导读:本文包含了分子鉴定和检测论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:北京市顺义区,ELISA,DAS,番茄斑萎病毒
分子鉴定和检测论文文献综述
郭京泽,胡佳续,王仲敏,刘梅,李兴红[1]（2019）在《菊花上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定》一文中研究指出菊花是一种重要的花卉和药用植物,受到病害侵染时,其会失去观赏价值。目前我国报道的侵染菊花的病毒种类主要有菊花B病毒(Chrysanthemum virus B,CVB)、番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)等。近年来,在北京市菊花产区发现,部分菊(本文来源于《植物保护学报》期刊2019年01期）
张怡,李幸,董正伟,王萌萌,刘翔[2]（2018）在《番茄茎腐病菌的分子鉴定及致病力检测》一文中研究指出本研究采用形态学观察、核糖体DNA转录间隔区(ITS)克隆、系统发育树和致病力检测等方法对河南周口地区番茄茎腐病菌进行分子鉴定和致病力检测,以期为茎腐病的抗病育种及病害防治提供一定的理论依据。形态学观察结果显示,从周口地区番茄上分离的茎腐病病原菌属于镰孢属,ITS序列分析及系统进化树分析进一步确定其为茄镰孢,分离物与茄镰孢福建分离物(JN232141.1)亲缘关系最近,聚在一个进化支上,致病力检测结果表明在测试的植物中该病菌对茄科植物龙葵的致病力最强,该病菌寄主范围广,可侵染茄科、十字花科多种植物。(本文来源于《植物保护》期刊2018年04期）
谢丽雪,张小艳,郑姗,张立杰,李韬[3]（2017）在《侵染西番莲的夜来香花叶病毒的分子鉴定及特异性检测》一文中研究指出【目的】鉴定福建果园西番莲上的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,Te MV),并建立用于该病毒特异性检测的分子快速检测方法,为该病毒的防治提供参考依据。【方法】采用血清学检测、电镜观察、通用简并引物RT-PCR、特异性引物RT-PCR对福建西番莲样品进行病毒检测,并对阳性样品的PCR产物进行克隆、测序;根据已报道的夜来香花叶病毒基因序列和本研究的序列测定结果,设计一对用于扩增Te MV外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长的特异性引物,通过反应条件优化,建立该病毒的特异性RT-PCR检测方法;序列测定结果利用BLAST程序和DNAMAN软件进行比对,同时对获得的CP基因序列采用Mr Bayes软件的贝叶斯法(Bayesian inference,BI)构建系统发育树并进行系统发育分析。【结果】血清学检测发现,一株表现有花叶、皱缩症状的西番莲样品与马铃薯Y病毒属(Potyvirus)通用抗体反应呈阳性;电镜观察结果表明,该株疑似带毒样品中含有大小约750 nm×12 nm的弯曲线状病毒粒子;Potyvirus通用简并引物RT-PCR从该样品中扩增到一条与预期大小相符的目的片段,克隆、测序获得长度为680 bp的序列,该序列与已报道的Te MV核苷酸序列一致性最高(98.2%)。特异性引物扩增获得的CP基因序列全长为816 bp(命名为BXGFJ-13分离物),与已报道的Te MV核苷酸序列、氨基酸序列一致性分别为86.2%—98.4%和88.2%—97.8%。系统发育分析结果表明,13个Te MV分离物共形成3个类群,相同地区或寄主来源的分离物优先相聚成簇,表现出很强的地理和寄主特异性。本研究获得的BXGFJ-13分离物与中国广西分离物(KJ789129)先以较高的后验概率聚为一个分支,再与泰国2个分离物(AM409188、AM409187)聚为第2类群(Group II),表明其在系统发育关系上与中国广西分离物的亲缘关系最近。