导读:本文包含了延迟整流钾电流论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:电流,视网膜,细胞,膜片,多糖,枸杞,离子。
延迟整流钾电流论文文献综述
王小艳,吴婷婷,庞斯斯,王森[1]（2018）在《温度对豚鼠心肌细胞快激活延迟整流钾电流的调节》一文中研究指出快激活延迟整流钾电流(Ikr)是心肌细胞复极化的主要电流,抑制Ikr可使动作电位时程延长,引起早后除极,致心律失常的发生。编码人类心肌细胞Ikrα亚单位的基因为h ERG(human ether-a-go-go-related gene,或KCNH2)[1]。该基因突变可导致遗传性长QT综合征-2 LQTS-2,而许多抗心律失常药物及非抗心律失常药物对h ERG通道的过度抑制(本文来源于《基础医学与临床》期刊2018年11期）
闫书妹,常超,衡紫微,王彦兹,刘桂芝[2]（2017）在《左心室肥厚兔缓慢型延迟整流钾电流通道KCNQ1和KCNE1 mRNA表达的变化》一文中研究指出目的:观察左心室肥厚兔左心室内外膜心肌细胞中缓慢型延迟整流钾电流(IKs)通道KCNQ1和KCNE1 mRNA表达水平的差异,探讨IKs通道在兔肥厚心肌复极离散度增大中的作用。方法:55只雄性日本大耳白兔随机分为实验组30只和对照组25只。实验组行肾上腹主动脉次全结扎,使腹主动脉缩窄50%~60%;对照组除不做丝线结扎外,其余处理同实验组。术后8周处死动物,应用荧光定量PCR技术检测IKs通道KCNQ1和KCNE1 mRNA的表达。结果:对照组左心室内膜IKs通道mRNA表达水平低于心外膜(P<0.001);实验组左心室内外膜IKs通道mRNA表达水平均低于对照组(P<0.001)。结论:IKs通道减少使复极时限延长,其不均一性减小可能是肥厚心肌复极离散度增大的原因。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2017年06期）
齐江莉,蔡钟奇,董颖,陈韵岱,李泱[3]（2017）在《应激刺激对大鼠心肌细胞快激活延迟整流钾电流改变的影响》一文中研究指出目的观察应激状态下大鼠心肌细胞快激活延迟整流钾电流(I_(Kr))的改变。方法 40只雄性SD大鼠随机分为4组(n=10):对照组、力竭组、噪声组、复合组。力竭组采用力竭游泳作为应激原,噪声组采用白噪声作为应激原,复合组采用力竭游泳+白噪声作为应激原,分别制备应激动物模型。采用Langendorff装置逆向灌流胶原酶分离大鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录应激对大鼠单个心室肌细胞I_(Kr)电流和门控机制的影响。结果与对照组相比,力竭组和噪声组大鼠心室肌细胞I_(Kr)尾电流(I_(Kr,tail))密度均明显增加(P<0.01),而复合组大鼠心室肌细胞I_(Kr,tail)密度与力竭组和噪声组相比明显增加(P<0.01),且作用呈电压依赖性。门控机制研究发现力竭组、噪声组及复合组与对照组相比均可以使I_(Kr,tail)半失活电压(V_(1/2,inact))右移,同时使失活后恢复时间常数缩短(P<0.01)。同时,与对照组相比,力竭组、噪声组及复合组对I_(Kr,tail)的稳态激活、快速失活常数及其电压依赖性影响差异均无统计学意义。结论应激刺激可增加大鼠心肌细胞I_(Kr)电流,可能是应激诱发心律失常的细胞电生理基础之一。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2017年08期）
孙邈,马云枝,沈晓明[4]（2017）在《复智胶囊主要成分对SH-SY5Y细胞延迟整流钾电流的作用》一文中研究指出目的:观察复智胶囊主要成分大黄素对体外培养的SH-SY5Y细胞延迟整流钾电流(IK)的影响。方法:体外培养SH-SY5Y,MTT法检测大黄素细胞毒性确定加药浓度,将SH-SY5Y分为空白对照组、OGD组、糖氧剥夺OGD+大黄素(Xμmol/L)治疗组,全细胞膜片钳技术描记IK变化并绘制I-V曲线。结果:SH-SY5Y经过糖氧剥夺后细胞存活率显着下降,IK电流密度减弱,此现象可被大黄素逆转,在指令电压为+50mV时IK峰密度值分别从(4.474±0.4182)pA/pF增大至(5.947±0.7415)pA/pF(P<0.05,n=15);大黄素可使被OGD抑制的IK电流-电压曲线(I-V)慢慢上升,并且伴随着的去极化幅度的逐步升高而越来越大。结论:大黄素对SH-SY5Y细胞具有保护作用;对IK有激活作用。(本文来源于《健康之路》期刊2017年07期）
