两个不同启动子及其组合对碱性蛋白酶AprE异源表达的影响

论文摘要

背景:碱性蛋白酶（alkaline protease）是一种具有广泛用途的工业酶制剂,其发酵活力目前仍不能满足工业生产需要。目的:旨在通过优化启动子及其组合来提高Bacillus subtilis WB600中碱性蛋白酶AprE的产量。方法:以Bacillus subtilis WB600为出发菌株,成功构建了含有4种不同类型启动子（P1、P2、P-1-2、P-2-1）的碱性蛋白酶AprE表达菌株。结果:含不同启动子的4株重组菌均可成功表达碱性蛋白酶,发酵48h,含单一启动子P2的重组菌株表达碱性蛋白酶的活力为4 041U/ml,是P1的1. 23倍。双启动子重组菌B. subtilis WB600/P-2-1-aprE表达的酶活性最高,是双启动子P-1-2的1. 35倍,达到了6 125U/ml。结论:为工业化高产碱性蛋白酶提供了一种有效策略。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 酶和试剂
•     1.1.3 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 启动子的合成及目的基因的克隆
•     1.2.2 枯草芽孢杆菌转化
•     1.2.3 表达载体的构建
•     1.2.4 重组菌的分泌表达及分析
•     1.2.5 重组菌的转录水平分析
•     1.2.6 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 启动子组合-碱性蛋白酶Apr E重组载体的构建
•   2.2 重组菌株初筛
•   2.3 发酵上清液的SDS-PAGE检测
•   2.4 启动子对碱性蛋白酶基因表达水平的影响
•   2.5 转录水平分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 史超硕,李登科,曹雪,袁航,张钰文,于江悦,路福平,李玉

关键词: 启动子,碱性蛋白酶,异源表达,酶活力

来源: 中国生物工程杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室

基金: 国家重点研发计划(2017YFB0308401)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20191003

页码: 17-23

总页数: 7

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