质粒电穿孔Jurkat细胞递送CRISPR/Cas9系统的优化

论文摘要

CRISPR/Cas9是一种应用广泛的高效基因编辑技术。运用CRISPR/Cas9对T细胞进行基因修饰能增强T细胞的特异性免疫应答能力,在过继性肿瘤免疫T细胞治疗中具有巨大应用前景。CRISPR/Cas9的递送途径及效率影响着其基因编辑的效率。电穿孔是一种安全、简单、经济、高效、适用范围广和重复性好的转染方法,可用来高效递送CRISPR/Cas9系统。本研究以常用的T淋巴细胞系癌细胞Jurkat细胞为T细胞模型材料,利用绿色荧光蛋白基因质粒观测转染效率,探索质粒电穿孔Jurkat细胞的最优体系,进一步采用该优化体系成功递送CRISPR/Cas9系统进入Jurkat细胞,高效地敲除目的β2M基因,使之成为HLA-I-Jurkat细胞。该研究提供了适用于质粒CRISPR/Cas9系统电穿孔T细胞的优化系统,为后续将CRISPR/Cas9基因编辑系统运用于过继性T细胞肿瘤治疗奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试剂和仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 质粒提取
•     1.2.2 设计和构建CRISPR/Cas9系统
•     1.2.3 细胞培养与电穿孔
•     1.2.4 细胞转染效率和细胞存活率检测
•     1.2.5 检测HLA-I类分子的敲除情况
•   1.3 数据处理及统计学分析
• 2 结果
•   2.1 电压对细胞转效率和存活率的影响
•   2.2 脉冲时间对细胞转染效率和存活率的影响
•   2.3 电转缓冲液体系对细胞电转效率和存活率影响
•   2.4 质粒浓度对细胞电转效率和存活率的影响
•   2.5 电穿孔后不同静置时间对细胞电转效率和存活率的影响
•   2.6 电穿孔递送不同CRISPR/Cas9载体系统, 敲除Jurkat细胞HLA-I类分子
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵日,蒙露,冯建琼,刘攀,家婷,郑武燕,张悦,刘佳慧,张涛,邹强,李华

关键词: 电穿孔,基因编辑,优化

来源: 中国细胞生物学学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 西南交通大学医学院,西部战区总医院,成都医学院,成都中医药大学,川北医学院

分类号: Q78

页码: 702-709

总页数: 8

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