导读:本文包含了精原干细胞介导论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,转基因,小鼠,基因,蛋白,乙肝病毒,活体。
精原干细胞介导论文文献综述
乐威,岂利昕,章劲夫,吴登龙[1]（2017）在《低剂量电离辐射诱发的小鼠精原干细胞53BP1介导的DNA双链损伤应答》一文中研究指出研究背景近些年男性不育的发病率有显着地增长,并已成为影响社会发展的严重问题。揭示精原干细胞(spermatagonial stem cells,SSC)干性维持的机制对理解生精过程以及对男性不育的治疗有着重要的意义,而由各种因素导致的DNA损伤都能使精原干细胞失去其干性。因此,研究精原干细胞DNA损伤的修复机制有重要的现实意义。研究目的检验低剂量电离辐射造成的DNA双链损伤(DNA double strand breaks,DSB)对小鼠精原干细胞产生的影响,并揭示精原干细胞DNA双链损伤修复的具体通路选择。(本文来源于《第十二次全国中西医结合男科学术大会暨全国中西医结合男科诊疗技术研修班暨2017上海市中西医结合学会上海市中医药学会泌尿男科专业委员会学术年会讲义论文资料汇编》期刊2017-09-01）
李金梅[2]（2016）在《雄激素通过间接调控PLZF介导的精原干细胞分化机制研究》一文中研究指出雄激素是一种在精子发生过程中具有至关重要作用的类固醇激素,但是它在睾丸微环境中发挥作用的分子机制尚未完全揭示。此外,雄激素受体(androgen receptor,AR)是否在生殖细胞表达曾经也是一个有争议的话题。目前许多观点认为,睾丸生殖细胞里不表达雄激素受体,更确切的说,它在小鼠等啮齿类、哺乳类动物的精子持续不断的发生过程中不是必需的。然而,我们的实验结果检测到AR在出生后两天的小鼠睾丸的前精原细胞有微弱的表达,但是在出生后第叁天随着前精原细胞的迁移和定植,微弱的AR信号在生殖细胞中消失,并在支持细胞(Sertoli cells)中开始表达。进一步的实验证明,从出生后5天开始小鼠的精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)中缺乏AR的表达,因此我们推测雄激素通过支持细胞中的雄激素受体间接调控精子发生,并以精原干细胞-支持细胞共培养系统和药物阻断雄激素的小鼠为模型来研究AR在精子发生中的调控机制。我们首先建立精原干细胞-支持细胞共培养系统,然后通过添加雄激素和雄激素拮抗剂来调节系统中雄激素的水平,并利用蛋白质免疫印迹技术检测相关信号蛋白的表达,然后对成年小鼠腹腔注射雄激素受体拮抗剂,再应用免疫组化、免疫荧光以及蛋白质免疫印迹技术检测对精子发生的影响,结果显示雄激素对精原细胞中早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF)有负调控效应,随后我们利用小干扰RNA(siRNA)技术敲低精原干细胞和支持细胞共培养系统中Wt-1和β1-integrin的表达,发现转录因子Wt-1和跨膜蛋白β1-integrin作为潜在的中间信号分子参与睾丸微环境中支持细胞和精原干细胞的相互作用,调控精子发生。这些结果表明,雄激素以一种间接的方式通过多个步骤的信号转导启动精原干细胞的分化、促进精子发生。本实验通过探讨雄激素对精原干细胞维持基因Plzf的调控作用,进一步揭示了雄激素在精子发生过程中的生物学机制,明确了雄激素对精原干细胞增殖和分化活性的确切影响,从而为治疗雄性动物不育以及人类的生殖疾病提供研究依据。(本文来源于《南京农业大学》期刊2016-05-01）
辛颖,张涛,张优优,张智英[3]（2014）在《慢病毒活体介导精原干细胞生产转基因小鼠》一文中研究指出【目的】用慢病毒在体内感染精原干细胞,建立转基因动物生产技术平台。【方法】用叁质粒慢病毒载体系统转染293T细胞包装慢病毒,转染后裂解细胞,收集携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒。将慢病毒液注射到小鼠曲细精管,获得F0代小鼠,制备小鼠睾丸组织切片,进行免疫双荧光检测。将F0代小鼠与野生型母鼠交配,获得F1代小鼠,PCR检测F1代是否为转基因小鼠。【结果】通过裂解细胞的方法成功制得慢病毒,将其注射到小鼠曲细精管,获得了10只F0代小鼠,经免疫双荧光检测,发现慢病毒可在活体上感染精原干细胞。8只F0代小鼠与野生型母鼠交配后共获得了41只F1代小鼠,经PCR检测,21只携带慢病毒基因片段,转基成功率为51.22%,表明慢病毒介导的基因改造是可遗传的。【结论】建立了一种操作简单、花费少、易于实施的慢病毒活体介导精原干细胞生产转基因小鼠的技术体系,该技术也可以推广到其他动物上,对于加速功能基因鉴定、疾病模型构建和家畜转基因育种等领域的研究有促进作用。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2014年06期）
