论文摘要
新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是严重危害禽养殖业的重要病原微生物。本团队前期研究发现,在NDV感染鸡的气管和腺胃中,干扰素和鸡干扰素诱导的跨膜蛋白1（Chicken interferon induced transmembrane protein 1,chIFITM1）显著上调表达。但是chIFITM1能否抑制NDV的复制及其影响因素,目前仍不清楚。本研究构建了chIFITM1的真核表达质粒pCAGGS-HA-chIFITM1,转染LMH和HD11细胞后检测发现chIFITM1蛋白均表达。然而,在LMH细胞中表达的chIFITM1并不能抑制NDV的复制,但在HD11细胞中表达的chIFITM1却能显著抑制NDV的复制。chIFITM1是干扰素诱导的跨膜蛋白（Interferon induced transmembrane protein,IFITM）家族中的一员,目前研究表明IFITM的抗病毒作用主要与病毒的入侵途径及IFITM的亚细胞定位有关,因此我们推测chIFITM1在LMH和HD11细胞中抗病毒作用的不同可能与这两种因素有关。NDV可以通过直接的膜融合途径和内吞途径入侵细胞,膜融合途径是NDV入侵细胞的普遍途径,但NDV入侵不同细胞时采用的内吞途径可能存在差异。因此本研究通过检测NDV入侵LMH和HD11细胞的途径以及chIFITM1的亚细胞定位分析chIFITM1仅在HD11细胞中抑制NDV复制的可能机制。使用网格蛋白和小窝蛋白介导内吞途径的抑制剂Dynasore,网格蛋白介导内吞途径的抑制剂Chlorpromazine,小窝蛋白介导内吞途径的抑制剂PMA,巨胞饮内吞途径的抑制剂EIPA,吞噬内吞途径的抑制剂Wortmannin,处理细胞后检测其对NDV吸附、进入和复制的影响。结果显示,在LMH和HD11细胞中,以上5种试剂均不能抑制NDV的吸附,但Dynasore和PMA均能显著抑制NDV的进入和复制,而Chlorpromazine、EIPA和Wortmannin均不能抑制NDV的进入和复制。此外,本研究还发现,在病毒感染LMH和HD11细胞的早期阶段,NDV能够与早期内体marker EEA1共定位。使用细胞内体酸化的抑制剂Bafilomycin A1预处理LMH和HD11细胞后均能显著抑制NDV的复制。上述结果说明,在LMH和HD11细胞中,NDV均可通过小窝蛋白介导的内吞途径入侵细胞,但是NDV的内吞途径经过早期内体且依赖内体的酸化。上述试验表明,NDV入侵LMH和HD11细胞的途径相同,但chIFITM1仅在HD11细胞中能够抑制病毒的进入和复制,我们推测这可能与chIFITM1的亚细胞定位有关。通过激光共聚焦试验检测发现,在LMH细胞中chIFITM1主要定位在细胞膜表面;但在HD11细胞中chIFITM1主要定位在细胞膜表面和细胞内体中,并和EEA1有明显的共定位。本研究结果表明,chIFITM1在LMH和HD11细胞中的抗病毒作用不同是由于chIFITM1的亚细胞定位不同,即位于HD11细胞内体中的chIFITM1能够抑制通过内吞途径进入的NDV的复制,但存在于LMH细胞膜表面的chIFITM1对NDV的进入和复制没有显著影响。本研究揭示了chIFITM1抑制NDV进入细胞的作用及其可能的原因,为进一步探索chIFITM1抑制NDV感染的作用机制奠定了基础。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 范振
导师: 刘胜旺
关键词: 新城疫病毒,鸡干扰素诱导的跨膜蛋白,内吞途径,亚细胞定位
来源: 中国农业科学院
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 中国农业科学院
分类号: S852.65
总页数: 59
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标签：新城疫病毒论文; 鸡干扰素诱导的跨膜蛋白论文; 内吞途径论文; 亚细胞定位论文;