利用特异性引物Te MV-CPf/Te MV-CPr建立的RT-PCR方法,具有良好的特异性,仅能从感染Te MV的西番莲样品上扩增出目的片段,而从黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、甜菜花叶病毒(Beet mosaic virus,Bt MV)、大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、虎眼万年青花叶病毒(Ornithogalum mosaic virus,Or MV)、洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)、东亚西番莲病毒(East Asian Passiflora virus,EAPV)等其他病毒样品及阴性对照上均未扩增出目的片段。灵敏度测定结果显示,该方法能从稀释102倍的RNA上扩增出目的片段。【结论】根据国际病毒分类委员会(ICTV)关于Potyvirus病毒不同成员的分类标准,同时结合血清学检测、电镜观察结果,证实福建果园表现花叶、皱缩症状的西番莲上携带有Te MV;建立的特异性RT-PCR方法能够用于Te MV的快速检测。(本文来源于《中国农业科学》期刊2017年24期）
刘昌燕,李莉,焦春海,万正煌[4]（2017）在《5种仓储豆象的分子鉴定和检测》一文中研究指出本研究以在检疫中经常被截获的5种豆象为研究对象,通过对GenBank中5种豆象mtDNA COⅠ序列的查询,并进行序列比对,共设计了30对引物,通过筛选获得5对能分别鉴定5种豆象的特异引物,并用50、25、10、5、1、0.5、0.1、0.05ng/μL 8个不同浓度系列的豆象DNA模板来检测灵敏度,结果表明,豌豆象和四纹豆象特异引物对的灵敏度为0.1ng/μL,蚕豆象、菜豆象和绿豆象特异引物对的灵敏度为0.5ng/μL。该方法可用于快速准确地鉴定5种豆象,对于豆象类害虫的检测监测具有重要意义。(本文来源于《植物保护》期刊2017年04期）
杨月梅,轩景丽,叶福宇,郭建洋,杨利艳[5]（2017）在《中国新发现芙新姬小蜂孤雌产雌品系的分子鉴定及其内共生菌Rickettsia的检测》一文中研究指出【目的】芙新姬小蜂Neochrysocharis formosa(Westwood)是世界上蔬菜潜叶蝇的优势寄生蜂。2015年6月,我们在北京发现该寄生蜂存在孤雌产雌品系(thelytokous strain),为在中国首次发现。由于芙新姬小蜂孤雌产雌品系和两性品系(arrhenotokous strain)难于从形态上进行区分,本研究旨在从分子水平对这两种品系进行鉴定,为孤雌产雌品系的后续研究和应用奠定基础。【方法】以芙新姬小蜂孤雌产雌品系TH-China和两性品系AR-China的室内饲养种群为研究对象,分别扩增芙新姬小蜂两种品系的核糖体基因(28S rDNA和ITS-1基因)和线粒体COⅠ基因序列,比较两种品系的遗传分化;采用Rickettsia特异性引物NforRick1/NforRick2扩增其16S rDNA,克隆测序并进行BLAST比对;检测在TH-China卵巢管、幼虫、蛹和成虫,以及AR-China成虫中是否含有诱导形成孤雌产雌特性的内共生菌Rickettsia。【结果】分别以引物LCO1490/HCO2198和COⅠ1/COⅠ2扩增的两段COⅠ基因序列为分子标记建立的系统发育树表明,芙新姬小蜂两种品系分别聚为2个分支,品系间的遗传距离分别为0.039和0.023;以ITS-1基因为分子标记时,两种品系间有21个差异位点,遗传距离为0.008;以28S rDNA为分子标记时,两种品系间无差异位点。从TH-China的Rickettsia中扩增的16S rDNA序列与日本报道的芙新姬小蜂孤雌产雌品系内共生菌Rickettsia sp.的16S rDNA序列(Gen Bank登录号:AB185963)100%一致。芙新姬小蜂TH-China卵巢管、幼虫、蛹和成虫中均含有Rickettsia,而AR-China成虫不含Rickettsia,推测Rickettsia是孤雌产雌特性的形成原因。【结论】线粒体COⅠ基因可将芙新姬小蜂孤雌产雌品系和两性品系分为2个明显的遗传支系,而核糖体基因28S rDNA和ITS-1基因在两种品系间没有遗传分化或不能形成2个遗传分化支系。(本文来源于《昆虫学报》期刊2017年05期）