邱峰龙,李碧春[4]（2012）在《精原干细胞介导法制备转基因羊的研究进展》一文中研究指出精原干细胞介导法制备转基因动物是用试验导入的方法将外源基因移入动物细胞并整合到其基因组中,伴随着精原干细胞分化成精子,通过受精最终使外源基因得以表达。近年来,随着对精原干细胞研究的不断深入,人们发现其在建立转基因动物方面具有巨大的应用潜力和优势。作者从精原干细胞的生物学特性及携带外源基因的原理等方面阐述了其应用于转基因动物制备的理论机制,同时介绍了精原干细胞介导法在制备转基因动物方面,特别是转基因羊生产中的应用现状。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2012年12期）
孙敏,施青青,阴彦辉,傅德智,秦玉蓉[5]（2011）在《体内精原干细胞介导法制备抗病转基因鸡》一文中研究指出实验旨在利用精原干细胞介导的方法体内转染融合基因EGFP-MMx,制备抗病毒性疾病转基因鸡。采用脂质体包埋法,睾丸内注射EGFP-MMx融合基因,术后采集30、40、50、60、70、80 d睾丸组织进行冰冻切片、基因组PC R、点杂交实验,转染后60 d公鸡精液人工授精于正常母鸡,对后代血液采用PC R检测技术、R T-PC R和W estern blot方法检测外源基因EGFP-MMx的整合表达情况。结果表明:睾丸基因组点杂交阳性率为72.2%。通过PC R、R T-PCR检测方法,在实验公鸡精液和F1代血液中检测到目的基因,精液阳性率为25%,F1代阳性率为10.53%,Western blot检测F1代阳性率为7.89%。结果证明外源基因通过睾丸注射法可整合到基因组上,为培育抗病转基因鸡提供参考依据。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2011年19期）
李碧春,孙国波,孙怀昌,徐琪,高波[6]（2008）在《体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡》一文中研究指出本研究以重组的绿色荧光蛋白基因为标记,采用公鸡睾丸内转染精原干细胞(sperma togonial stem cells,SSCs)和体外转染SSCs再移植的方法,探索家禽转基因新方法.同时比较了公鸡接受不同剂量外源基因的转基因效率.结果显示:(i)接受外源基因剂量分别为50,100,150和200μg/mL时,48h后睾丸细胞显示绿色荧光的比率分别为4.0%,8.7%,10.2%和13.6%,差异显着(P<0.05).睾丸内注射外源基因第25天后,随着时间的增长,精子表达绿色荧光的百分率逐渐提高,到第70天后表达率达到高峰,且趋于稳定,4个剂量组分别为12.7%,12.8%,15.9%和19.1%.差异显着(P<0.05);(ii)第70天的睾丸冰冻切片观察,曲精细管周边均有荧光表达;(iii)F1代中,56.2%(254/452)的胚盘表达绿色荧光.活鸡血样PCR检测56.5%(13/23)为阳性,Southern blot检测证明外源基因已整合到鸡基因组;F2代中,53.2%(275/517)的胚盘表达绿色荧光.活鸡血样PCR检测52.9%(9/17)为阳性;(iv)F1代和F2代鸡心、肝、肾和肌肉等组织冰冻切片观察和PCR检测,绿色荧光阳性率在50.0%~66.7%之间;(v)体外SSCs转染外源基因后移植,可在受体公鸡睾丸中生长发育,正常产生精子.后代中,12.5%(8/64)的胚盘表达绿色荧光,活鸡血样PCR检测11.1%(2/18)为阳性.结果证明精原干细胞介导转基因是一种简单、高效、可大群体生产转基因鸡的有效途径.(本文来源于《中国科学(C辑:生命科学)》期刊2008年07期）
丁晓麟[7]（2008）在《小鼠精原干细胞分离、纯化、冷冻、培养、移植及其体内介导转基因的研究》一文中研究指出精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)指既能自我更新维持自身群体数量恒定,又能定向分化成生殖细胞进而产生精子的一类原始精原细胞,具有干细胞最根本的生物学性质。目前,SSCs的研究在动物精子发生发育机理、医学临床的男性生殖生理和转基因动物的制备等方面具有广阔的应用前景,已成为干细胞研究的热点之一。本试验以小鼠精原干细胞为材料,对其冷冻保存、培养以及体内介导的转基因技术进行初步研究,以期为SSCs的进一步研究和利用提供参考资料。本试验的具体内容如下:1.