勾向博[5]（2017）在《蛋白激酶C亚型特异性调控慢激活延迟整流钾电流及其分子机制》一文中研究指出延迟整流钾电流(I_K)包括快激活I_Kr和慢激活I_Ks两种成分,其中KCNQ1和KCNE1分别编码I_Ks通道的孔区α亚单位和辅助β亚单位。I_Ks是大动物2、3相复极的重要电流。已有报道,KCNQ1及KCNE1基因突变引起I_Ks减小或者增大,致动作电位复极延迟或加速,心电图上分别表现为长QT综合征(long QT syndrome,LQT1或者LQT5)和短QT综合症(short QT syndrome,SQT2)。在高血压、冠心病和心肌缺血等引发的心肌肥厚和心衰以及糖尿病等病理状态下,均伴有I_Ks减小,而这是造成获得性LQT综合征的重要原因。LQT和SQT均以高发室性心律失常为特征。因此,研究KCNQ1/KCNE1通道的功能调节具有重要意义。据报道,磷酸化是通过调节通道功能从而影响心肌电生理功能的有效方式之一,其中PKC磷酸化对离子通道的调控备受关注。早期实验结果显示,PKC对克隆的小鼠、大鼠心脏的I_Ks表现明显的抑制作用,而对豚鼠心脏的I_Ks表现为增大作用,对此种属依赖性产生的原因解释为,PKC使KCNE1的Ser102位点磷酸化而抑制电流,而豚鼠缺乏此位点,故表现为增大电流。最新研究表明,PKC磷酸化KCNE1-S102后,通过加快膜蛋白内吞而下调通道功能。然而,激活PKC可增大表达人源的KCNQ1/KCNE1通道电流(KCNE1上存在S102),故KCNQ1上存在可上调通道功能的磷酸化位点。我实验研究结果发现,在豚鼠心室肌细胞(KCNE1上缺乏S102),通过激活PKC通路抑制I_Ks。综上,激活PKC对I_Ks的调控作用表现为增大电流和抑制电流两种结果。由于不同PKC亚型对通道功能可能具有相反的作用,因此我们推测PKC对I_Ks不一致的调控结果可能由不同的PKC亚型所致。有报道PKCβⅡ、ε亚型选择性增大I_Ks,而α、β1、δ亚型对电流没有明显影响;PKCε亚型中介PMA和肾上腺素α受体增大豚鼠心房I_Ks的作用。综上,PKC可显着地调控I_Ks功能,但迄今对于不同PKC亚型特异性调控I_Ks的认识非常有限。为此,本研究主要采用膜片钳电生理技术拟解决以下问题(1)激活不同PKC亚型对I_Ks的调节作用。(2)确定介导抑制、增大I_Ks两种相反作用的PKC亚型。(3)PKC亚型特异性调控I_Ks的分子机制。第一部分不同PKC亚型对I_Ks的调节作用目的:激活不同PKC亚型对I_Ks的影响。方法:构建稳定表达KCNQ1和KCNE1的HEK293细胞线,观察PMA、cPKC激动肽和PKCε激动肽对通道电流的影响。为避免电流的衰减,实验采用穿孔膜片全细胞模式记录I_Ks。结果:在稳定转染I_Ks的HEK293细胞,外液中加入PMA(100 nM)后,去极化外向电流及复极化的尾电流明显增加。在+50mV电压下,尾电流密度由37.20±6.98 pA/pF 增加到 45.39±7.01 pA/pF(P<0.05)。PMA对I_Ks的增大作用5min出现,10-15 min左右达到稳态,冲洗后不能完全恢复。由激活曲线得出给药前V_1/2和斜率因子分别为20.04±1.31 mV和15.69±0.76,应用PMA后的V_1/2和斜率因子分别为14.48±2.21 mV和16.99±1.94,PMA使I_Ks激活曲线发生左移。在电压+10 mV～+50 mV范围内,PMA可明显降低通道的激活时间常数,在+50 mV电压下,激活时间常数由926.14±128.01 ms减小到756.57±115.23 ms(P<0.05)。