水稻硝态氮响应的酵母双杂交文库的构建与分析

论文摘要

酵母双杂交是在真核生物酵母细胞体内研究蛋白质之间相互作用的一种高效分子生物学技术。为了研究水稻氮吸收与利用的分子调控机理,以硝态氮（5 mmol/L KNO3）诱导处理的水稻9311幼苗为材料,构建水稻在高氮响应条件下的酵母双杂交c DNA文库。实验结果表明,构建的氮响应文库滴度为1. 7×108cfu/m L,文库的重组率为95%,插入片段大小在500～1500 bp之间。从文库中随机挑选10个单克隆,测序后通过NCBI比对分析结果显示9个克隆可以从水稻基因库中找到对应序列。文库的构建将为水稻氮素吸收与利用的分子调控机理研究提供帮助。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 植物材料
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 水稻幼苗的培养与处理
•     1.2.2 水稻总RNA的提取与检测
•     1.2.3 RNA反转录c DNA与检测
•     1.2.4 Y187酵母感受态制作
•     1.2.5 构建c DNA文库
•     1.2.6 c DNA文库转化率及文库大小的测定
•     1.2.7 c DNA文库平均插入片段大小及重组率的计算
•     1.2.8 c DNA文库平均插入片段的分析
• 2 结果与分析
•   2.1 总RNA的提取
•   2.2 c DNA的合成与文库的构建
•   2.3 c DNA文库的转化效率及插入片段大小检测
•   2.4 c DNA文库插入片段分析
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 洪广成,陈倩,刘石锋,张汉马,秦小健

关键词: 水稻,氮吸收与利用,酵母双杂交,文库构建

来源: 生物学杂志 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农作物

单位: 重庆师范大学生命科学学院植物环境适应分子生物学市重点实验室

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0100706),重庆师范大学人才启动基金(16XLB018),重庆市教委科学技术研究项目(KJ1600310)

分类号: S511;Q943.2

页码: 18-21

总页数: 4

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