丁超[6]（2017）在《辣椒烟草花叶病毒的分子鉴定及检测技术研究》一文中研究指出辣椒系茄科辣椒属一年或有限多年生草本植物,其营养价值极高,堪称“蔬菜之冠”。作为辣椒产销大省,贵州辣椒常年栽培面积500万亩左右,约占中国的20%,产值150亿左右,其经济对辣椒产业的依赖程度有上升之势。然而,近年来随着辣椒种质的交流,病毒随之扩散,并产生越来越严重的危害,造成极大的经济损失。因此,对辣椒病毒病的早期诊断并采取一定的防范措施对减少经济损失具有重要意义。烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)隶属于烟草花叶属(Tobamovirus),为(+)ssRNA病毒,主要通过汁液传播,病健叶轻微摩擦造成微伤口,病毒即可侵入,对辣椒的危害日益扩大。对植物病毒分离物进行分子鉴定并研究开发出快速灵敏的检测方法对病毒病的早期预防具有重要的理论及实践意义。本研究对采自贵州的辣椒病样进行了ELISA检测,对TMV贵州辣椒分离物(TMV-GZ)进行了分子鉴定,建立了同步检测TMV、PMMoV和CMV叁种辣椒重要病毒的多重RT-PCR方法和检测TMV的核酸斑点杂交方法,同时,建立并优化了TMV外壳蛋白(CP)基因的原核表达体系,以期为TMV抗血清的制备及免疫学检测方法的建立奠定基础。本研究获得的主要结论如下:1.成功克隆了TMV-GZ分离物全长CP基因序列,该基因长为480 bp,编码18 kDa的CP蛋白。TMV-GZ分离物CP基因序列与同属异种病毒的同源性仅为32%-65%,序列差异明显;相反,它与11个TMV病毒分离物的同源性在98%-99%之间;TMV及其它病毒分离物聚类形成3个明显分支,TMV-GZ与其他11个TMV分离物亲缘关系较近,而与同属其他3种病毒之间的进化距离较远,证实该分离物确为TMV。2.根据烟草花叶病毒(TMV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白(CP)编码序列设计了3对PCR检测引物,通过条件优化建立了同步检测以上3种辣椒病毒的多重RT-PCR方法。该多重RT-PCR体系不对ORSV、PVX和PVY等同属或不同属的其它病毒发生反应,特异性好;可检测到104×稀释的病毒cDNA模板,具有较高的灵敏度,可用于PMMoV、TMV和CMV 3种辣椒病毒的同步检测。3.基于TMV的CP序列,采用随机引物法制备了地高辛标记的TMV双链cDNA杂交探针(DIG-TMV CP),并初步建立了快速检测TMV的核酸斑点杂交(NASH)方法,该法具有较好的特异性和灵敏度(可检测到625×稀释的病毒RNA)。4.构建了TMV CP基因的原核表达载体pET32a_TMV CP。该CP基因以融合蛋白的形式获得了可溶性高效表达。优化后的原核表达条件为:0.8 mM IPTG诱导、25℃、200 rpm和9h。以重组的融合CP蛋白免疫小白鼠制备了TMV抗血清。(本文来源于《贵州师范大学》期刊2017-05-01）
孙淼,荆陈沉,楚成茹,吴根土,孙现超[7]（2017）在《重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定》一文中研究指出为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。(本文来源于《园艺学报》期刊2017年03期）