在电极内液中加入cPKC激动肽和PKCε激动肽及其各自乱码对照肽(所有肽都连接穿孔肽),结果如下:与cPKC对照肽相比,cPKC激动肽使I_Ks电流密度增加,当电压去极至+50 mV时,尾电流密度由26.26±4.46 pA/pF(cPKC 对照肽)增加到 37.13±4.72 pA/pF(cPKC激动肽)(P<0.05)。应用cPKC对照肽激活曲线的V_1/2和斜率因子分别为18.03±2.2 mV和17.8±1.5,而应用cPKC激动肽激活曲线的V1/2和斜率因子分别为8.9±2.7mV和15.6±0.9,曲线明显发生左移。在电压+10 mV～+50 mV范围内,cPKC激动肽可明显减小通道的激活时间常数,在+50 mV,激活时间常数由1142.09±168.85 ms降低到608.71±99.38 ms(P<0.05)。与PKCε对照肽相比,PKCε激动肽使I_Ks电流密度下降,当电压去极至+50 mV时,尾电流密度由40.81±6.78 pA/pF(PKCε 对照肽)下降到 16.68±2.26 pA/pF(PKCε 激动肽)(P<0.01),而激活曲线V1/2和斜率因子没有发生改变,激活时间常数也没有发生改变。小结:PMA和cPKC激动肽增大I_Ks,使通道激活曲线发生左移,降低激活时间常数;PKCε激动肽抑制I_Ks,但不影响激活曲线和激活时间常数。第二部分确定中介I_Ks不同调节的PKC亚型目的:前期报道血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)通过PKC信号通路抑制豚鼠心室肌I_Ks,第一部分实验发现PMA增大I_Ks,为此本部分实验确定中介抑制、增大I_Ks两种相反作用的PKC亚型。方法:在稳定转染I_KsHEK293细胞上,瞬时转染人的Ang Ⅱ受体AT1cDNA,观察AngⅡ对I_Ks的影响。进一步采用siRNA技术分别敲低PKCα PKCβ和PKCε亚型,观察AngⅡ和PMA对以上细胞的调节作用,从而确定中介抑制、增大I_Ks两种相反作用的PKC亚型。结果:首先在表达系统进一步确定Ang Ⅱ对I_Ks的影响。在稳定转染I_Ks的HEK293细胞上,共转染人AT1 cDNA,外液中加入Ang Ⅱ(100 nM)后2-3 min去极化外向电流及复极化的尾电流均明显减小,10-15 min左右达到稳态,在+50 mV,尾电流密度由55.40±11.03 pA/pF减小到42.29±8.89pA/pF(P<0.05),抑制作用冲洗后不能完全恢复。其中约400%细胞在给药后1 min出现一过性微弱增大(约7%)。在0.1-1000 nM范围内,Ang Ⅱ以浓度依赖性方式抑制I_Ks,以I_Ks尾电流抑制率为纵坐标做Ang Ⅱ抑制I_Ks的量效曲线,经Hill方程拟合后得到IC50=7.5 nM。Ang Ⅱ对I_Ks的半数激活电压及激活时间常数都没有影响。转染siRNA特异性敲低PKC亚型的表达,观察Ang Ⅱ(K100 nM)和PMA(100 nM)对抑制、增大I_Ks的影响。结果发现,转染PKCα+PKCβ siRNA后,Ang Ⅱ对I_Ks的抑制作用与转染对照siRNA无明显差别;而转染PKCε siRNA特异性敲低PKCε表达后,Ang Ⅱ对尾电流的抑制(+50 mV下)显着弱于对照(10.95%vs 26.06%,P<0.05),表明Ang Ⅱ对电流的抑制由PKCε中介。转染(乱码)对照PKC siRNA后,PMA使I_Ks(+50 mV下)增加31.84%,分别敲低PKCα、PKCβ的表达,PMA对尾电流的增加幅度较对照显着减弱,分别为16.82%(P<0.05)、10.58%(P<0.01);共同敲低 PKCα 和 PKCβ后,电流增强作用几乎消失;敲低PKCε的表达不影响PMA的作用(28.87%vs 31.84%,P>0.05)。表明PMA对电流的增强作用由cPKC的PKCα和PKCβ中介。小结:以上的实验表明,AngⅡ对克隆人的I_Ks呈现抑制作用,此抑制作用由PKCε中介,而PMA对I_Ks的增强作用由PKCα和PKCβ中介。第三部分PKC亚型特异性调控I_Ks的分子机制目的:分析不同PKC亚型对I_Ks调节的分子机制。