microRNA-23a对氟暴露大鼠成骨肉瘤细胞成骨活性的影响及靶基因验证

论文摘要

目的探讨miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤（UMR-106）细胞成骨活性的影响并验证其靶基因。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂（mimics）和抑制剂（inhibitor）,再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-23a、Ⅰ型胶原（COL1）、骨桥蛋白（OPN）、Runt相关转录因子2（Runx2）mRNA的表达水平;培养96 h后利用免疫蛋白印记法（Western blot）检测COL1、OPN、Runx2蛋白的表达水平;体外培养人胚胎肾细胞（293T）,利用双荧光素酶报告基因法验证miR-23a可能的靶基因。结果与空白对照组相比,NaF组UMR-106细胞miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;与激动剂对照组比较,过表达组miR-23a mRNA表达水平明显上升、COL1 mRNA表达明显降低（P<0.05）,Runx2、OPN mRNA表达变化不显著（P>0.05）;与抑制剂对照组相比,抑制组miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达明显降低（P<0.05）。与激动剂对照组比较,过表达组Runx2、OPN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,COL1蛋白表达水平变化不显著（P>0.05）;与抑制剂对照组相比,抑制组COL1、OPN、Runx2蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与过表达组比较,过表达+NaF组OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,COL1、Runx2变化不显著;与抑制组比较,抑制+NaF组COL1、OPN、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。过表达miR-23a后的293T细胞中双特异性磷酸酶5（DUSP5 mRNA）和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,抑制mi R-23a后DUSP5表达水平均明显升高（P<0.05）;双荧光素酶报告确定DUSP5为miR-23a的靶基因。结论miR-23a能促进染氟UMR-106细胞中成骨活性基因的表达;DUSP5是miR-23a的靶基因。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要仪器与试剂
•   1.2 细胞瞬时转染、分组及染毒
•   1.3 总RNA的提取
•   1.4 细胞miR-23a、COL1、OPN、Runx2、DUSP5表达的实时荧光定量PCR检测
•   1.5 细胞COL1、OPN、Runx2、DUSP5、GAPDH蛋白的Western blot检测法
•   1.6 双荧光素酶报告
•   1.7 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 染氟UMR-106细胞中miR-23a、COL1、OPN、Runx2的表达水平
•   2.2 转染miR-23a后UMR-106细胞中miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA的表达
•   2.3 转染miR-23a后UMR-106细胞中COL1、OPN、Runx2蛋白的表达
•   2.4 转染miR-23a联合NaF作用下UMR-106细胞中COL1、OPN、Runx2 mRNA的表达
•   2.5 转染miR-23a联合NaF作用下UMR-106细胞中COL1、OPN、Runx2蛋白的表达
•   2.6 miR-23a靶基因的验证
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨璐珲,陈宣好,卢明丽,王楠兰,韦艳

关键词: 氟化物,大鼠成骨肉瘤细胞,成骨活性,双特异性磷酸酶

来源: 环境与健康杂志 2019年09期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 外科学,肿瘤学

单位: 贵州医科大学公共卫生学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州医科大学公共卫生学院营养与食品安全教研室

基金: 国家自然科学基金(81560515)

分类号: R738.1

DOI: 10.16241/j.cnki.1001-5914.2019.09.001

页码: 753-758

总页数: 6

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