导读:本文包含了天然抗体库论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,噬菌体,多巴胺,骆驼,纳米,双峰驼,莱克。
天然抗体库论文文献综述
康茜,任志军,唐欣浩,王雪伟,陈颖彬[1]（2018）在《天然鼠源噬菌体抗体库的构建及抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子单链抗体的筛选（英文）》一文中研究指出从未经主动免疫的BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,将轻链和重链可变区基因经重迭延伸拼接PCR反应,构建成单链抗体(ScFv)基因。将ScFv基因克隆到噬菌体载体PCANTAB-5E,转化入大肠杆菌TG1中,筛选出阳性克隆,接种于LB培养基,经辅助噬菌体M13KO7拯救,构建天然鼠源噬菌体抗体库,并进行抗体库滴度测定,通过DNA finger printing技术及单链抗体基因序列分析鉴定抗体库的多样性。以堆型艾美耳球虫裂殖子为靶抗原,对构建的噬菌体抗体库进行亲和筛选,将强阳性重组噬菌体克隆感染大肠杆菌HB2151,经IPTG诱导表达可溶性ScFv抗体,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,用ELISA法鉴定其对堆型艾美耳球虫裂殖子抗原的结合活性。结果表明,天然鼠源噬菌体抗体库成功构建,库容量约为2.50×10~(11) CFU/mol,单链抗体库具有一定的多样性。经过4轮亲和筛选,携带抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子表面抗原的特异性噬菌体抗体得到了富集。特异性ScFv抗体在E.coli中分泌表达,表达产物具有免疫活性。筛选出5个与鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗原结合活性较高的克隆,构建的单链噬菌体抗体库的有效表位具有多样性。本研究为进一步认识鸡球虫的各个发育阶段奠定理论基础,为鸡球虫病免疫控制研究提供参考。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2018年11期）
蒋红欣[2]（2018）在《噬菌体天然抗体库淘选及筛选方法的优化》一文中研究指出噬菌体天然抗体库通常具有库容大、多样性好的优势,可广泛用于人源靶点治疗及诊断抗体筛选。但由于天然抗体库中抗体序列多来自IgM,未经刺激成熟,体内亲和力较IgG型偏弱。将获得的scFv序列组装至IgG全长后,亲和力通常为10~(-7)至10~(-8) M级,难以满足对亲和力要求较高时的需求。本论文通过针对不同的靶点的结构特征、项目需求进行抗体淘选和筛选实验。首先,抗原分别选取细胞表面胞外区蛋白、多跨膜蛋白、人源抗原和鼠源抗原,进行直接法和间接法Elisa实验,优化抗体的检测方法。其次,淘选阶段选取不同的结合形式,分别选取固相筛选、液相筛选、细胞筛选和高通量仪器进行淘选,并选取不同的抗原筛选起始浓度,对比Output抗体序列的数量和阳性率,优化淘选方法。其叁,在筛选阶段通过优化Elisa形式、缓冲液类型和试剂浓度等方式,增加抗原与噬菌体颗粒之间的检测窗口,提高阳性数值,减少假阳性。通过这一系列的优化手段,最终获得多个满足需求的高亲和力抗体(10~(-9)至10~-1010 M)。这些淘选和筛选方法的优化研究,有利于提高最终抗体的阳性率和多样性,为利用噬菌体展示抗体库高通量筛选获得目标抗体提供了方法学上的参考。(本文来源于《上海交通大学》期刊2018-04-01）
周景明,翟圆君,耿玥,祁艳华,刘红亮[3]（2018）在《骆驼天然单域重链抗体库的构建与鉴定》一文中研究指出构建骆驼非免疫噬菌体抗体库,完成抗体库的鉴定。从未经免疫的健康骆驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA后,特异性扩增骆驼重链抗体可变区(VHH)片段,将其与噬菌粒载体pCANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠埃希菌TG1后获得VHH抗体基因库,并分析其库容量及多样性。结果表明,经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与莱克多巴胺人工抗原特异性结合的噬菌体展示纳米抗体。构建的骆驼天然重链单域抗体库的库容量为107,多样性良好,独立克隆所占比例为90%,筛选出针对莱克多巴胺人工抗原的噬菌体颗粒。已成功构建骆驼天然噬菌体重链抗体库,并筛选出抗莱克多巴胺的噬菌体颗粒,为抗莱克多巴胺纳米抗体的表达和莱克多巴胺的免疫学检测奠定基础,并为后续淘选针对特定抗原的单域重链抗体奠定了基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2018年01期）
