导读:本文包含了形成三链的寡核苷酸论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:因子,转录,核苷酸,应力,组织,元件,论文。
形成三链的寡核苷酸论文文献综述
杨益民,李黔宁,应大君,龚自力,成戎川[1]（2006）在《形成叁链DNA的寡核苷酸抑制切应力诱导的大鼠内皮细胞组织因子表达》一文中研究指出目的检测针对组织因子(TF)基因启动子区切应力反应元件(shear stress response elem ent,SSRE)设计的反向硫代形成叁链DNA的寡核苷酸(antiparallel phosphoroth ioate trip lex-form ing oligonuc leotide,apsTFO)对大鼠颈总动脉狭窄处内皮细胞TF表达的影响。方法采用硅胶管套扎法建立SD大鼠颈总动脉中段重度狭窄模型。应用原位杂交和免疫组织化学方法结合图像分析系统测定狭窄段内膜TF,Egr-1和Sp1的mRNA表达及蛋白合成。术前0.5 h在尾静脉注射0.5 mg.kg-1针对TF的SSRE结合位点设计合成的GT20-apsTFO,GT20-psTFO,GT21-apsTFO及部分绿色荧光素(FITC)标记的apsTFO,术后4 h检测血管内皮细胞内的TFO,术后6 h检测TFO对TF的抑制效果及对Egr-1和Sp1的影响。结果给予TFO后,在血管内皮细胞核中可见荧光分布。GT20-apsTFO和GT21-apsTFO对TF的mRNA表达和蛋白合成有显着性抑制(P<0.05),且GT20-apsTFO的抑制作用较强,与GT21-apsTFO组相比差异有显着性(P<0.05),GT20-psTFO对TF的mRNA表达和蛋白合成无明显抑制(P>0.05)。GT20-apsTFO,GT20-psTFO和GT21-apsTFO对Egr-1及Sp1的mRNA表达和蛋白合成无抑制作用。结论apsTFO能部分进入血管内皮细胞并在一定程度上抑制TF基因的表达,而不影响Egr-1和Sp1基因的表达。(本文来源于《药学学报》期刊2006年09期）
李黔宁[2]（2001）在《形成叁链DNA的寡核苷酸抑制内皮细胞TF表达的实验研究》一文中研究指出脑血栓形成是最常见的脑血管疾病之一。常常分布在脑血管相对狭窄、弯曲、分叉或动脉粥样硬化斑块的溪谷处。该疾病所引起的脑梗塞治疗效果差、病残率高，因此目前趋向于以预防血栓形成为主。血栓形成的叁要素包括：血管壁异常、血液成分改变及血流异常。针对在这些异常因素，只有抗血小板聚集药物-阿司匹林和噻氯匹啶（ticlopidine）对预防脑血栓形成有一定疗效。经大规模临床双盲对比试验证实，其有效率约20～30％。因此如何提高预防脑血栓形成的有效率成为目前的研究热点。 在心瓣膜病合并房颤时使用阻止纤维蛋白形成的抗凝药物（如肝素和华法令），可降低缺血性脑血管病发病率68％～86％。说明抗凝药物预防血栓形成具有显着疗效。然而上述抗凝药物易并发严重的出血副作用，临床使用时需要严格监测出凝血时间，使用不方便，未能推广应用于预防脑血栓形成所致的缺血性脑血管病。 近年来，组织因子（Tissue factor，TF）在促凝中的作用日益受到关注。组织因子是内皮细胞膜上固有的糖蛋白，它与循环中凝血因子Ⅶ相遇，形成TF-Ⅶa复合物，活化凝血因子X，后者促进凝血酶形成，继之纤维蛋白形成，导致血液凝固。研究表明正常基础状态下TF在脑、肺、肾、皮肤及粘膜等重要器官的血管外层细胞大量表达，以在血管破裂时保证重要器官及时止血。血管内内皮细胞和单核细胞，在基础状态下不表达TF，使血液和血管外的TF隔离，从而保证血液流动通畅，维持血液循环功能正常。但在动脉粥样硬化的脑血管分叉或弯曲处，随着局部切应力显着变化，诱导内皮细胞表达TF，触发局部血管内血栓形成，是触发动脉硬化血管内血栓形成的主要始发因素之一。因此抑制切应力诱导的TF表达是提高预防脑血栓形成效果的主要途径之一。 控制人 TF表达的 TF基因位于 1号染色体门 pZI—22人 CDNA全长2．3 kb。其TF基因启动子的3个Spl肥gr刁位点，是切应力诱导启动TF基因转录的特异调节元件，即切应力反应元件（shear stress resPonsiveelement，SSRE人该元件在切应力显着降低、升高或紊流时与切应力诱导产生的转录因子 Egr4和 Sp结合而激活，继之启动 TF基因表达。