用组合酶消化法制备6日龄小鼠的生殖细胞悬液;采用差速贴壁法结合Percoll不连续密度梯度离心法分离纯化精原干细胞,接种于含10%胎牛血清的极限必需培养基α(minimum essential medium alpha,MEMα)中,37℃,5%CO_2饱和湿度培养,观察培养细胞的生长和形态变化。结果6日龄小鼠的生精小管主要包含细胞为精原干细胞、支持细胞,精原干细胞纯化后纯度达80%以上,精原干细胞主要分布在28%～36%的Percoll梯度中。2.以6日龄雄性昆明小白鼠精原干细胞为材料,加入不同的冷冻液以及采用不同的降温速率冷冻小鼠精原干细胞。以MEMα为基本培养基,加入10%胎牛血清和100ng/mL的胶质细胞源性神经营养因子,体外培养复苏后精原干细胞,WST-8比色法分析培养精原干细胞的增殖率,运用碱性磷酸酶细胞化学染色和逆转录.聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,对培养的精原干细胞进行鉴定,采用睾丸网注射法将非程控降温方式冷冻的小鼠精原干细胞移植到受体不育小鼠睾丸生精小管,检测精原干细胞特性。结果显示,冷冻液中添加10%二甲基亚砜、10%胎牛血清、0.07mol/L蔗糖时,以1℃/min程控降温方式冷冻小鼠SSCs,细胞解冻后活率最高,达84%以上;采用非程控降温方式冻存精原干细胞,尽管细胞解冻后活率相对于程控降温方式略低,但具有方法简单、易于操作、无需昂贵仪器的优点,复苏后精原干细胞贴壁时间为8 h～12 h,24 h可见细胞分裂,48 h细胞出现迅速增殖,96 h可见较多含20～25细胞的细胞团,此时,精原干细胞增殖近5倍;精原干细胞移植后,在受体小鼠睾丸生精小管重新启动精子发生。试验结果表明,本试验所用的冷冻条件可以使经长期冷冻的精原干细胞保留其特性;所用培养条件可以使经长期冷冻的精原干细胞短期快速增殖。3.应用显微注射仪将脂质体包裹的质粒pEGFP-N1通过睾丸网注射到4周龄昆明小白鼠睾丸生精小管内。注射后6周,与自然发情雌鼠交配,分娩后3周,剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PcR法和斑点杂交法检测仔鼠基因组中的外源DNA整合。结果,共注射4只雄性小鼠,3只存活,并且具有交配能力,共获仔鼠63只,其中2只为PCR阳性和点杂交阳性仔鼠。试验结果初步证明,用睾丸网注射法制备转基因动物是可行的。(本文来源于《南京农业大学》期刊2008-04-01）
李新[8]（2007）在《转基因家禽:走进精原干细胞介导新时代——转基因家禽研究专家李碧春教授专访》一文中研究指出自1980年人类首次报道用原核显微注射法成功制作转基因小鼠以来,转基因动物一直是生命科学研究的热门领域。家禽具有个体小、世代周期短、维持种群容易、生产力高的特点,因此作为转基因的对象有着独特的优越性。(本文来源于《中国家禽》期刊2007年22期）
李丹,胡火珍,李小玉,钟立武,胡以平[9]（2003）在《显微注射法和精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的方法学比较》一文中研究指出目的 探讨经济简便有效的制备转基因小鼠的方法。方法 分别将线形和环状乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X按常规显微注射入小鼠受精卵 ,导入假孕雌鼠 ,同时应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3-X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N小鼠雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,运用 PCR法和免疫组化法对所有转基因仔鼠进行鉴定 ,比较这两种方法的优缺点。结果 显微注射法繁琐 ,技术要求高 ,阳性率相对较高 ,达 16 .6 %。精原干细胞介导法技术简便 ,阳性率为 6 .2 5 %。结论 初步证明用精原干细胞介导法是一种经济简便有效的制备 X基因转基因小鼠的方法(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2003年04期）
钟立武,李丹,胡火珍,李小玉,邓候富[10]（2002）在《用精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究》一文中研究指出目的 探讨精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的可行性 .方法 构建乙肝病毒X基因表达载体 pcDNA3 X ;应用微量注射针将脂质体包裹的 pcDNA3 X表达载体直接注入C5 7BL/ 6N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源DNA和肝组织中表达的 pX蛋白 .结果 共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %.结论 初步明用精原干细胞介导法制备X基因转基因小鼠是可行的 .(本文来源于《四川大学学报(自然科学版)》期刊2002年S1期）
