导读:本文包含了永生化神经干细胞系论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,神经,酪氨酸,基因治疗,体细胞,端粒,细胞系。
永生化神经干细胞系论文文献综述
解俊领,张玥,黄小杰,臧奕[1]（2012）在《大鼠胚胎神经干细胞与永生化神经干细胞系C17.2定向分化为神经元潜能的差异》一文中研究指出目的对比大鼠早期胚胎神经干细胞(NSCs)与永生化神经干细胞系C17.2(C17.2-NSC)定向分化为神经元潜能的差异,确立适用于诱导NSCs定向分化为神经元高内涵药物筛选的NSCs筛选模型。方法C17.2-NSC、17d胚胎海马NSCs(E17-NSC)及11d胚胎大脑皮层NSCs(E11-NSC)均设定对照组和实验组,对照组与实验组的细胞在含有2%(v/v)B27的DMEM/F12培养液中,分别经0μmol/L和1μmol/L维甲酸(RA)在37℃、5%CO2常规培养条件下诱导分化5d,通过免疫组织化学技术检测对照组与实验组中NSCs或前体细胞特异性标志蛋白巢蛋白(Nestin)及神经元特异性标志蛋白βⅢ微管蛋白(Tuj1)表达量的差异。结果与对照组相比,C17.2-NSC经1μmol/L RA诱导后未定向分化为神经元,而E17-NSC及E11-NSC经1μmol/L RA诱导后可有效定向分化为神经元。结论相对于C17.2-NSC,大鼠早期胚胎NSCs定向分化为神经元的潜能更强,适用于诱导NSCs定向分化为神经元的高内涵药物筛选。(本文来源于《解剖学报》期刊2012年05期）
张耀芬,李振洲,郑静晨,张昕,刘燕[2]（2011）在《TH基因修饰的永生化神经干细胞移植对帕金森病大鼠行为和多巴胺代谢的影响》一文中研究指出目的评价脑内移植酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)基因修饰的温度敏感型永生化神经干细胞(im-mortalized neural stem cells,iNSCs)的生物学稳定性和安全性,探讨TH基因表达对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠旋转行为和多巴胺代谢的影响。方法 6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD模型大鼠73只,随机分为3组。治疗组(36只,TG)脑内纹状体移植体外转染稳定表达TH基因的iNSCs株(RMN-TH),对照组(27只,CG)同部位植入未转染TH基因的RMN细胞株,余10只为模型组(MG)。分别比较细胞移植后不同时间点实验大鼠肿瘤发生、排斥反应和阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、免疫组织化学染色观察TH表达;高效液相色谱电化学方法检测多巴胺(dopamine,DA)及其代谢产物3、4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)水平。结果移植细胞在受体大鼠纹状体内存活均超过6个月,并广泛迁移、稳定表达TH,而未诱发肿瘤和排斥反应。RMN-TH TG组的APO诱导旋转行为得到明显改善,移植后第8周与CG组、MG组比较,旋转圈数分别下降64.17%和61.54%(P<0.01);TG组大鼠移植侧纹状体内TH表达显着高于健侧(P=0.0029)、CG组移植侧和MG组(P=0.0031)。TG组纹状体DA及其代谢产物水平明显高于CG组和MG组(P=0.0027)。与MG组比较,CG组大鼠旋转行为、TH表达,以及DA,DOPAC和HVA水平均无统计学差异。结论 TH基因修饰的iNSCs细胞株RMN-TH可以在PD大鼠纹状体内长时间安全存活并稳定表达TH,显着增加内源性DA及其代谢产物水平,有效改善模型大鼠PD症状。(本文来源于《武警医学》期刊2011年01期）