因此，SSRE与转录因子Egr二和Spl结合是切应力诱导内皮细胞TF基因表达的关键环节之一。可见阻断SSRE激活对于抑制切应力诱导的TF基因表达具有重要意义。 反基因技术所利用的形成叁股螺旋的寡核昔酸krghe helix－forming ，TFOL具有特异性碱基识别能力，能够与线状、松弛环状及超螺旋状质粒DNA或染色体DNA结合形成叁股螺旋结构，阻止靶DNA与调节蛋白。多聚酶、转录因子、甲基化酶）结合，阻止靶基因转录、复制及表达。TFO是人工操纵特异基因表达的工具，寡核昔酸经过修饰后可直接透过生物膜，迅速分布于核内靶基因组。己用于抗病毒、抗肿瘤等多方面研究。本课题欲设计合成筛选在生理环境中能特异性地内皮细胞TF基因启动子区SSRE结合的TFO与SSRE结合成叁链DNA，阻止SSRE与切应力诱导的Egr1和Spl结合，从而阻止SSRE激活，导致TF基因转录不能启动，TF表达因而受到抑制，到达阻断切应力诱导的血栓形成。本实验针对SSRE的3个即l用grd位点的DNA序列，设计合成TFO，采用电泳迁移分析筛选亲和性最高的TFO、进行硫代磷酸酯修饰，通过同位素标记TFO，测定其细胞内的cpm值，确定其透膜性、耐酶性及亚细胞分布，利用兔疫细胞化学和原位杂交方法结合图像分析，以及TF促凝活性测定初步确定 TFO的抑制效果，同时利用 F．actin和 G．actin荧光染色确定切应力作用的可靠性和稳定性。主要结果与结论如下： 1．TF基因启动子区的切应力反应元件门SRE）由3个Sp用grl位点组成，其中第1位点位于（q5～＊、第二位点位于（七8～80X第3 ·XI· 音“位点位于＋56～68卜这些位点的DNA序列符合反基因技术的不典型靶序列要求，即含有喀唆断点的多聚瞟吟靶序列。根据反基因技术的碱基配对规则，针对第 1位点的 DNA序列，我们设计合成了 4条 14碱基寡核昔酸，针对第2位点，设计合成了8条ZI碱基寡核苦酸，针对第3位点，设计合成了 2条 15碱基寡核昔酸。经过凝胶滞留法（EMSA）筛选，每个位点分别筛选出 1条 TFO，即第一位点为 TI 4GTa，第二位点为 TZI GTa，第叁位点为T15GTa，可见均为反向GT寡核昔酸。按其亲和力大小排序为：＊1＊W拙：3．6X IO“‘峋＞T14＊W＊d：1刀X 100M）＞T15＊W＊d：1刀丫10’M卜将筛选出的 3条反向 GT寡核昔酸进行硫代磷酸酯修饰，其亲和力较修饰前稍有降低J条硫代反向GT寡核昔酸亲和性排序分别为：Kd：2．3X10”’M（TZIGTa－ps）＞ Kd：3．8X10”’M（T14GTa－ps）＞ Kd：l．5X10”‘M（T15GTa－pS）与修饰前比较，其亲和性分别下降6．3、3．8、0．5（倍人该结果与其它相关研究报告结果类?(本文来源于《第叁军医大学》期刊2001-05-01）
形成三链的寡核苷酸论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
脑血栓形成是最常见的脑血管疾病之一。常常分布在脑血管相对狭窄、弯曲、分叉或动脉粥样硬化斑块的溪谷处。该疾病所引起的脑梗塞治疗效果差、病残率高，因此目前趋向于以预防血栓形成为主。血栓形成的叁要素包括：血管壁异常、血液成分改变及血流异常。针对在这些异常因素，只有抗血小板聚集药物-阿司匹林和噻氯匹啶（ticlopidine）对预防脑血栓形成有一定疗效。经大规模临床双盲对比试验证实，其有效率约20～30％。因此如何提高预防脑血栓形成的有效率成为目前的研究热点。 在心瓣膜病合并房颤时使用阻止纤维蛋白形成的抗凝药物（如肝素和华法令），可降低缺血性脑血管病发病率68％～86％。说明抗凝药物预防血栓形成具有显着疗效。然而上述抗凝药物易并发严重的出血副作用，临床使用时需要严格监测出凝血时间，使用不方便，未能推广应用于预防脑血栓形成所致的缺血性脑血管病。 近年来，组织因子（Tissue factor，TF）在促凝中的作用日益受到关注。组织因子是内皮细胞膜上固有的糖蛋白，它与循环中凝血因子Ⅶ相遇，形成TF-Ⅶa复合物，活化凝血因子X，后者促进凝血酶形成，继之纤维蛋白形成，导致血液凝固。