精原干细胞介导论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
雄激素是一种在精子发生过程中具有至关重要作用的类固醇激素,但是它在睾丸微环境中发挥作用的分子机制尚未完全揭示。此外,雄激素受体(androgen receptor,AR)是否在生殖细胞表达曾经也是一个有争议的话题。目前许多观点认为,睾丸生殖细胞里不表达雄激素受体,更确切的说,它在小鼠等啮齿类、哺乳类动物的精子持续不断的发生过程中不是必需的。然而,我们的实验结果检测到AR在出生后两天的小鼠睾丸的前精原细胞有微弱的表达,但是在出生后第叁天随着前精原细胞的迁移和定植,微弱的AR信号在生殖细胞中消失,并在支持细胞(Sertoli cells)中开始表达。进一步的实验证明,从出生后5天开始小鼠的精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)中缺乏AR的表达,因此我们推测雄激素通过支持细胞中的雄激素受体间接调控精子发生,并以精原干细胞-支持细胞共培养系统和药物阻断雄激素的小鼠为模型来研究AR在精子发生中的调控机制。我们首先建立精原干细胞-支持细胞共培养系统,然后通过添加雄激素和雄激素拮抗剂来调节系统中雄激素的水平,并利用蛋白质免疫印迹技术检测相关信号蛋白的表达,然后对成年小鼠腹腔注射雄激素受体拮抗剂,再应用免疫组化、免疫荧光以及蛋白质免疫印迹技术检测对精子发生的影响,结果显示雄激素对精原细胞中早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF)有负调控效应,随后我们利用小干扰RNA(siRNA)技术敲低精原干细胞和支持细胞共培养系统中Wt-1和β1-integrin的表达,发现转录因子Wt-1和跨膜蛋白β1-integrin作为潜在的中间信号分子参与睾丸微环境中支持细胞和精原干细胞的相互作用,调控精子发生。这些结果表明,雄激素以一种间接的方式通过多个步骤的信号转导启动精原干细胞的分化、促进精子发生。本实验通过探讨雄激素对精原干细胞维持基因Plzf的调控作用,进一步揭示了雄激素在精子发生过程中的生物学机制,明确了雄激素对精原干细胞增殖和分化活性的确切影响,从而为治疗雄性动物不育以及人类的生殖疾病提供研究依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
精原干细胞介导论文参考文献
[1].乐威,岂利昕,章劲夫,吴登龙.低剂量电离辐射诱发的小鼠精原干细胞53BP1介导的DNA双链损伤应答[C].第十二次全国中西医结合男科学术大会暨全国中西医结合男科诊疗技术研修班暨2017上海市中西医结合学会上海市中医药学会泌尿男科专业委员会学术年会讲义论文资料汇编.2017
[2].李金梅.雄激素通过间接调控PLZF介导的精原干细胞分化机制研究[D].南京农业大学.2016
[3].辛颖,张涛,张优优,张智英.慢病毒活体介导精原干细胞生产转基因小鼠[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2014
[4].邱峰龙,李碧春.精原干细胞介导法制备转基因羊的研究进展[J].中国畜牧兽医.2012
[5].孙敏,施青青,阴彦辉,傅德智,秦玉蓉.体内精原干细胞介导法制备抗病转基因鸡[J].中国畜牧杂志.2011
[6].李碧春,孙国波,孙怀昌,徐琪,高波.体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡[J].中国科学(C辑:生命科学).2008
[7].丁晓麟.小鼠精原干细胞分离、纯化、冷冻、培养、移植及其体内介导转基因的研究[D].南京农业大学.2008
[8].李新.转基因家禽:走进精原干细胞介导新时代——转基因家禽研究专家李碧春教授专访[J].中国家禽.2007
[9].李丹,胡火珍,李小玉,钟立武,胡以平.显微注射法和精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的方法学比较[J].四川大学学报(医学版).2003
[10].钟立武,李丹,胡火珍,李小玉,邓候富.用精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究[J].四川大学学报(自然科学版).2002
论文知识图