丁为民,田嘉禾,杨晓华,白金柱,沈丽[3]（2007）在《永生化神经前体细胞系hNPC-TERT体内外D_2受体的表达》一文中研究指出目的验证神经前体细胞系hNPC-TERT移植入动物中枢神经系统前后多巴胺D2受体的表达。方法免疫荧光定性鉴定体外培养hNPC-TERT的D2受体表达,并进一步应用放射受体分析方法测定hNPC-TERT细胞表达D2受体数量。实验组兔脊髓内移植3×106hNPC-TERT,对照组动物脊髓内移植同等数量HeLa细胞,移植后第7天,以11C-raclopride为示踪剂,移植动物活体或处死动物剥离出脊髓进行D2受体PET显像,并行移植段脊髓切片免疫荧光染色,验证hNPC-TERT在体内的D2受体表达。结果免疫荧光和放射受体分析显示体外培养hNPC-TERT细胞表面表达大量D2受体(Bmax=8×104)。移植入兔脊髓后,D2受体显像显示移植部位有明显的放射性浓聚,经ROI半定量分析,与对照组差异显着(P=0.0017),离体脊髓PET显像、组织免疫荧光进一步证实了活体显像结果。结论神经前体细胞系hNPC-TERT高表达多巴胺D2受体,并且在移植入体内后仍保持该特性,具有移植治疗帕金森综合征等D2受体缺乏性疾病的潜力。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2007年06期）
李勇[4]（2007）在《端粒酶基因与大鼠胎儿神经干细胞永生化的研究》一文中研究指出中枢神经系统的一些疾病(如帕金森氏病、Huntington病、脱髓鞘病和脑、脊髓损伤等)是因为神经细胞某一群体受损所致,它们严重的危害着人类健康,影响着人们的生活质量。传统的药物治疗只能缓解却不能根治这些疾病,并且神经系统对药物敏感,容易受到副作用的影响。近年来,随着细胞移植技术的发展和成熟,神经干细胞的移植已成为治疗这些疾病的有效途径。神经干细胞是神经系统中特定的原始神经细胞,广泛的存在于哺乳动物中枢神经系统中的多个部位,它能通过分裂、增殖、分化能产生出所有神经组织细胞类型,在体内终生自我维持和更新。由于NSCs的自我更新能力、多分化潜能、低免疫源性和良好的迁移及组织融合性等特性,使之成为理想的基因或药物治疗载体和细胞移植供体。但是,神经干细胞在体外长期培养过程中出现复制衰老,并且神经干细胞增殖速度慢,传代周期长,使得它们的数量不能达到科研和临床的要求,阻碍了神经干细胞临床应用进程。而永生化神经干/祖细胞系在转基因治疗和中枢神经系统移植的研究中显示出诸多优点如在体外可以自我更新,大量扩增;通过基因操作使细胞稳定表达报告基因,进行体内示踪,或治疗基因;通过外源基因永生化的神经干细胞,在体内仍然能像正常神经干细胞一样具有多向分化潜能。本研究构建重组质粒pEGFP-N1-hTERT并将其导入到大鼠胎儿神经干细胞中,对其荧光显微镜观察、CD133阳性细胞的流式细胞仪分析、培养特性测定、致瘤性试验、冻存等方面进行了较为系统的研究,主要得出以下结论:1.大鼠胎儿神经干细胞培养体系的建立通过对NSCs在无血清培养液SFCMⅠ和SFCMⅡ中生长情况,不同酶溶液消化传代对神经球形成的影响以及悬浮与贴壁培养方法对神经球增殖的差异进行分析,结果表明:(1)在试验中发现,无血清培养液SFCMⅠ是一种成熟的体外培养大鼠胎儿神经干细胞培养液,支持了神经干细胞在体外培养中的增殖和神经球的形成,能够达到神经干细胞增殖的需要。(2)试验表明,在神经干细胞所形成的神经球传代时,AccutaseTM是一种较为理想的酶溶液,消化的后细胞的存活率在92.6%左右,在神经球消化时最好辅以轻轻吹打,保持神经球在悬浮状态下消化,这样不但减少了酶对细胞的作用时间,而且有效的防止了细胞间发生粘联,提高了活细胞比率和数量,在培养中也增加了形成神经球的数量。(3)在细胞培养中发现,与明胶、鼠尾胶原和多聚赖氨酸包被处理的贴壁法培养细胞相比,1.5%的琼脂糖抗贴壁悬浮培养法更为适合神经干细胞的体外扩增。2.大鼠胎儿神经干细胞冷冻保存和体外诱导分化试验通过不同冷冻保护液对细胞冻存后的成活率和克隆形成率,以及3中细胞因子NGF、BDNF和GDNF对NSCs的诱导分化作用分析,认为:(1)可以根据实际情况使用D-MEM/F12+10%DMSO添加20%的FBS或NBS进行神经干细胞的低温冻存,超低温冻存对神经干细胞的多潜能性没有影响。(2)实验结果表明,含有100 ng/mL的NGF、BDNF和GDNF培养液在体外培养时,对神经干细胞有一定的诱导作用。添加NGF和BDNF的诱导培养液中主要分化为神经元,而添加GDNF的诱导培养液中主要分行为少突胶质细胞。3.pEGFP-N1-hTERT真核表达载体的构建与鉴定通过双酶切鉴定、DNA测序分析证实人端粒酶逆转录酶基因片段的准确性,以及通过绿色荧光蛋白间接观察到人端粒酶逆转录酶在细胞中的表达定位,已验证所构建的真核表达质粒pEGFP- N1-hTERT的正确性。