翟圆君[4]（2017）在《骆驼天然单域重链抗体库的构建及抗莱克多巴胺纳米抗体的初步筛选》一文中研究指出骆驼免疫系统里的一种天然缺失轻链的仅由重链组成的抗体,称为重链抗体或纳米抗体。相对于传统抗体,纳米抗体独特的结构,使其具有分子量小、可溶性好等特性,在病原的检测、食品安全分析等领域被普遍应用。纳米抗体与抗原结合功能与全长抗体同等,可以取代全长抗体用于RAC的免疫学检测,建立可靠性高的免疫学检测方法。本实验的研究目的在于构建骆驼天然重链抗体文库,并筛选出抗RAC的噬菌体颗粒。莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)是一种属于苯酚胺类的β-肾上腺素兴奋剂。RAC易在动物组织中积聚残留,人食用后可造成头疼、胸闷等毒副作用。目前,欧盟、中国等组织和国家都将RAC列为违禁物,禁止其在畜禽身上使用。因此,畜产品中莱克多巴胺的快速准确检测对食品安全具有重要意义。本论文的主要内容和结果如下:1.骆驼天然单域重链抗体噬菌体展示文库的构建与鉴定从健康骆驼外周血淋巴细胞中提取其RNA,经鉴定RNA完整性良好。以RNA为模板,反转录为cDNA,PCR扩增骆驼重链抗体可变区基因,将酶切后基因与噬菌粒载体pCANTAB5E连接后电转化至大肠杆菌TG1。经文库鉴定得知,抗体库重组率大约是90%,计算得抗体文库的库容量约为107cfu/mL。随机挑取单克隆测序,抗体库多样性良好,可用于后续淘选研究。2.莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定利用1,4-丁二醚法制备RAC-OVA人工抗原,混合酸酐法制备RAC-BSA人工抗原,分别经紫外光谱扫描法和SDS-PAGE凝胶电泳法鉴定,合成的人工抗原的吸收峰出现偏移现象,且偶联物的分子量比载体蛋白的分子量偏大。证明人工抗原RAC-OVA、RAC-BSA偶联成功。3.抗莱克多巴胺纳米抗体重组噬菌体的筛选与鉴定用人工抗原RAC-BSA从噬菌体展示抗体库中筛选出能表达抗RAC特异性纳米抗体的重组噬菌粒,取筛选得到的阳性噬菌体扩增纯化后,诱导表达获得的可溶性重组纳米抗体粗提物,并进一步通过ELISA检测纳米抗体粗提物,经鉴定其具有抗原结合能力。综上所述,本实验已成功构建骆驼天然单域重链噬菌体展示抗体库,并从抗体库中筛选出抗莱克多巴胺的噬菌体颗粒,为抗莱克多巴胺纳米抗体的表达和RAC的免疫学检测奠定了基础,天然噬菌体抗体库的构建为后续淘选其他针对特定抗原的纳米抗体奠定了基础。(本文来源于《郑州大学》期刊2017-05-01）
翟圆君,刘红亮,耿玥,聂守一,王爱萍[5]（2016）在《构建羊驼天然重链单域噬菌体抗体库》一文中研究指出研究目的:相比传统抗体,羊驼中存在天然缺失轻链的抗体,称为重链抗体。与具有重链和轻链4条多肽链组成的抗体分子不同,重链抗体由两条同源的重链肽段组成,只包含可变区、CH2区和CH3区。它天然缺失轻链及常规抗体重链中的CH1区,仍具有与普通抗体相当的抗原结合能力。单域重链抗体具有分子量小,易表达,耐高温,高溶于水等性质。噬菌体展示技术将抗体分子展示于噬菌体表面后,利用靶标抗原分子将表达特异性抗体分子的噬菌体筛选出来,通过基因工程的方法对抗体进行表达和后续的功能鉴定,从而获得功能性抗体分子。综合羊驼重链抗体和噬菌体展示抗体库优势,本研究构建大容量天然羊驼重链单域噬菌体抗体库。研究方法:采集未经免疫的羊驼外周血溶于EDTA抗凝剂中,使用淋巴细胞分离试剂盒获得淋巴细胞,分装并取出107个细胞,以TRIzol Reagent试剂提取总RNA,使用随机引物反转录成cDNA。采用巢式PCR法特异性扩增羊驼重链抗体可变区片段,在第一轮PCR中,扩增FR1和CH2之间的片段,使用引物CALL001:5’-GTCCTGGCTCTCTTCTACAAGG-3’和CALL002:5’-GGTACGTGCTGTTGAACTGTTCC-3’;通过琼脂糖凝胶电泳获得重链抗体上600-700bp的片段,从1%核酸胶中分离出600bp和900bp的片段,并以600bp片段为模版进行第二轮扩增,扩增FR1和FR4之间的片段,第二轮扩增引物为VHHFprimer5’CTGGCCCAGGCGGCCGA GGTGCAGCTG(C/G(A/T)G(C/G)A(G/T)TC(G/T)G3’VHHRprimer:5’ACTGGCCGGCCTGGCCTGA GGAGACGGTGATGACC(A/T)GGGTC-3’,(包含Sfil和Not I限制性酶切位点),扩增产物约450-520bp将重链抗体可变区片段与噬菌粒载体p CANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠杆菌TG1后获得VHH抗体基因库,构建羊驼天然重链单域抗体库,并对抗体文库的库容量及多样性进行评估分析,以M13KO7辅助噬菌体感染扩增获得噬菌体展示单域抗体库。实验结果:用梯度稀释法测得该抗体库的库容为10~7。实验结论:本研究成功构建了大容量的羊驼天然重链单域抗体库,鉴定分析其库容量及多样性均良好,为特异性重链抗体的筛选奠定基础。(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2016-11-04）
