米曲霉AAP新基因的异源表达及其酶学性质研究

论文摘要

通过生物信息学分析发现了米曲霉（Aspergillus oryzae）中属于氨肽酶M18家族的新成员天冬酰胺氨肽酶（AAP）基因,经反转录克隆获得该基因,实现了其在毕赤酵母GS115中的表达,同时研究了重组AAP的酶学性质及其在大豆蛋白水解中的应用。结果表明,重组AAP的分子质量约54.0 kDa,在较广的pH范围内有活性（pH 6.0～9.5）,最适反应温度和pH分别为50℃和7.0,Zn2+和Ca2+对该酶起促进作用,EDTA能够显著抑制该酶的酶活。以Asp-pNA为底物时,Km为0.42 mmol/L,Vmax为21.57μmol/（mL·min）,该酶具有水解N末端为天冬氨酸和谷氨酸的底物特异性。重组AAP可显著降低大豆多肽的苦味,提高水解度,具有在食品中的应用潜力。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株及质粒
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 培养基
•     1.1.4 引物的设计
•   1.2 方法
•     1.2.1 米曲霉AAP的生物信息学分析
•     1.2.2 目的基因的克隆及重组表达载体的构建
•     1.2.3 重组毕赤酵母的构建及诱导表达
•     1.2.4 重组AAP的纯化
•     1.2.5 重组AAP酶活的测定
•     1.2.6 重组AAP的酶学性质研究
•       （1） 最适pH及pH稳定性:
•       （2） 最适温度及温度稳定性:
•       （3） 金属离子及抑制剂对重组AAP活性的影响:
•       （4） 底物特异性及动力学参数的测定:
•     1.2.7 重组AAP对大豆多肽的水解
• 2 结果与分析
•   2.1 米曲霉AAP基因的克隆及生物信息学分析
•   2.2 重组毕赤酵母的构建及诱导表达
•   2.3 重组AAP的纯化
•   2.4 重组AAP的酶学性质研究
•     2.4.1 最适pH、温度及稳定性
•     2.4.2 金属离子及抑制剂的影响
•     2.4.3 底物特异性及动力学分析
•   2.5 重组蛋白酶对大豆多肽的水解及脱苦效果
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 宋婷婷,吴珍珍,宗红,陆信曜,诸葛斌

关键词: 米曲霉,天冬酰胺氨肽酶,酶学性质

来源: 食品与发酵工业 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 糖化学与生物技术教育部重点实验室(江南大学),工业生物技术教育部重点实验室(江南大学),江南大学生物工程学院工业微生物研究中心

基金: 国家科技支撑计划(2015BAD16B00,2015BAD16B 01)

分类号: TS201.3

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018831

页码: 38-44

总页数: 7

文件大小: 4539K

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