重组质粒可在转染的神经细胞中表达人端粒酶逆转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白,通过观察绿色荧光蛋白的表达对转染效率和结果进行及时、快捷的观察。人端粒酶逆转录酶真核表达载体的构建成功为进一步建立永生化神经干细胞奠定了基础。4.大鼠胎儿神经干细胞的永生化与检测通过对转染重组质粒的NSCs的GFP表达观察,多潜能性鉴定,RT-PCR和Western-blot分析,神经球中CD133+细胞增殖和细胞周期分布的流式细胞仪分析表明:(1)未转染的大鼠胎儿NSCs在体外培养中最高传7代,冻存了4.0×107 cells,而转染了重组质粒以后,细胞传代数上升,最高传12代,冻存3.35×107 cells(2)在本试验中,转染了重组质粒pEGFP-N1-hTERT的大鼠胎儿NSCs仍具有干细胞的生长特性和多潜能性,即在体外传代培养中可形成神经球并增殖,经血清诱导液诱导分化为神经元、少突胶质细胞和星型胶质细胞。裸鼠致瘤性试验证明了该细胞系无致瘤性。(3)通过RT-PCR试验证明了转染重组质粒的大鼠胎儿NSCs中,存在hTERT基因mRNA的转录产物;荧光显微镜检查结合Western-blot试验证实了融合蛋白hTERT-GFP的表达。(4)通过流式细胞仪分析未转染和转染重组质粒大鼠胎儿NSCs神经球中CD133+细胞增殖情况和不同时间细胞周期的变化,进一步证实了该重组质粒对神经干细胞端粒酶活性有上调作用,可促进细胞的体外长期增殖。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2007-05-01）
刘学强,杨辉,何家全,王斌,宋业纯[5]（2006）在《hTERT基因转染人神经干细胞向永生化细胞转变实验研究》一文中研究指出目的明确外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)在人神经干细胞永生化过程中的作用。方法利用构建了hTERT基因的逆转录病毒载体PLXSN转染人NSCs,G418筛选后,扩大增殖,稳定后观察其生物学特性,检测端粒酶活性,通过核型分析、裸鼠移植致瘤性观察来了解转染细胞特性。结果hTERT基因转入培养的NSC后,端粒酶活性增强,细胞增殖加速,传代时间缩短,传代50代仍稳定增殖,核型分析正常,无致瘤性。结论hTERT基因转染NSCs,能获得永生化细胞,其表型能得以正常维持,可以作为进一步研究的种子细胞。(本文来源于《中华神经外科疾病研究杂志》期刊2006年01期）
张海燕,段德义,赵春礼,兰兰,赵咏梅[6]（2005）在《温度敏感型基因永生化神经前体细胞系的建立》一文中研究指出目的建立温度敏感型永生化神经前体细胞系,鉴定其细胞生长特点及表达抗原的特性。方法利用逆转录病毒感染原代培养的胚胎13d SD大鼠中脑神经前体细胞,建立温度敏感型永生化神经前体细胞系RMN,利用免疫细胞化学、Western blot和流式细胞分析方法测定RMN细胞的特征。结果在33℃条件下,RMN细胞呈多边形,有较短突起;细胞增殖迅速,群体倍增时间为48 h,可连续传代和冷冻保存;细胞表达SV40大T抗原,nestin蛋白和Nurr1蛋白;RMN细胞中未发现染色体倍体的异常,裸鼠接种20周后未观察到肿瘤的形成。在39℃条件下,RMN细胞增殖速度减缓,细胞形成较长突起。在含1%胎牛血清的培养基中培养1周后,RMN细胞可表达-βIII-tubulin,GFAP和Gal C等抗原,但SV40抗原表达减弱。结论RMN细胞系是SV40/tsA58基因永生化的大鼠神经前体细胞系,是具有温度敏感性及多分化潜能的前体细胞系。(本文来源于《解剖学报》期刊2005年05期）
张耀芬,徐群渊[7]（2005）在《转TH基因温控型永生化神经干细胞纹状体内移植治疗帕金森病模型大鼠的研究》一文中研究指出目的:观察酪氨酸羟化酶(TH)基因修饰的温度敏感型永生化大鼠神经干细胞(RMN)于纹状体移植后对帕金森病(PD)模型大鼠的治疗作用。方法:体外培养鉴定RMN细胞,并用携带TH基因的逆转录病毒转导、抗性培养获得稳定表达TH的RMN-TH细胞,将其分别植入6-羟基多巴肢(6-OHDA)制备的PD大鼠模型纹状体。移植后动态观察阿朴吗啡(APO)诱导的大鼠旋转行为变化;第2周、4周、8周、16周、24周进行脑组织TH免疫组化染色;高效液相色谱电化学的方法检测纹状体内多巴胺(DA)及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA) 的含量。结果:移植细胞能在脑内存活至少达六个月:没有肿瘤形成;其在纹状体内迁移广泛。(本文来源于《中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编》期刊2005-10-01）
