果蝇蛋白质激酶Pitslre通过调控抗菌肽表达参与天然免疫反应

论文摘要

为鉴定新的参与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)天然免疫信号通路调控的分子及作用机制,应用果蝇的Gal4/UAS系统敲低54个蛋白质激酶编码基因,分别利用革兰氏阳性菌(Enterococcus faecalis, E.faecalis)或革兰氏阴性菌(Erwinia carototovovora carototovovora15, Ecc15)感染基因敲低果蝇,筛选参与果蝇天然免疫反应的蛋白质激酶。结果显示,全身性敲低蛋白质激酶Pitslre的果蝇感染E.faecalis或Ecc15后,生存率降低,半致死时间LT50分别降低为对照组的667%和286%。相应的,Pitslre功能缺失导致革兰氏阳性菌和阴性菌分别感染后,Toll及IMD通路下游抗菌肽Drosomycin和Diptercin表达水平明显下降。在脂肪体和血淋巴细胞中特异性敲低Pitslre基因,导致革兰氏阳性菌及阴性菌感染后的果蝇半致死时间LT50分别缩短75%和90%,细菌载量分别升高约10倍。在果蝇S2细胞中,敲低Pitslre基因,导致细胞的抗菌肽Drosomycin、Attacin和Diptercin表达水平分别降低约50%。此外,通过免疫共沉淀实验检测Pitslre与预测存在相互作用的蛋白质TSC1、Rcd5和pbl之间的相互作用。综上所述,蛋白质激酶Pitslre参与果蝇天然免疫反应,在正向调控果蝇天然免疫Toll和IMD通路中发挥重要作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 果蝇饲养及遗传学
•   1.2 菌种及菌种培养
•   1.3 细胞及细胞培养
•   1.4 质粒构建及细胞转染
•   1.5 果蝇系统性感染及生存率统计
•   1.6 细菌载菌量测定
•   1.7 荧光定量PCR检测抗菌肽的表达水平
•   1.8 果蝇S2细胞中敲低Pitslre
•   1.9 免疫共沉淀与免疫印迹
•   1.1 0 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 筛选参与果蝇天然免疫反应的蛋白质激酶
•   2.2 组织特异性敲低Pitslre的果蝇对细菌感染敏感
•   2.3 Pitslre敲低的果蝇感染后细菌载菌量升高
•   2.4 Pitslre敲低果蝇感染后抗菌肽的表达水平降低
•   2.5 在果蝇S2细胞中敲低Pitslre抑制Toll和IMD通路
•   2.6 筛选与Pitslre蛋白相互作用的蛋白质
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘燕,谢欣雨,陈赖强,苏方,王欢,焦仁杰,刘继勇

关键词: 黑腹果蝇,蛋白质激酶,天然免疫,细菌感染,抗菌肽

来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 广州医科大学基础医学院广州霍夫曼免疫研究所,广州医科大学附属第二医院广东省过敏反应与免疫重点实验室

基金: 广东省“珠江人才计划”本土创新科研团队项目(No.2017BT01S155),高等学校学科创新引智计划(“111计划”)(No.D18010),广东省普通高校特色创新项目(No.2018KTSCX182),广东省医学科研基金(No.A2019292)资助~~

分类号: Q352

DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.11.1238

页码: 1375-1383

总页数: 9

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