方法:分别突变KCNQ1、KCNE1上PKC的潜在磷酸化位点,观察Ang Ⅱ和PMA抑制、增强电流作用的改变,分析不同PKC亚型对通道调控的分子机制。结果:KCNQ1上N端有2个、C端有4个评分较高的PKC潜在磷酸化位点,分别是S95、T96和S409、S464、T513、S577,而KCNE1上只有一个潜在PKC磷酸化位点,即S102。将上述KCNQ1上6个和KCNE1上的1个潜在磷酸化位点分别突变为丙氨酸,另外同时将KCNQ1 上N端2个或C端4个潜在磷酸化位点突变,分别为 KCNQ1-2M(含 N 端 S95A 和 T96A)和 KCNQ1-4M(含 C 端 S409A、S464A、T513A、S577A)。经检测,上述所有突变通道的动力学特征与野生型一致。我们发现,Ang Ⅱ(100 nM)对 KCNQ1/KCNE1-S102A突变通道尾电流的抑制程度明显小于对野生型通道的抑制(10.84%,vs 30.59%,P<0.05),以上结果提示KCNE1上的S102是PKC抑制通道功能的磷酸化位点。同时我们注意到,KCNE1上S102突变后AngⅡ对通道的抑制作用并没有完全消失,推测除S102外,KCNQ1上也存在抑制通道功能的磷酸化位点。进一步的实验表明,Ang Ⅱ对KCNQ1N端突变通道(KCNQ1-2M)尾电流的抑制程度为11.71%,显着弱于对野生型通道的作用(30.59%,P<0.01),而KCNQ1的C端突变(KCNQ1-4M)和并不影响Ang Ⅱ的抑制作用(30.62%,P>0.05)。以上结果说明,KCNQ1的N端参与PKC对通道功能的抑制。分别突变N端的S95和T96均可减弱Ang Ⅱ对通道的抑制作用,对S95A和T96A通道的抑制分别为15%(P<0.01)和16.33%(P<0.01),说明S95和T96都参与PKC抑制通道功能。联合突变KCNQ1的N端与 KCNE1 的 S102 后,Ang Ⅱ 对通道(KCNQ1-2M/KCNE1-S102A)的抑制作用几乎消失(2.76%,P<0.01)。以上结果说明PKC在I_Ks上有叁个抑制位点,分别是KCNQ1上的S95、T96和KCNE1上的S102。KCNE1上S102突变并不影响PMA增大I_Ks的作用,我们推断KCNQ1亚基有增强通道功能的位点。PMA对KCNQ1-2M/KCNE1和KCNQ1-4M/KCNE1通道的电流增加分别为31.74%和3.18%,N端突变与野生型通道作用无明显区别(P>0.05),而C端突变几乎取消了其增强作用。结果说明KCNQ1亚基C端参与PKC对通道作用的增强性调控。进一步分别突变C端四个位点,结果显示,PMA对S409A、S464A、T513A、S577A突变通道电流分别增加12.98%、8.56%、6.37%以及11.71%,均较野生型显着降低。结果说明KCNQ1亚基C端的S409、S464、T513以及S577是PKC增强通道功能的磷酸化位点。我们进一步在HEK293细胞上表达克隆的豚鼠KCNQ1/KCNE1通道,将KCNQ1上N端唯一的潜在磷酸化位点S96突变为丙氨酸后,Ang Ⅱ对突变通道的抑制作用几乎消失,进一步表明KCNQ1上N端磷酸化抑制通道功能。小结:KCNQ1亚基存在PKC抑制、增强通道功能的位点,N端磷酸化抑制通道功能,而C端磷酸化增强通道功能;KCNE1上的S102磷酸化则抑制通道功能。(本文来源于《河北医科大学》期刊2017-04-01）
刘涛,楚溪,宋涛,韩雪,宋琼涛[6]（2016）在《西红花苷对人胚肾细胞293延迟整流钾电流的作用研究》一文中研究指出目的:研究西红花苷对人胚肾细胞(human embryonic kidney 293cell,HEK293)上表达的延迟整流钾电流的作用。方法:运用脂质体转染法,将人心肌细胞上的延迟整流钾电流通道蛋白基因转染到HEK293细胞上,采用穿孔膜片钳法记录西红花苷对快激活延迟整流钾电流(The rapidly activating delayed rectifier potassium current,IKr)和慢激活延迟整流钾电流(The slowly activating delayed rectifier potassium current,IKs)的影响。结果:西红花苷对表达在HEK293上的IKr和IKs均无明显作用。结论:西红花苷不影响延迟整流钾电流,临床使用不易诱发QT间期延长和心律失常。(本文来源于《亚太传统医药》期刊2016年24期）
