腺病毒载体介导CagA基因表达对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响

论文摘要

目的研究过表达CagA对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响。方法构建CagA重组腺病毒载体pAdeno-MCMV-CagA-3Flag-IRES2-EGFP（pAdeno-CagA）,转染HEK293细胞,包装腺病毒,以感染复数（Multiplicity of infection, MOI） 50感染原代胃癌细胞72 h,并用幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）东亚株GZ7（CagA+）以MOI 50感染原代胃癌细胞24 h,通过Western blot检测CagA和已糖激酶2（HK2）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、烯醇化酶1（ENO1）、丙酮酸激酶1/2（PKM1/2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）糖酵解代谢酶的蛋白表达,采用流式细胞术检测胃癌细胞周期分布。结果成功构建了CagA重组腺病毒载体pAdeno-CagA,用pAdeno-CagA腺病毒和Hp GZ7感染原代胃癌细胞后糖酵解代谢酶HK2、ENO1、GLUT1的表达与空载组或Hp非感染组比较均显著下调（P<0.05）。与空载组比较,pAdeno-CagA感染胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h,其G2/M期细胞百分比显著增加（P<0.05）,感染72 h的空载组和CagA腺病毒组G2/M期的比值分别为16.90%和65.93%。结论 Hp通过CagA使原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达下调,可能与DNA损伤使细胞阻滞在G2/M期有关。

论文目录

• 材料与方法
•   1 材料
•     1.1 细胞和载体
•     1.2 主要试剂
•   2 方法
•     2.1 CagA 基因PCR
•     2.2 腺病毒载体pAdeno-MCMV-CagA-3Flag-IRES2-EGFP的构建
•     2.3 重组腺病毒pAdeno-CagA的包装、扩增、纯化和滴度测定
•     2.4 腺病毒pAdeno-CagA感染原代胃癌细胞
•     2.5 Hp东亚株GZ7感染原代胃癌细胞
•     2.6 蛋白表达的Western blot检测
•     2.7 流式细胞术检测细胞周期
•     2.8 统计学分析
• 结 果
•   1 腺病毒载体pAdeno-CagA的构建及鉴定
•   2 过表达CagA对原代胃癌细胞形态的影响
•   3 过表达 CagA 对原代胃癌细胞中糖酵解代谢酶表达的影响
•   4 过表达CagA对胃癌细胞生长周期的影响
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨丽萍,贾岑岑,龙妮娅,骆梅,杨丹,王珺,谢渊,赵艳,王琴容,周建奖

关键词: 幽门螺杆菌,腺病毒,胃癌,糖酵解,细胞周期

来源: 中国病原生物学杂志 2019年11期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 肿瘤学

单位: 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室,贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州医科大学附属医院临床医学研究中心,贵州医科大学附属医院临检科

基金: 国家自然科学基金项目(No.31560326,31660031),贵州省科技厅黔科合平台人才项目[2017]5652,贵州市科技局筑科合同项目[2017]5-16,贵州省卫计委科技基金项目(No.gzwjkj2015-1-010)

分类号: R735.2

DOI: 10.13350/j.cjpb.191112

页码: 1297-1302+1311

总页数: 7

文件大小: 1920K

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