β-防御素130在大肠杆菌中的串联表达、纯化及生物活性分析

论文摘要

为了研究抗菌肽β-防御素130的生物学活性和实现大规模制备,通过改良其分子结构,构建表达载体pET28a-3×β-defensin130,利用大肠杆菌BL21 （DE3）作为宿主细胞诱导表达后为水溶性蛋白。对纯化后抗菌肽进行抑菌实验、稳定性实验、MTT实验和溶血性实验确定其生物活性。最终成功制备出25 kDa的重组蛋白,对金黄色葡萄球菌（ATCC25923）（45μg/mL）和单增李斯特菌（ATCC221633）（80μg/mL）等革兰氏阴性和阳性菌都表现出极强的抗菌活性,且其抗菌活性不受温度、pH值和蛋白酶消化等影响,MTT细胞毒性实验显示其对HEK293细胞无毒性且对兔源红细胞具有极低的溶血性。这将为新型抗菌肽的开发提供理论基础并推动抗生素替代产业快速发展。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株、细胞和质粒
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 pET28a-3×β-防御素130载体构建
•     1.2.2 融合蛋白的表达与优化
•     1.2.3 融合蛋白的亲和纯化
•     1.2.4 SDS-PAGE和Western blotting分析
•     1.2.5 最小抑菌浓度测定
•     1.2.6 抑菌圈测定
•     1.2.7 MTT法
•     1.2.8 溶血性试验
• 2 结果与分析
•   2.1 pET28a-3×β-防御素130载体的构建
•   2.2 3×β-防御素130的表达与优化
•   2.3 3×β-防御素130的纯化及Western blotting分析
•   2.4 3×β-防御素130抗菌谱的测定
•   2.5 3×β-防御素130对温度、pH值和蛋白酶消化的耐受性
•   2.6 3×β-防御素130的细胞毒性及溶血性
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 蔺艳君,董彬

关键词: 防御素,抗菌肽,原核表达,蛋白纯化,抗菌活性

来源: 生物工程学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 滨州学院生物与环境工程学院山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心,滨州学院艺术学院

基金: 山东省自然科学基金(No.ZR2018PC010),滨州学院博士科研启动费项目(No.2018Y09),滨州学院科研项目(No.BZXYG1811)资助~~

分类号: Q78

DOI: 10.13345/j.cjb.180492

页码: 1088-1096

总页数: 9

文件大小: 1613K

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