细胞的分化与成熟。分化不同时期采样,利用RT-qPCR、细胞免疫荧光、流式细胞术方法鉴定分化细胞。结果依据本优化分化方案,CCRM14分化为下丘脑神经前体细胞的效率达95%以上,分化的细胞表达下丘脑弓状核神经细胞特异性标志物POMC和NPY/AGRP,同时表达参与生殖功能调控基因KISS1和AR。结论该类分化细胞有作为细胞模型用于研究下丘脑弓状核在生殖相关疾病发生过程中调控机制的潜力。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2019年08期）

高效表达论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

为了从磷矿区土壤分离高效溶磷菌,为开发施用于矿区复垦的高效微生物解磷菌肥提供试验基础,利用磷酸钙培养平板筛选磷矿区土壤中的解磷菌,采用PCR法扩增16S rDNA序列进行鉴定,探讨不同碳源、氮源、起始pH值和温度下菌株的生长情况,另外还进一步克隆表达该菌株的碱性磷酸酶。结果显示,经筛选得到1株高活性的解磷菌,16S rDNA鉴定其为成团泛生菌(Pantoea agglomerans);该菌株最佳碳源为甘油、氮源为NH4Cl类无机氮,起始pH值为9,培养温度为33℃;在最适培养条件下,有效溶磷量达到了287.48 mg/L;成功克隆了该菌株中的碱性磷酸酶基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,重组菌裂解液活性为原始菌株裂解液的32.77倍。分离得到的菌株及重组表达的碱性磷酸酶在矿区复垦、农业种植和工业上均具有广泛的应用前景。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

高效表达论文参考文献

[1].蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳.靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建[J].畜牧与兽医.2019

[2].宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权.磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达[J].山西农业科学.2019

[3].水燕,管政兵,叶俊贤,史永红,刘国锋.克氏原螯虾i-型溶菌酶在巴斯德毕赤酵母中的高效胞外表达及其抑菌活性（英文）[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2019

[4].朱艳平,邢瑞林,李润芷,何勇,申一兰.SUMO融合系统高效表达可溶性IBDVNB株VP2S-P域蛋白[J].基因组学与应用生物学.2019

[5].段成宝,刘钢.利用黑曲霉高效表达外源蛋白策略[J].菌物研究.2019

[6].阎光宇,余蕾,何建林,孙继鹏.牡蛎金属硫蛋白重组毕赤酵母菌株高效诱导表达工艺研究[J].生物产业技术.2019

[7].王艳慧,陶妍.叁疣梭子蟹PtCrustin2抗菌肽基因优化及其在毕赤酵母中高效表达[J].生物学杂志.2019

[8].尚佳琦,王琪,田超,张汝楠,赵帅.高效氯氰菊酯对大鼠脑组织TH及TNF-α蛋白表达影响的研究[J].职业与健康.2019

[9].杨慧,刘吉山,李书光,王艳,于新友.兔出血症病毒次要衣壳蛋白VP12在大肠杆菌体内高效表达及特性研究[J].家畜生态学报.2019

[10].徐瑜辰,覃莲菊,宁松,曹孟,李真真.高效诱导人胚胎干细胞分化为表达生殖功能调控相关基因的下丘脑神经细胞[J].生殖医学杂志.2019

论文知识图

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