研究表明正常基础状态下TF在脑、肺、肾、皮肤及粘膜等重要器官的血管外层细胞大量表达，以在血管破裂时保证重要器官及时止血。血管内内皮细胞和单核细胞，在基础状态下不表达TF，使血液和血管外的TF隔离，从而保证血液流动通畅，维持血液循环功能正常。但在动脉粥样硬化的脑血管分叉或弯曲处，随着局部切应力显着变化，诱导内皮细胞表达TF，触发局部血管内血栓形成，是触发动脉硬化血管内血栓形成的主要始发因素之一。因此抑制切应力诱导的TF表达是提高预防脑血栓形成效果的主要途径之一。 控制人 TF表达的 TF基因位于 1号染色体门 pZI—22人 CDNA全长2．3 kb。其TF基因启动子的3个Spl肥gr刁位点，是切应力诱导启动TF基因转录的特异调节元件，即切应力反应元件（shear stress resPonsiveelement，SSRE人该元件在切应力显着降低、升高或紊流时与切应力诱导产生的转录因子 Egr4和 Sp结合而激活，继之启动 TF基因表达。因此，SSRE与转录因子Egr二和Spl结合是切应力诱导内皮细胞TF基因表达的关键环节之一。可见阻断SSRE激活对于抑制切应力诱导的TF基因表达具有重要意义。 反基因技术所利用的形成叁股螺旋的寡核昔酸krghe helix－forming ，TFOL具有特异性碱基识别能力，能够与线状、松弛环状及超螺旋状质粒DNA或染色体DNA结合形成叁股螺旋结构，阻止靶DNA与调节蛋白。多聚酶、转录因子、甲基化酶）结合，阻止靶基因转录、复制及表达。TFO是人工操纵特异基因表达的工具，寡核昔酸经过修饰后可直接透过生物膜，迅速分布于核内靶基因组。己用于抗病毒、抗肿瘤等多方面研究。本课题欲设计合成筛选在生理环境中能特异性地内皮细胞TF基因启动子区SSRE结合的TFO与SSRE结合成叁链DNA，阻止SSRE与切应力诱导的Egr1和Spl结合，从而阻止SSRE激活，导致TF基因转录不能启动，TF表达因而受到抑制，到达阻断切应力诱导的血栓形成。本实验针对SSRE的3个即l用grd位点的DNA序列，设计合成TFO，采用电泳迁移分析筛选亲和性最高的TFO、进行硫代磷酸酯修饰，通过同位素标记TFO，测定其细胞内的cpm值，确定其透膜性、耐酶性及亚细胞分布，利用兔疫细胞化学和原位杂交方法结合图像分析，以及TF促凝活性测定初步确定 TFO的抑制效果，同时利用 F．actin和 G．actin荧光染色确定切应力作用的可靠性和稳定性。主要结果与结论如下： 1．TF基因启动子区的切应力反应元件门SRE）由3个Sp用grl位点组成，其中第1位点位于（q5～＊、第二位点位于（七8～80X第3 ·XI· 音“位点位于＋56～68卜这些位点的DNA序列符合反基因技术的不典型靶序列要求，即含有喀唆断点的多聚瞟吟靶序列。根据反基因技术的碱基配对规则，针对第 1位点的 DNA序列，我们设计合成了 4条 14碱基寡核昔酸，针对第2位点，设计合成了8条ZI碱基寡核苦酸，针对第3位点，设计合成了 2条 15碱基寡核昔酸。经过凝胶滞留法（EMSA）筛选，每个位点分别筛选出 1条 TFO，即第一位点为 TI 4GTa，第二位点为 TZI GTa，第叁位点为T15GTa，可见均为反向GT寡核昔酸。按其亲和力大小排序为：＊1＊W拙：3．6X IO“‘峋＞T14＊W＊d：1刀X 100M）＞T15＊W＊d：1刀丫10’M卜将筛选出的 3条反向 GT寡核昔酸进行硫代磷酸酯修饰，其亲和力较修饰前稍有降低J条硫代反向GT寡核昔酸亲和性排序分别为：Kd：2．3X10”’M（TZIGTa－ps）＞ Kd：3．8X10”’M（T14GTa－ps）＞ Kd：l．5X10”‘M（T15GTa－pS）与修饰前比较，其亲和性分别下降6．3、3．8、0．5（倍人该结果与其它相关研究报告结果类?
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
形成三链的寡核苷酸论文参考文献
[1].杨益民,李黔宁,应大君,龚自力,成戎川.形成叁链DNA的寡核苷酸抑制切应力诱导的大鼠内皮细胞组织因子表达[J].药学学报.2006
[2].李黔宁.形成叁链DNA的寡核苷酸抑制内皮细胞TF表达的实验研究[D].第叁军医大学.2001
论文知识图