马小飞[7]（2017）在《枸杞多糖对高糖所致视网膜神经节细胞凋亡、基因表达及延迟整流钾电流的影响》一文中研究指出目的:研究枸杞多糖(LBP)对高糖所致视网膜神经节细胞凋亡、基因表达及延迟整流钾电流的影响。方法:培养RGC-5视网膜神经节细胞株并分为对照组、高糖组、LBP组,分别用普通DMEM培养基、高糖DMEM培养基以及含有500ng/mL LBP的高糖DMEM培养基处理。处理后,采用Annexin V-FITC/PI试剂盒测定凋亡细胞数目,采用荧光定量PCR试剂盒测定凋亡基因及抗氧化基因的表达量,采用膜片钳检测延迟整流钾电流。结果:干预后12h、24h、36h、48h时,高糖组的细胞凋亡数目显着高于对照组,LBP组的细胞凋亡数目显着低于高糖组;干预后24h、48h时,高糖组细胞中c-fos、c-jun、caspase-3、caspase-9、Nrf-2、NQO1、HO-1的mRNA表达量以及IK、Gmax均显着高于对照组,V1/2显着低于对照组;LBP组细胞中c-fos、c-jun、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量以及IK、Gmax均显着低于高糖组,LBP组细胞中Nrf-2、NQO1、HO-1的mRNA表达量以及V1/2均显着高于高糖组。结论:枸杞多糖能够减轻高糖所致视网膜神经节细胞凋亡并抑制延迟整流钾电流的幅度。(本文来源于《海南医学院学报》期刊2017年05期）
赵瑛,徐亚吉,路雪婧,段俊国[8]（2016）在《视网膜神经节细胞凋亡对延迟整流钾电流的影响》一文中研究指出目的:观察视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡对延迟整流钾电流(delayed rectifier K~+ currents,I_K)的影响。方法:将原代培养2~3 d的SD乳大鼠RGCs分为对照组、加压0.5 h组、加压1 h组、加压1.5 h组和加压2 h组,对照组为常规培养6 d;其它各组常规培养6 d后用自行设计的加压装置加压80 mmHg,时间分别为0.5 h、1 h、1.5 h和2 h,通过连续波长多功能微孔板检测仪检测各组RGCs线粒体的荧光强度;通过全细胞膜片钳技术观察各组细胞膜电容(membrane capacitance,C_m)的变化,观察对照组与加压1 h组I_K、V_(1/2)、k和G_(max)的变化。结果:对照组RGCs线粒体的荧光强度与加压0.5 h组比较差异无统计学显着性,而加压1 h、1.5 h和2 h各组RGCs线粒体的荧光强度显着低于对照组(P<0.05);对照组RGCs的细胞Cm与加压0.5 h组比较差异无统计学显着性,其余各组RGCs的细胞C_m显着低于对照组(P<0.05)。与对照组比较,加压1 h能使电流幅度显着增加,在刺激电位为-10 m V~60 m V时,加压1 h组的电流密度明显大于对照组(P<0.05)。加压1 h组的G_(max)值明显高于对照组(P<0.05),V_(1/2)显着小于对照组(P<0.01),两组间比较k值的差异无统计学显着性。结论:视网膜神经节细胞凋亡伴有I_K通道电导增加,I_K增大。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2016年08期）
