羊种布鲁菌Rev.1菌株eryA基因的克隆表达及单抗制备

论文摘要

布鲁菌病是全球重大的人兽共患病,近年来我国布鲁菌病呈上升趋势,给我国经济造成了巨大损失。本研究通过分析羊种布鲁菌Rev.I株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性,对eryA基因进行生物信息学分析及原核表达和单克隆抗体的制备。结果表明,本试验成功克隆并表达了 eryA基因;经Western-Blot检测,表达蛋白可与标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;生物信息学分析显示,该蛋白没有跨膜区结构,无信号肽,二级结构中α-螺旋比重最大;抗原表位分析显示,该蛋白含有较多的抗原决定簇。用纯化的蛋白免疫小鼠后采取小鼠脾细胞进行融合后筛选出分泌IgG抗体的杂交瘤细胞,经扩大培养后对小鼠进行腹腔注射,收集腹水并纯化,纯化后的抗体经BCA方法测定及SDS-PAGE检测发现得到高纯度的抗体。通过对eryA基因的研究,为布病检测方法的建立奠定基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
•   1.0 布鲁菌病
•   1.1 布鲁菌病的流行现状
•     1.1.1 布鲁菌病世界范围的流行情况
•     1.1.2 布鲁菌病在我国的流行情况
•   1.2 病原学
•   1.3 布鲁菌病的临床症状
•   1.4 布鲁菌的致病机制
•   1.5 布鲁菌疫苗的现状
•   1.6 布鲁菌病的诊断及防控
•     1.6.1 布鲁菌的诊断方法
•     1.6.2 布鲁菌病的防控
•   1.7 布鲁菌相关基因的研究进展
•     1.7.1 布鲁菌毒力基因的研究进展
•     1.7.2 赤藓糖醇基因（ery）的研究进展
•   1.8 单克隆抗体的介绍
•   1.9 研究的目的及意义
• 2 材料与方法
•   2.1 材料
•     2.1.1 菌株与试剂
•     2.1.2 主要仪器设备
•     2.1.3 溶液配制
•   2.2 方法
•     2.2.1 eryA蛋白的生物信息学分析
•     2.2.2 eryA基因的克隆、表达及蛋白纯化
•     2.2.3 杂交瘤细胞的制备及筛选
•     2.2.4 单克隆抗体的制备及纯化
• 3 结果
•   3.1 目的蛋白生物信息学分析
•   3.2 eryA基因的克隆、表达及纯化
•     3.2.1 目的片段扩增及原核质粒构建
•     3.2.2 重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测
•     3.2.3 Western-Blot检测
•     3.2.4 蛋白质纯化
•   3.3 杂交瘤细胞的筛选与培养
•     3.3.1 免疫后效价的测定
•     3.3.2 融合后IgG类型阳性杂交瘤细胞株的筛选
•   3.4 eryA抗体的纯化
•     3.4.1 SDS-PAGE检测结果
•     3.4.2 用BCA法测定蛋白含量
• 4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 宋前进

导师: 关平原,温永俊

关键词: 布鲁菌病,基因,原核表达,免疫原性,杂交瘤细胞

来源: 内蒙古农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古农业大学

基金: 内蒙古自治区科技计划项目“布鲁氏菌病免疫方法及新型可鉴别疫苗的开发”(No:201702156)

分类号: S852.61

DOI: 10.27229/d.cnki.gnmnu.2019.000503

总页数: 47

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