基于foldon介导的寡聚化以提高阿魏酸酯酶催化效率

论文摘要

将foldon结构域与阿魏酸酯酶C-末端进行融合表达并用组氨酸标签对融合蛋白进行纯化。实现基于foldon的寡聚化阿魏酸酯酶及单体阿魏酸酯酶在毕赤酵母GS115中表达,并应用目标蛋白与foldon结构域融合可自发形成三聚体结构的特性对阿魏酸酯酶进行改造,以提高阿魏酸酯酶的催化性能。经纯化获得寡聚化及单体阿魏酸酯酶,寡聚化阿魏酸酯酶表观分子量约为110kDa,单体阿魏酸酯酶表观分子量为40 kDa;寡聚化阿魏酸酯酶的最适反应温度和pH分别为50℃和5.0,而单体阿魏酸酯酶则分别为50℃和6.0。寡聚化阿魏酸酯酶的底物亲和力（Km）及催化效率(kcat/Km)较单体阿魏酸酯酶分别提高3.42倍和7.57倍。结果表明,寡聚化及单体阿魏酸酯酶均成功表达,且寡聚化阿魏酸酯酶在底物亲和力和催化效率上具有明显优势,该提高阿魏酸酯酶催化效率的方法简单、高效,有很好的应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 主要试剂和培养基
•     1.1.3 主要器材
•   1.2 表达载体的构建
•   1.3 重组FAE在毕赤酵母中的表达和纯化
•   1.4 重组FAE酶活力测定
•   1.5 重组FAE酶学性质的研究
•     1.5.1 最适反应温度的测定
•     1.5.2 温度稳定性的测定
•     1.5.3 最适反应pH值的测定
•     1.5.4 pH值稳定性的测定
•     1.5.5 金属离子对重组FAE酶活力的影响
•     1.5.6 动力学常数的测定
•   1.6 重组FAE蛋白粒径的测定
•   1.7 重组FAE透射电子显微镜分析
• 2 结果与分析
•   2.1 重组FAE转化子的PCR鉴定与筛选
•   2.2 重组FAE的表达和纯化
•   2.3 FAE寡聚化过程的研究
•   2.4 重组FAE的酶学性质
•     2.4.1 最适温度及温度稳定性的测定
•     2.4.2 最适pH及pH稳定性的测定
•     2.4.3 金属离子对重组FAE的影响
•     2.4.4 动力学常数的测定
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张雷,雷林超,张光亚,李夏兰

关键词: 阿魏酸酯酶,寡聚化,催化性能,酶工程

来源: 生物工程学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 华侨大学化工学院

基金: 福建省自然科学基金(No.2017J01065)资助~~

分类号: Q55

DOI: 10.13345/j.cjb.180458

页码: 816-826

总页数: 11

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