芦婷[6]（2016）在《双峰驼天然单域抗体库的构建及重链抗体特异性多抗的制备》一文中研究指出骆驼血清中除了常规抗体IgG1,还存在两种天然缺失轻链的重链抗体IgG2和IgG3,其具有分子量小、稳定性强等优点,但市场上仍缺乏商品化的骆驼重链抗体特异性的抗体,使其研究和应用受到了限制,因此制备针对骆驼重链抗体的多抗将具有一定的应用前景。重链抗体的可变区VHH是目前发现的、具有完整功能的最小抗体分子片段,该抗体在基础研究、药物开发等领域应用前景极为广阔。将VHH展示在噬菌体表面,构建噬菌体抗体文库,再通过体外筛选技术将所需性质的多肽从含有大量变异体的集落中提取出来,为特异性抗体的制备提供了极大的便利。本研究的第一部分即结合骆驼重链抗体的优势与噬菌体展示技术的优点,从五峰未经免疫的健康双峰驼外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,利用PCR技术扩增编码抗体可变区的基因,通过与噬菌体载体连接,电转化E.coli TGI感受态细胞,构建了双峰驼天然单域抗体文库。经鉴定文库库容为4.4×107,转化阳性率为75%,多样性良好。本研究第二部分,我们利用分离淋巴细胞后的双峰驼血浆,经过Protein G/A Resin柱子对双峰驼叁种亚型抗体进行了分离和纯化,以纯化的IgG2对家兔进行叁次免疫制备了针对双峰驼重链抗体的多克隆抗体,并对其活性进行了鉴定。间接ELISA法测定多抗效价为1：4096；间接ELISA法和Western-blot方法检测多抗的特异性,结果显示制备的多抗与牛IgG以及双峰驼IgG1无交叉反应,而与IgG3抗体具有交叉反应性。本试验研究成功制备了双峰驼重链抗体特异性多克隆抗体。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2016-06-01）
蒋效,何立东,王欲晓,丁立,吴成林[7]（2015）在《利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体》一文中研究指出目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(sc Fv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白。结论利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性sc Fv。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2015年06期）
孙巍,林珩,花芳,胡卓伟[8]（2013）在《优化宿主菌在重组系统中构建大容量天然噬菌体抗体库》一文中研究指出制备大容量天然噬菌体抗体库。从健康成人外周血和新生儿脐带血中提取淋巴细胞总RNA,反转录后PCR分别扩增抗体重链和轻链基因。将获得的基因片段通过overlap PCR连接为单链抗体基因(scFv),限制性内切酶酶切后连入pDAN5a载体中,连接产物转化大肠杆菌XL2-blue MRF’。与XL1-blue菌株相比,初级库库容增加了3.9倍。再将初级库噬菌体感染含有Cre重组酶的大肠杆菌BS1365,抗体基因在重组酶作用下发生同源重组,最终得到库容为1.7×1011的噬菌体抗体库。经检测,该抗体库多样性良好,利用该库可获得针对6种抗原的抗体。以上结果表明,应用XL2-blue MRF’作为抗体基因的转化宿主,提高了噬菌体抗体库的库容,获得的抗体库可用于下一步抗体药物的筛选。(本文来源于《药学学报》期刊2013年01期）