鲍敏丽,郑正,孟华,邓晓玲[8]（2016）在《江西抚州南丰蜜桔黄龙病菌的检测与分子鉴定》一文中研究指出2015年10月抚州地区南丰县和广昌县的南丰蜜桔植株出现了类似黄龙病的症状。为探明抚州地区南丰蜜桔是否携带黄龙病菌,从南丰县和广昌县采集疑似感染黄龙病的南丰蜜桔叶片,利用黄龙病菌的特异引物对其16SrDNA和β-操纵子基因进行PCR扩增,并利用生物信息学的方法对扩增产物进行同源性分析。结果表明,来自南丰县和广昌县的样品均检测到黄龙病菌,该病菌属于亚洲种。这是在江西抚州地区的南丰蜜桔上首次检测到黄龙病菌。(本文来源于《中国南方果树》期刊2016年06期）
奚彩丽,魏艳红,尧晨光,寇铮,胡康洪[9]（2016）在《一种肠道病毒71型毒株的一般生物学特性检测及分子鉴定》一文中研究指出目的对一种肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)毒株进行一般生物学特性检测及分子鉴定。方法将EV71毒株接种于人横纹肌瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞进行病毒培养,通过EV71致细胞病变效应(CPE)分析、CCID50法检测子代病毒产量、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EV71核酸合成情况以及免疫荧光印迹检测EV71蛋白表达水平,来确认其生物学特性;RT-PCR扩增EV71保守区的基因片段后进行基因测序,并将测序结果经BLAST程序进行同源性比对。结果该毒株接种RD细胞48 h后出现明显的CPE,其可在RD细胞中增殖,最终导致细胞死亡;该毒株在RD细胞中处于快速复制状态,其核酸合成与蛋白表达随时间的延长大量增加;该毒株与EV71/wuhan/3018/2010(KF501389)的核苷酸序列同源性为100%。结论该EV71毒株为EV71/wuhan/3018/2010,在RD细胞中可快速增殖,毒力较强,适合作为抗EV71药物筛选毒株。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2016年09期）
李文凤,王晓燕,黄应昆,单红丽,张荣跃[10]（2016）在《甘蔗种苗传播病害病原检测与分子鉴定》一文中研究指出我国蔗区(尤其云南)生态多样化,甘蔗病害病原种类复杂多样,多种病原复合侵染,尤其种苗传播病害病原具有潜育期和隐蔽性,传统方法难以诊断。精准有效地对甘蔗种苗传播病害病原进行诊断检测,明确监测病害致病病原是科学有效防控甘蔗种苗传播病害的基础和关键。本研究针对甘蔗种苗传播病害诊断检测基础薄弱、主要病害病原种类及株系(小种)不明等关键问题,以严重为害我国甘蔗生产的黑穗病、宿根矮化病、病毒病、白叶病等种苗传播病害为对象,系统建立了甘蔗黑穗病、宿根矮化病、白条病、赤条病、花叶病(SCMV、SrMV、SCSMV)、黄叶病、杆状病毒病、斐济病和白叶病9种种苗传播病害11种病原分子快速检测技术,为甘蔗种苗传播病害精准有效诊断、脱毒种苗检测及引种检疫提供了关键技术支撑。通过从不同生态蔗区广泛采集有代表性的甘蔗黑穗病、宿根矮化病、病毒病、白叶病等病害样品,系统分离鉴定明确病害病原种类及主要株系(小种)。结果表明:①云南和广西蔗区甘蔗黑穗病病原为甘蔗鞭黑粉菌(Ustilago scitaminea Sydow),病菌存在致病性和生理小种分化,云南蔗区存在生理小种1、小种2及新小种3。②21个蔗区21批1 270个样品宿根矮化病检测、测序分析,致病菌为Leifsonia xyli subsp.xyli,其核苷酸序列完全一致大小为438bp(GenBank登录号JX424816、JX424817),与GenBank中巴西、澳大利亚(登录号AE016822、AF034641)RSD致病菌相似性为100%;与美国路州(AF056003)的有1个碱基错配和1个碱基插入,相似性为99.54%。③引起甘蔗花叶病病原有甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)、甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)3种,SCSMV阳性检出率100%、SrMV阳性检出率27.27%、SCMV阳性检出率1.3%,SCSMV为最主要病原(扩展蔓延十分迅速、致病性强),SrMV为次要病原,且存在2种病毒复合侵染。