赵瑛,徐亚吉,段俊国,路雪婧[9]（2016）在《枸杞多糖对高压诱导凋亡的视网膜神经节细胞延迟整流钾电流的影响》一文中研究指出目的观察枸杞多糖(lycium bararum polysaccharides,LBP)对体外高压诱导调亡的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)钾电流的影响。方法生后2~3 d的SD乳大鼠RGCs原代培养,分为对照组、加压组和LBP组,对照组为常规培养6 d;加压组为常规培养6 d后用自行设计的加压装置加压1 h 80 mm Hg(1 k Pa=7.5 mm Hg);LBP组为常规培养5 d后,加入LBP共培养24 h后,再加压80 mm Hg 1 h。通过全细胞膜片钳技术观察各组钾电流、半数最大激活电压(V1/2)、斜率(K)、最大电导(Gmax)的变化。结果加压能使电流幅度显着增加,LBP能抑制加压引起的电流增加。在刺激电位为-10~60 m V时,加压组的电流密度明显大于对照组,差异有统计学意义(均为P<0.01,n=5/6);LBP组电流密度明显小于加压组,差异有统计学意义(均为P<0.01,n=6/8)。叁组钾电流V1/2总体差异有统计学意义(F=55.60,P<0.01),加压组V1/2(11.65±1.30)m V与对照组(21.42±1.33)m V、LBP组(19.33±13.75)m V比较,差异均有统计学意义(均为P<0.01);LBP组V1/2与对照组V1/2比较,差异无统计学意义(P>0.05)。叁组K值分别是17.09±1.24、16.58±1.18、18.13±1.29,总体差异无统计学意义(F=1.39,P>0.05)。叁组Gmax总体差异有统计学意义(F=3.77,P<0.05),加压组Gmax(0.59±0.13)与对照组Gmax(0.46±0.06)、LBP组Gmax(0.46±0.07)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);LBP组Gmax与对照组Gmax比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LBP能抑制加压引起的RGCs钾电流增加,对RGCs具有保护作用。(本文来源于《眼科新进展》期刊2016年06期）
刘雪莉[10]（2016）在《PKCα亚型中介α_(1A)肾上腺素受体下调快激活延迟整流钾电流及其机制》一文中研究指出哺乳类动物心室肌细胞延迟整流钾电流包括快、慢激活两种成分,其中负责快激活成分IKr的通道孔区亚单位由hERG(human ether-a-go-go-related gene)基因编码,hERG通道的激活引发动作电位3期复极的开始,对心肌的复极化有重要作用。h ERG基因突变是引发离子通道病的遗传分子基础。此外,疾病状态下,如高血压、冠心病、心肌缺血等引发的心肌肥厚和心衰以及糖尿病等,均伴有IKr下调,是造成获得性LQT综合征的重要原因。越来越多的证据表明,同其它细胞功能一样,磷酸化是调节hERG通道功能进而影响心肌电生理特性的有效方式,其中催化磷酸化反应的蛋白磷酸激酶C(protein kinase C,PKC)家族对hERG通道的调控备受关注。PKC依据它们的结构和激活的机制分为3类:即传统型PKC(cPKC,包括α、βI、βII和γ),为Ca2+依赖性的,被二脂酰甘油(DAG)、磷脂酰丝氨酸(PS)激活;新型PKC(nPKC,包括δ、ε、π和θ),为非Ca2+依赖性,被DAG和PS激活;非典型PKC(aPKC,包括ζ、?/λ),为非Ca2+依赖性,被PS激活。已知心肌细胞存在多种PKC亚型,可催化膜离子通道蛋白质丝氨酸/苏氨酸磷酸化,是神经体液因素调控通道功能的关键中介物。实验显示,缺血缺氧、血管紧张素II、氧化应激(H2O2)等不同病理刺激可激活心肌不同的PKC亚型,而不同PKC亚型可能对离子通道发挥不同的调节作用,如Makary等发现不同的PKC亚型对乙酰胆碱激活的K+通道存在激活与抑制两种不同的调控作用。有研究表明,?1A肾上腺素受体激活对hERG钾通道呈现急性下调作用,我们的前期研究发现Ang II激动AT1受体同样对hERG通道发挥急性抑制作用。AT1受体与?1A肾上腺素受体同属于Gq蛋白偶联受体,而PKC是受体激活后调控通道的主要中介分子。然而,二者对通道抑制的方式表现不同,激动?1A肾上腺素受体使通道激活曲线右移,而AT1受体激动并不影响通道的电压依赖性激活。由此我们推测,两种不同的Gq蛋白偶联受体可能通过不同的PKC亚型对通道发挥抑制作用。