潘博,付文卓,王晓娜,张宝中,米志强[9]（2012）在《用于大容量人源天然噬菌体抗体库的表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建一个应用于大容量Fab段天然噬菌体抗体库的表达载体。方法用定点突变技术将表面呈现噬菌粒载体pDF上的BssHⅡ酶切位点改为BglⅡ酶切位点,然后分别在抗体轻链和重链位置插入自杀基因SacB,构建含自杀基因的噬菌粒载体pDF-D-SacB;利用抗乙肝表面抗原抗体的基因为模板,PCR扩增重链和轻链基因片段。将PCR扩增的轻链基因和重链基因分别插入载体pDF-D-SacB内,利用电转化的方法将其转入Trans1-Blue大肠杆菌,构建2个初级质粒,再利用初级质粒超感染BSl365菌,使其轻链与重链发生重组,获得重组质粒,进一步获得抗乙肝表面抗原抗体的噬菌体。之后利用该噬菌体感染大肠杆菌Trans1-Blue进行扩增,得到大量抗乙肝表面抗原的噬菌体抗体。最后,通过酶联免疫吸附剂测定检测所获得的抗体。结果通过向pDF重轻链区域插入SacB基因,改造抗体基因克隆位点,构建了pDF-D-SacB载体;经检测,pDF-D-SacB可以表达具有功能的Fab噬菌体抗体,可以在分泌Cre蛋白酶的细菌胞内发生预期的Cre-Loxp介导的定点重组。结论所获得的含自杀基因的噬菌粒载体pDF-D-SacB适用于构建大容量噬菌体抗体库。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2012年05期）
黄爱玲,冯荣虎,吕暾,李森[10]（2012）在《天然兔源噬菌体单链抗体库的构建与鉴定》一文中研究指出目的:构建天然兔源噬菌体单链抗体库。方法:采用RT-PCR法从未免疫的兔子脾脏中克隆得到抗体重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,重迭PCR将VH和VL拼接成scFv片段,将scFv连接到噬菌粒pComb3XSS上,电转入XL1-Blue菌中,得到单链抗体库,并用此抗体库筛选抗肌酸激酶抗体。结果:构建了容量为4×108,基因重组率95%的单链抗体库,DNA指纹图谱显示抗体库多样性良好。以肌酸激酶为抗原,从该库中筛到3株抗肌酸激酶的抗体。结论:分析表明构建的天然兔源单链抗体库质量良好,可用于快速筛选、制备多种单链抗体。(本文来源于《生物技术》期刊2012年01期）
天然抗体库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
噬菌体天然抗体库通常具有库容大、多样性好的优势,可广泛用于人源靶点治疗及诊断抗体筛选。但由于天然抗体库中抗体序列多来自IgM,未经刺激成熟,体内亲和力较IgG型偏弱。将获得的scFv序列组装至IgG全长后,亲和力通常为10~(-7)至10~(-8) M级,难以满足对亲和力要求较高时的需求。本论文通过针对不同的靶点的结构特征、项目需求进行抗体淘选和筛选实验。首先,抗原分别选取细胞表面胞外区蛋白、多跨膜蛋白、人源抗原和鼠源抗原,进行直接法和间接法Elisa实验,优化抗体的检测方法。其次,淘选阶段选取不同的结合形式,分别选取固相筛选、液相筛选、细胞筛选和高通量仪器进行淘选,并选取不同的抗原筛选起始浓度,对比Output抗体序列的数量和阳性率,优化淘选方法。其叁,在筛选阶段通过优化Elisa形式、缓冲液类型和试剂浓度等方式,增加抗原与噬菌体颗粒之间的检测窗口,提高阳性数值,减少假阳性。通过这一系列的优化手段,最终获得多个满足需求的高亲和力抗体(10~(-9)至10~-1010 M)。这些淘选和筛选方法的优化研究,有利于提高最终抗体的阳性率和多样性,为利用噬菌体展示抗体库高通量筛选获得目标抗体提供了方法学上的参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
天然抗体库论文参考文献
[1].康茜,任志军,唐欣浩,王雪伟,陈颖彬.天然鼠源噬菌体抗体库的构建及抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子单链抗体的筛选（英文）[J].中国兽医学报.2018
[2].蒋红欣.噬菌体天然抗体库淘选及筛选方法的优化[D].上海交通大学.2018
[3].周景明,翟圆君,耿玥,祁艳华,刘红亮.骆驼天然单域重链抗体库的构建与鉴定[J].动物医学进展.2018
[4].翟圆君.骆驼天然单域重链抗体库的构建及抗莱克多巴胺纳米抗体的初步筛选[D].郑州大学.2017
[5].翟圆君,刘红亮,耿玥,聂守一,王爱萍.构建羊驼天然重链单域噬菌体抗体库[C].第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编.2016
[6].芦婷.双峰驼天然单域抗体库的构建及重链抗体特异性多抗的制备[D].内蒙古农业大学.2016
[7].蒋效,何立东,王欲晓,丁立,吴成林.利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体[J].细胞与分子免疫学杂志.2015
[8].孙巍,林珩,花芳,胡卓伟.优化宿主菌在重组系统中构建大容量天然噬菌体抗体库[J].药学学报.2013
[9].潘博,付文卓,王晓娜,张宝中,米志强.用于大容量人源天然噬菌体抗体库的表达载体的构建及鉴定[J].首都医科大学学报.2012
[10].黄爱玲,冯荣虎,吕暾,李森.天然兔源噬菌体单链抗体库的构建与鉴定[J].生物技术.2012
论文知识图
