Th005（H7N9）在雪貂、小鼠和鸡体内的致病力及其作用机制

论文摘要

背景2013年,我国出现了第1例人类感染H7N9亚型禽流感病例,至今已有5次流行,且2017年第5波疫情中感染人数超过了前4次感染人数的总和。世界动物卫生组织(OIE)报道称养殖场中鸡群出现大量死亡,并且在死亡鸡体内分离到H7N9亚型流感病毒。目的第5波H7N9疫情患病率激增,需要追踪这波流行中病原体的变化情况,尤其是从患者中分离到的病毒株分别在哺乳动物和禽类体内致病力的变化,并分析其分子机制。方法设计雪貂气溶胶传播实验和实验鸡静脉注射致病指数实验(IVPI),评估比较第5波疫情分离株Th005和第1波疫情分离株Anhui的致病力和传播力。为进一步分析H7N9禽流感病毒在哺乳动物和禽类体内循环后病毒致病力变化情况,将病毒在雪貂或鸡体内传代后分离毒株接种小鼠和鸡。体外实验中通过病毒在不同细胞系中动力复制曲线、受体结合实验和病毒基因组测序分析原代及传代病毒致病力或传播力变化下可能的分子机制。结果结果显示Th005在雪貂和鸡体内的致病力均有显著提高,其中Th005感染雪貂的肺部病毒滴度比Anhui株高100倍;Th005在雪貂间气溶胶传播能力相较Anhui未出现上升;Th005的IVPI评分是3,为高致病性禽流感病毒,感染实验鸡后能在肛拭子中检测到持续排毒。Th005在雪貂和鸡体内传代后对鸡和小鼠仍然具有致死能力;Anhui株在雪貂和鸡体内传代后对小鼠致病力进一步上升、在鸡体内传代后对鸡的致病力略有提高。在体外,Th005在α2,3和α2,6两种唾液酸受体均高表达的细胞中能够具备更高的复制能力,同时,Th005的复制能力高于Anhui株。人来源的Th005因HA裂解位点碱性氨基酸的插入而成为高致病性禽流感,在哺乳动物体内,Th005对雪貂的致病力较Anhui更强,这种致病力的上升可能和Th005在PB2节段526位点为R(Arg)有关。Th005所具备的α2,3和α2,6双受体结合能力与HA节段186位点为V(Val)且226位点为Q(Gln)有关。结论Th005的对哺乳动物的致病力相较第1波疫情分离的强毒株Anhui株出现了进一步上升,提升了对人群的威胁,但由于其飞沫传播能力未出现明显提升,则考虑其在人群中的爆发能力仍在可控范围内。Th005感染禽类后表现出的高致病力和排毒能力,可能对禽养殖业造成损害且增加病毒在环境中的富集。应当加强对致病力持续上升的H7N9禽流感病毒(例如Th005)的监控。

论文目录

• 缩略词汇
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料和方法
•   1 材料
•     1.1 实验室设备
•     1.2 实验用病毒
•     1.3 实验用细胞
•     1.4 实验用鸡胚
•     1.5 实验用动物
•     1.6 主要试剂
•     1.7 实验耗材
•     1.8 实验仪器
•   2 实验方法
•     2.1 主要试剂的配置
•     2.2 病毒的保存和传代
•     2.3 Th005和Anhui感染雪貂后致病力和传播力比较实验
•     2.4 Th005和Anhui感染鸡后致病力比较实验
•     2.5 Th005、Anhui及其传代株感染小鼠后致病力比较实验
•     2.6 测定鸡胚平均致死时间
•     2.7 病毒体外复制动力曲线
•     2.8 病毒受体结合特性检测
• 50的测定'>    2.9 病毒TCID₅₀的测定
•     2.10 病毒载量测定（qPCR）
•     2.11 血清抗体水平检测（血凝抑制实验）
•     2.12 组织病理分析
•     2.13 病毒基因组测序及分析
•     2.14 数据统计分析
• 结果
•   1 Th005和Anhui感染雪貂后致病力和传播力比较
•     1.1 体重变化率
•     1.2 体温
•     1.3 临床症状及评分
•     1.4 鼻拭子病毒滴度
•     1.5 组织病毒滴度
•     1.6 组织病理分析
•     1.7 血清抗体水平
•   2 Th005和Anhui及其传代株的致病力变化比较
•     2.1 Th005和Anhui及其传代株对禽类的致病力评估
•     2.2 Th005和Anhui及其传代株对哺乳动物的致病力评估
•   3 Th005和Anhui及其传代株的生物学特性及分子基础
•     3.1 Th005和Anhui的鸡胚平均致死时间
•     3.2 Th005和Anhui及其传代株的生物学特性
•     3.3 Th005和Anhui及其传代株的基因序列分析比较
• 讨论
• 结论
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 龚姝然

导师: 鲍琳琳

关键词: 禽流感病毒,雪貂,小鼠,致病性,传播性

来源: 北京协和医学院

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 北京协和医学院

基金: The National Key Research and Development Project of China(2016YFD0500304),The CAMS Innovation Fund for Medical Sciences(CIFMS)(2016-I2M-1-014,2016-I2M-006),The Chinese National Major S&T Project(2017ZX10304402-001)

分类号: S852.65

DOI: 10.27648/d.cnki.gzxhu.2019.000691

总页数: 71

文件大小: 5474K

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