为验证以上假设,本研究主要采用全细胞膜片钳技术和westernblot技术,探索?1a肾上腺素受体激动剂a61603对豚鼠心室肌细胞以及异源表达系统hek293细胞上ikr/herg电流的影响。利用pkc亚型选择性抑制剂(抑制肽)以及激活肽,分析其中介的pkc亚型,并同angii对herg通道的调控作用相对比。同时利用磷酸化位点突变通道分析不同pkc亚型对通道调控的分子机制。第一部分?1a肾上腺素受体通过pkc?亚型抑制心室肌细胞ikr目的:观察选择性?1a肾上腺素受体激动剂a61603对成年豚鼠心室肌细胞快激活延迟整钾电流ikr的影响,分析中介其作用的pkc亚型。方法:在急性分离的豚鼠心室肌细胞上,全细胞膜片钳技术记录ikr,观察a61603对电流影响。结果:(1)a61603以浓度依赖的方式抑制ikr,ic50是300nm。在激活电压为+40mv时,a61603(1μm)作用10分钟ikr电流密度由对照组的0.93±0.04pa/pf下降至0.62±0.07pa/pf(p<0.01)。(2)选择性?1a肾上腺素受体抑制剂wb4101,以及pkc非选择性抑制剂bis-1明显减弱a61603对ikr的抑制作用,而pka非选择性抑制剂h89对其作用无显着影响。表明a61603激动?1a肾上腺素受体主要通过pkc途径抑制ikr。(3)pkc选择性抑制剂g?6976(抑制pkc?,?,?)与g?6983(抑制pkc?,?,?,δ,ζ)以及pkc?选择性抑制肽?c2-4明显减弱a61603对ikr的抑制作用,特异性pkcε抑制肽εv1-2无此作用。表明a61603激动?1a肾上腺素受体通过pkc?亚型抑制ikr。小结:在急性分离的豚鼠心室肌细胞上,a61603激动?1a肾上腺素受体对ikr产生急性抑制作用,这种抑制作用主要由pkc?介导。第二部分不同pkc亚型对herg电流的调节作用目的:在异源表达系统hek293细胞上研究pkc亚型激活肽对herg电流的作用,同时验证?1a肾上腺素受体激动对herg电流的调控作用,进一步验证?1a肾上腺素受体激动通过pkc?亚型抑制herg电流。方法:在共表达herg和人?1a肾上腺素受体基因的hek293细胞上,全细胞膜片钳技术记录herg电流,观察a61603及pkc亚型激活肽对电流影响,其中a61603为细胞外灌流给药方式,而pkc亚型激活肽采用细胞内电极内液给药方式。结果:(1)cpkc激活肽(cpkc-ap)与pkcε激活肽(ε-ap)均急性抑制herg电流。cpkc-ap对herg通道的半数激活电压v1/2由对照组的-18.6mv右移至-9.5mv(p<0.01),而ε-ap并未影响通道v1/2(p>0.05)。cpkc-ap与ε-ap降低通道电导率gmax分别降至对照组的56.8%与80.6%。(2)a61603急性抑制herg电流,半数激活电压v1/2由对照组的-16.9mv右移至-11.8mv(p<0.01),通道电导率gmax降低为对照组的70.8%,a61603对herg电流的影响与cpkc-ap的作用相近。(3)cpkc-ap减慢各去极化电压下herg通道的激活,ε-ap减慢去极化至0mv与20mv电压下herg通道的激活,对去极化至40mv与60mv电压下herg通道的激活无影响;cpkc-ap减慢herg通道的去活,ε-ap使herg通道的缓慢去活时间常数降低,快速去活时间常数无变化;cpkc-ap与ε-ap对herg电流的稳态失活与恢复均无影响。小结:在异源表达系统hek293细胞上,cpkc激活肽与pkcε激活肽对herg通道呈现不同的抑制方式。a61603急性抑制herg电流并使得v1/2右移且gmax下降,此作用与cpkc激活肽相似,进一步提示a61603激动?1a肾上腺素受体通过cpkc亚型抑制ikr。第叁部分?1a肾上腺素受体通过pkc?亚型抑制ikr/herg电流的机制目的:观察?1a肾上腺素受体激动对pkc亚型激活的影响,以及不同pkc亚型调节herg通道的分子机制。方法:在急性分离豚鼠心室肌细胞上,?1a肾上腺素受体激动剂a61603急性作用10分钟后,提取全细胞蛋白,采用pkcα与pkcε的磷酸化抗体做westernblot,以磷酸化pkc亚型蛋白含量的变化反映激动?1a受体对pkc亚型的选择性激活作用。