检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用

论文摘要

纽布病毒（nebovirus, NeV）是国内新发的犊牛腹泻病原,本试验目的是建立检测NeV的real-time RT-PCR方法。根据国内NeV流行株的聚合酶基因（RdRp）序列设计引物,通过反应条件和体系优化,成功建立基于TB Green检测NeV的real-time RT-PCR方法。结果显示:该方法在2.9×101～2.9×109copies·μL-1之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2=0.999 4,扩增效率为98%;该方法只特异性检出NeV,不检出常见无关病原;最低检测下限为29 copies·μL-1;批内和批间的变异系数分别为0.89%～1.89%和0.83%～1.15%;该方法对临床样本的检出率高于文献报道的三种检测方法（P<0.05）。对2018年8—11月采自新疆和辽宁的135份奶犊牛腹泻样本中NeV的检出率为67.41%,场阳性率为100%（15/15）。所建方法的特异性和稳定性好、灵敏度高,为NeV的检测和流行病学调查提供了有力的手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒 （菌） 株核酸和临床样本
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 引物的设计与合成
•   1.4 核酸提取
•   1.5 阳性标准品的制备
•   1.6 反应体系及条件的优化
•   1.7 熔解曲线分析和标准曲线的建立
•   1.8 特异性评价
•   1.9 敏感性测定
•   1.10 稳定性评价
•   1.11 四种RT-PCR对临床样本中NeV核酸检出率的比较
•   1.12 临床样本的检测
• 2 结 果
•   2.1 引物的特异性
•   2.2 优化的real-time RT-PCR反应体系及条件
•   2.3 标准曲线及熔解曲线
•   2.4 方法的特异性
•   2.5 方法的敏感性
•   2.6 方法的稳定性
•   2.7 四种方法对临床样本的检出率
•   2.8 临床样本中NeV的检出率
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭紫晶,何琪富,汤承,张斌,岳华

关键词: 实时荧光定量,犊牛腹泻,检测

来源: 畜牧兽医学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西南民族大学生命科学与技术学院,国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队

基金: “十三五”国家重点研发计划课题(2016YFD0500907),国家民委“青藏高原动物疫病防控创新团队”(13TD0057)

分类号: S852.65

页码: 893-900

总页数: 8

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