利用人源化酵母系统模拟tomosyn在囊泡运输过程中的功能

论文摘要

突触囊泡融合是由syntaxin-1A, synaptobrevin-2和突触小体相关蛋白25（SNAP-25）三个突触N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体（SNARE）蛋白共同介导完成的.这些突触SNARE蛋白之间的相互作用受到包括tomosyn在内的多种辅助蛋白的调控. tomosyn是一个syntaxin结合蛋白,并且它是一个突触囊泡融合的负调控因子.然而, tomosyn的具体作用方式并不完全清楚.本研究在酵母细胞中重构了tomosyn的抑制作用模型. SNARE蛋白是一种保守的蛋白,在酵母中,突触SNARE蛋白的同源蛋白参与了分泌囊泡和细胞膜的融合. Sso1是酵母中syntaxin-1A的同源蛋白.在之前的实验中,我们构建了一个SNARE嵌合体,命名为Sso1/187k-STX1AD133V,其中将Sso1的一部分替换为syntaxin-1A的相应部分.这个SNARE嵌合体可以取代Sso1在酵母细胞中的功能.过表达tomosyn对野生型酵母细胞的生长没有影响.然而, tomosyn的过表达干扰了含有Sso1/187K-STX1AD133V的细胞的生长.酵母双杂交试验结果表明,在酵母细胞中, tomosyn与syntaxin相互作用,而不是与Sso1相互作用.因此,我们可以使用含有Sso1/187K-STX1AD133V的酵母细胞作为分析tomosyn功能的工具.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株与质粒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 主要仪器
•   1.4 培养基及其他溶液配制
•   1.5 实验方法
• 2 结果
•   2.1 过表达tomosyn对野生型酵母的生长没有影响
•   2.2 过表达tomosyn抑制sso1?sso2? （pRS314-SS-O1pr-Sso1/STX1AD133V） 酵母的生长
•   2.3 tomosyn和syntaxin-1A可以在酵母中结合
•   2.4 Syntaxin-1A与tomosyn的结合需要syntaxin-1A的189～255位氨基酸
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邵侃凯,高晓冬,中西秀树

关键词: 酿酒酵母

来源: 中国科学:生命科学 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学生物工程学院

分类号: Q25

页码: 659-670

总页数: 12

文件大小: 1251K

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