在共表达herg-?pkc(将herg通道中18个潜在pkc磷酸化位点中除t74外的17个丝氨酸/苏氨酸突变)和人?1a肾上腺素受体基因的hek293细胞上,全细胞膜片钳技术记录herg电流,观察a61603及pkc亚型激活肽对电流影响,探究?1a肾上腺素受体激动抑制ikr/herg电流的分子机制。其中a61603采用细胞外灌流给药方式,而pkc亚型激活肽采用细胞内电极内液给药方式。结果:(1)a61603作用10分钟后使得豚鼠心室肌细胞p-pkcα亚型表达量增加至对照的2.72±0.25倍(p<0.01),而p-pkc?亚型无显着变化(p>0.05),表明?1a肾上腺素受体激动选择性激活pkcα亚型。(2)在瞬转突变通道的hek293细胞上,cpkc激活肽急性抑制herg-?pkc电流,pkcε激活肽对herg-?pkc电流无影响,两种亚型激活肽均未影响herg-?pkc电流的半数激活电压v1/2。(3)激活电压为0mv时,cpkc激活肽对herg-?pkc和herg-wt的尾电流与对照组相比分别降低39.3%与37.4%,电流抑制率无显着差异,gmax亦无统计学差异,表明cpkc激活对通道的下调作用与17个磷酸化位点关系不大,可能通过直接磷酸化t74位点或者其它非直接磷酸化途径实现;pkcε激活肽对herg-wt通道电流抑制率为29.3%,但对herg-?pkc尾电流几乎无影响,即通道磷酸化突变几乎取消了pkcε激活肽的作用,提示pkcε激活肽通过通道磷酸化调控通道功能。(4)a61603急性抑制herg-?pkc电流,激活电压为0mv时,电流密度抑制率为31.8%,与其对herg-wt尾电流的抑制率28.4%无统计学差异。表明当herg钾通道的17个pkc磷酸化位点突变后,a61603对通道尾电流的抑制作用依然存在,此作用与cpkc激活肽对通道作用相似。尽管理论上cpkc激活肽可激活包括α、βi、βii以及γ等在内的传统pkc亚型,由于pkcα介导a61603的作用,cpkc激活肽与a61603对通道呈现相似的调控方式提示cpkc激活肽主要激活pkcα。小结:?1a肾上腺素受体激动选择性激活pkcα亚型。pkcα和pkcε亚型通过不同的分子途径调控herg通道:pkcα可能通过直接磷酸化t74位点或者其它非直接磷酸化途径下调herg通道功能,而pkcε通过对herg通道的直接磷酸化抑制电流。结论:1在急性分离的豚鼠心室肌细胞和异源表达系统上,?1a肾上腺素受体激动剂a61603对ikr/herg电流呈现浓度依赖性抑制,此作用由pkcα亚型中介。2激动?1a肾上腺素受体可选择性激活pkcα亚型。3pkcα和pkcε亚型通过不同的分子途径调控herg通道:前者可能通过磷酸化t74位点或非通道磷酸化途径而急性抑制herg电流,而pkcε通过对hERG通道的直接磷酸化使Gmax降低而急性抑制电流。(本文来源于《河北医科大学》期刊2016-04-01）
延迟整流钾电流论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:观察左心室肥厚兔左心室内外膜心肌细胞中缓慢型延迟整流钾电流(IKs)通道KCNQ1和KCNE1 mRNA表达水平的差异,探讨IKs通道在兔肥厚心肌复极离散度增大中的作用。方法:55只雄性日本大耳白兔随机分为实验组30只和对照组25只。实验组行肾上腹主动脉次全结扎,使腹主动脉缩窄50%~60%;对照组除不做丝线结扎外,其余处理同实验组。术后8周处死动物,应用荧光定量PCR技术检测IKs通道KCNQ1和KCNE1 mRNA的表达。结果:对照组左心室内膜IKs通道mRNA表达水平低于心外膜(P<0.001);实验组左心室内外膜IKs通道mRNA表达水平均低于对照组(P<0.001)。结论:IKs通道减少使复极时限延长,其不均一性减小可能是肥厚心肌复极离散度增大的原因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
延迟整流钾电流论文参考文献
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