王颖,段德义,姬曼,赵春礼,张海燕[8]（2005）在《温控型永生化神经干细胞移植于大鼠纹状体后存活、迁移与分化的研究》一文中研究指出目的: 探讨SV40温度敏感型大T抗原永生化的神经干细胞移植于大鼠纹状体后的存活、迁移和分化情况,并观察GDNF转导对神经干细胞移植后特性的影响。方法:首先对细胞的分化情况进行鉴定,然后用携带绿色荧光蛋白(EGFP)或GDNF的重组逆转录病毒分别感染永生化神经干细胞,获得稳定表达绿色荧光蛋白(即体外标记)或GDNF的细胞克隆后,再移植到成年SD大鼠纹状体内。移植术后第2周、4周和12周灌杀大鼠,测定神经干细胞的存活、迁移及分化情况。结果:移植前细胞表达SV40大T抗原、Nestin和Nurrl,但不表达分化标记物如β-tubulin-Ⅲ、(本文来源于《中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编》期刊2005-10-01）
刘学强[9]（2005）在《转染hTERT基因建立人永生化神经干细胞系的实验研究》一文中研究指出神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)是指神经系统内具有多潜能、自我复制、自我更新、自我维持并能分化成神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞等特点的细胞。自1992年Reynolds和Weiss在成年小鼠纹状体分离出神经干细胞以来,现已从胚胎期神经系统中的多个部位,包括大脑皮层、海马、纹状体、嗅球、脑室沿线包括侧脑室、第叁脑室和第四脑室、间脑、中脑、小脑、脊髓、视网膜中分离得到NSCs或比NSCs具有更明确发展方向的神经祖细胞。在成体内也存在两个NSCs聚集区:侧脑室壁的脑室下层(subventricular zone,SVZ)和海马齿状回的颗粒下层(subgranular zone,SGZ)。 目前神经干细胞的体外分离、培养和扩增技术已较成熟,并且在诱导因子的作用下神经干细胞在体外可分化为几种终末的神经细胞。 研究表明,神经干细胞在体外培养需要有促有丝分裂原的参与,如表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)或/和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)。鼠来源的神经干细胞在以上条件下分裂增殖速度较快,约1d分裂1次,而人来源于的神经干细胞分裂一次则需7～14d。在体外经过有限次的传代后,随着端粒长度的缩短,细胞就会停止分裂增殖,发生衰老和死亡,这就限制了其应用。 基因工程化的人神经干细胞,由于其克隆性、稳定性及快速增殖能力,可能更适合于细胞及分子生物学的研究。有学者提出了永生化神经干细胞的概念,永生化是指通过基因操作使细胞总是处于连续的细胞周期内,从而阻止了其进一步分化。通常采用通过不同载体将编码癌基因蛋白的基因转导入胚胎神经干细胞中的方法来获得永生化神经干细胞,目前以myc及SV40大T抗原应用最为广泛。国外已有人采取不同的方法建立了人永生化神经干细胞系,如取自胚13周人海马组织而建立的C10、JA3细胞系;胚15周人端脑的H6细胞系;胚10.5周人端脑的HNSC.100细胞系等,以上细胞系均用v-myc基因转染神经干细胞而来。永生化神经干细胞除具有神经干细胞的一般特点外,尚有以下优点:(1)它们在体外可以自我更新,并能大量增殖;(2)能通过基因操作使细胞稳定地表达报告基因及治疗基因;(3)可以分离出单个细胞克隆;(4)通过加入了外源基因而获得的永生化神经干细胞,在体内仍然能像神经干细胞一样具(本文来源于《第叁军医大学》期刊2005-05-01）
徐群渊[10]（2004）在《神经干细胞的分离、纯化和永生化》一文中研究指出神经干细胞的发现是上世纪最后若干年来生命科学领域中具有划时代意义的重大进展。这些细胞藏匿于神经系统某些部位,保留相对原始的状态,即具有多向分化的潜能以及自我更新的能力。神经干细胞具有良好的可塑性,可以通过基因工程或细胞工程等当代高新技术将之进行人工改造,使其发育成为能够对神经损伤特别是中枢神经损伤进行替代治疗的工具。中枢神经系统疾病(如常见的脑出血、脑梗(本文来源于《中国组织工程、干细胞与神经再生学术会议论文集》期刊2004-11-01）
