论文摘要
黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）是一种正义单链RNA病毒,是雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）的代表性病毒,其基因组由三条单链正义RNA组成。已有研究表明,CMV的复制位于宿主液泡膜。液泡膜脂质是否调节CMV复制尚不明确。因此,液泡膜脂质成分的鉴定和分析对于研究CMV复制的分子机制具有重要意义。为了明确CMV侵染对于宿主液泡膜脂质成分的影响,我们利用LC-MS技术对液泡膜脂质进行质谱鉴定。在mock与CMV侵染植株中,总共鉴定到481种脂质,可以分为16种。比较mock和CMV侵染的液泡膜脂质发现:CMV的侵染导致宿主液泡膜中鞘脂类含量增加。随后,我们通过荧光定量PCR对本氏烟鞘脂类代谢相关基因进行定量分析,结果表明:CMV侵染引起部分鞘脂合成相关基因的表达量上调,其中3-酮基二氢鞘氨醇还原酶（TSC10）基因的上调最为显著。然后,我们通过烟草脆裂病毒（TRV）介导的基因沉默技术下调本氏烟中TSC10的表达量,并检测其对CMV积累的影响。有趣的是,TSC10下调显著降低了 CMV在植物中的积累水平,此外,液泡膜上CMV复制囊泡的数量没有明显变化。然而,TSC10沉默后对烟草花叶病毒和马铃薯X病毒的积累量没有明显影响。以上结果说明TSC10对CMV病毒的调控具有特异性。外施水杨酸（SA）能够上调TSC10的表达,说明CMV上调TSC10可能与SA信号通路有关。总之,CMV感染诱导参与鞘脂合成的一些基因的表达从而导致液泡膜中鞘脂组分的含量增加,正调节CMV的复制。我们的发现暗示了鞘脂在CMV复制中起重要作用。
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摘要Abstract缩略词表第一章 文献综述 1.1 黄瓜花叶病毒 1.1.1 CMV的生物学特性 1.1.2 CMV的复制 1.1.3 参与CMV复制的宿主因子 1.2 植物鞘脂的研究进展 1.2.1 植物鞘脂的结构与合成 1.2.2 植物鞘脂的功能 1.3 脂质对病毒复制的调控 1.3.1 脂质对动物病毒复制的调控 1.3.2 脂质对植物病毒复制的调控 1.4 本研究的目的和意义 1.4.1 研究目的和意义 1.4.2 研究内容第二章 本氏烟液泡膜脂质的质谱鉴定与分析 2.1 材料与方法 2.1.1 实验材料 2.1.2 常用试剂配制 2.1.3 农杆菌浸润接种本氏烟 2.1.4 本氏烟液泡的提取 2.1.5 液泡膜的富集 2.1.6 液泡膜总RNA的提取 2.1.7 RT-PCR分析 2.2 结果与分析 2.2.1 本氏烟液泡的提取 2.2.2 液泡膜定位的CMV RNA的检测 2.2.3 液泡膜脂质的质谱鉴定与分析 2.3 小结与讨论第三章 CMV侵染对宿主鞘脂合成相关基因表达的影响 3.1 材料与方法 3.1.1 酶与试剂 3.1.2 农杆菌的浸润接种本氏烟 3.1.3 摩擦接种拟南芥 3.1.4 本氏烟与拟南芥总RNA的提取 3.1.5 RT-PCR与荧光定量PCR分析 3.2 结果与分析 3.2.1 CMV侵染对本氏烟中鞘脂合成相关基因表达的影响 3.2.2 CMV侵染对拟南芥TSC10基因表达的影响 3.2.3 CMV通过SA上调Nb-TSC10 3.3 小结与讨论第四章 TSC10含量下调对CMV积累量的影响 4.1 材料方法 4.1.1 酶与试剂 4.1.2 TRV2-TSC10重组克隆载体的构建 4.1.3 农杆菌浸润接种本氏烟 4.1.4 本氏烟叶片总蛋白的提取与Western blot分析 4.1.5 本氏烟总RNA的提取 4.1.6 Northern blot分析 4.1.7 荧光定量PCR分析 4.1.8 透射电镜样品的制备 4.2 结果与分析 4.2.1 TSC10下调对CMV基因组积累的影响 4.2.2 TSC10下调对TMV-GFP和PVX-GFP积累的影响 4.2.3 TSC10下调对液泡膜上CMV复制囊泡的影响 4.3 小结与讨论总结与展望参考文献致谢
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 王倩
导师: 杜志游,顾周杭
关键词: 黄瓜花叶病毒,液泡膜,病毒复制,鞘脂
来源: 浙江理工大学
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,植物保护
单位: 浙江理工大学
分类号: S432.41
DOI: 10.27786/d.cnki.gzjlg.2019.000022
总页数: 55
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标签：黄瓜花叶病毒论文; 液泡膜论文; 病毒复制论文; 鞘脂论文;