83份SCSMV和34份SrMV克隆及测序分析,SCSMV序列分为3个大类群,中国分离物聚为1个类群,印度分离物聚为2个类群,中国分离物除JX467699外全聚在一起。SrMV形成2个组:Ⅰ和Ⅱ组,组间又分为2个亚组。不同来源SrMV在系统树中交叉存在,云南分离物在各个分支中普遍存在,表现出很高的遗传多样性。④甘蔗杆状病毒病病原为甘蔗杆状病毒(Sugarcane Bacilliform virus,SCBV),其核苷酸序列大小为589bp,与SCBV-Australia核苷酸和氨基酸序列相似性为74.0%和84.1%;同SCBV-Morocco核苷酸和氨基酸序列相似性为67.1%和66.7%,可见,SCBV不同分离物间基因组序列存在高度变异特性。⑤89份黄叶病毒阳性样品RT-PCR-RFLP分析结果表明,云南蔗区检测的甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)全部为BRA基因型。⑥甘蔗白叶病病原为SCWL植原体(Sugarcane white leaf phytoplasma),其核苷酸序列大小为210bp,与GenBank中公布的SCWL植原体基因组序列同源性在99.05%~100%。系统进化分析,SCWL序列分为3个类群,云南保山分离物聚为1个类群,与越南、缅甸、泰国聚在一起;云南临沧分离物聚为1个类群,与泰国、印度、日本聚在一起。研究结果丰富了种苗传播病害相关理论和技术基础,为监测预警和科学有效防控甘蔗种苗传播病害奠定了重要基础。(本文来源于《中国植物病理学会2016年学术年会论文集》期刊2016-08-05）
分子鉴定和检测论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究采用形态学观察、核糖体DNA转录间隔区(ITS)克隆、系统发育树和致病力检测等方法对河南周口地区番茄茎腐病菌进行分子鉴定和致病力检测,以期为茎腐病的抗病育种及病害防治提供一定的理论依据。形态学观察结果显示,从周口地区番茄上分离的茎腐病病原菌属于镰孢属,ITS序列分析及系统进化树分析进一步确定其为茄镰孢,分离物与茄镰孢福建分离物(JN232141.1)亲缘关系最近,聚在一个进化支上,致病力检测结果表明在测试的植物中该病菌对茄科植物龙葵的致病力最强,该病菌寄主范围广,可侵染茄科、十字花科多种植物。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分子鉴定和检测论文参考文献
[1].郭京泽,胡佳续,王仲敏,刘梅,李兴红.菊花上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定[J].植物保护学报.2019
[2].张怡,李幸,董正伟,王萌萌,刘翔.番茄茎腐病菌的分子鉴定及致病力检测[J].植物保护.2018
[3].谢丽雪,张小艳,郑姗,张立杰,李韬.侵染西番莲的夜来香花叶病毒的分子鉴定及特异性检测[J].中国农业科学.2017
[4].刘昌燕,李莉,焦春海,万正煌.5种仓储豆象的分子鉴定和检测[J].植物保护.2017
[5].杨月梅,轩景丽,叶福宇,郭建洋,杨利艳.中国新发现芙新姬小蜂孤雌产雌品系的分子鉴定及其内共生菌Rickettsia的检测[J].昆虫学报.2017
[6].丁超.辣椒烟草花叶病毒的分子鉴定及检测技术研究[D].贵州师范大学.2017
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[9].奚彩丽,魏艳红,尧晨光,寇铮,胡康洪.一种肠道病毒71型毒株的一般生物学特性检测及分子鉴定[J].中国生物制品学杂志.2016
[10].李文凤,王晓燕,黄应昆,单红丽,张荣跃.甘蔗种苗传播病害病原检测与分子鉴定[C].中国植物病理学会2016年学术年会论文集.2016