永生化神经干细胞系论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的评价脑内移植酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)基因修饰的温度敏感型永生化神经干细胞(im-mortalized neural stem cells,iNSCs)的生物学稳定性和安全性,探讨TH基因表达对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠旋转行为和多巴胺代谢的影响。方法 6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD模型大鼠73只,随机分为3组。治疗组(36只,TG)脑内纹状体移植体外转染稳定表达TH基因的iNSCs株(RMN-TH),对照组(27只,CG)同部位植入未转染TH基因的RMN细胞株,余10只为模型组(MG)。分别比较细胞移植后不同时间点实验大鼠肿瘤发生、排斥反应和阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、免疫组织化学染色观察TH表达;高效液相色谱电化学方法检测多巴胺(dopamine,DA)及其代谢产物3、4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)水平。结果移植细胞在受体大鼠纹状体内存活均超过6个月,并广泛迁移、稳定表达TH,而未诱发肿瘤和排斥反应。RMN-TH TG组的APO诱导旋转行为得到明显改善,移植后第8周与CG组、MG组比较,旋转圈数分别下降64.17%和61.54%(P<0.01);TG组大鼠移植侧纹状体内TH表达显着高于健侧(P=0.0029)、CG组移植侧和MG组(P=0.0031)。TG组纹状体DA及其代谢产物水平明显高于CG组和MG组(P=0.0027)。与MG组比较,CG组大鼠旋转行为、TH表达,以及DA,DOPAC和HVA水平均无统计学差异。结论 TH基因修饰的iNSCs细胞株RMN-TH可以在PD大鼠纹状体内长时间安全存活并稳定表达TH,显着增加内源性DA及其代谢产物水平,有效改善模型大鼠PD症状。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
永生化神经干细胞系论文参考文献
[1].解俊领,张玥,黄小杰,臧奕.大鼠胚胎神经干细胞与永生化神经干细胞系C17.2定向分化为神经元潜能的差异[J].解剖学报.2012
[2].张耀芬,李振洲,郑静晨,张昕,刘燕.TH基因修饰的永生化神经干细胞移植对帕金森病大鼠行为和多巴胺代谢的影响[J].武警医学.2011
[3].丁为民,田嘉禾,杨晓华,白金柱,沈丽.永生化神经前体细胞系hNPC-TERT体内外D_2受体的表达[J].南方医科大学学报.2007
[4].李勇.端粒酶基因与大鼠胎儿神经干细胞永生化的研究[D].西北农林科技大学.2007
[5].刘学强,杨辉,何家全,王斌,宋业纯.hTERT基因转染人神经干细胞向永生化细胞转变实验研究[J].中华神经外科疾病研究杂志.2006
[6].张海燕,段德义,赵春礼,兰兰,赵咏梅.温度敏感型基因永生化神经前体细胞系的建立[J].解剖学报.2005
[7].张耀芬,徐群渊.转TH基因温控型永生化神经干细胞纹状体内移植治疗帕金森病模型大鼠的研究[C].中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编.2005
[8].王颖,段德义,姬曼,赵春礼,张海燕.温控型永生化神经干细胞移植于大鼠纹状体后存活、迁移与分化的研究[C].中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编.2005
[9].刘学强.转染hTERT基因建立人永生化神经干细胞系的实验研究[D].第叁军医大学.2005
[10].徐群渊.神经干细胞的分离、纯化和永生化[C].中国组织工程、干细胞与神经再生学术会议论文集.2004
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