酿酒酵母中PiggyBac转座子筛选系统的构建

论文摘要

PiggyBac(PB)是来源于粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的TTAA型转座子。PB转座子系统可作为一种插入型突变工具,应用于多种真核细胞中。本研究在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中构建了一个基于PB转座子的筛选系统。系统由插入ADE2基因编码框的PB转座子及由半乳糖启动子调控表达的PB转座酶(PBase)两部分组成。在PBase诱导下,PB转座子可以从原始位点无痕移除并随机插入新的基因位点。PB转座子在转座过程中保持单一拷贝数,在每个突变细胞中只有一个插入位点,并可快速检测突变基因。实验结果表明:所构建的PB转座子筛选系统可应用于酿酒酵母中的基因筛选。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒和酵母菌株
•   1.2 细胞培养
•   1.3 PB转座子系统筛选方法
•   1.4 巢式聚合酶链式反应验证PB插入位点
•   1.5 生长曲线测定
•   1.6 PB转座子移除率和再插入率计算
• 2 结果与分析
•   2.1 酿酒酵母菌株中构建PB转座子系统
•   2.2 转座系统中PB移除率和再插入率
•   2.3 转座过程中PB转座子拷贝数的检测
• 3 讨论
• 4 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周林希,柳艺石,赵神保,张慧杰,高晓冬,藤田盛久

关键词: 酿酒酵母,转座子,基因筛选

来源: 食品与生物技术学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 江南大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31400693),江苏省自然科学基金项目(BK20140141),中央高校基本科研业务费专项(JUSRP51508)

分类号: Q78;TS261.11

页码: 15-22

总页数: 8

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