轮状病毒Rotateq及Rotarix疫苗VP8~*蛋白的原核表达、纯化与鉴定

论文摘要

目的 :通过大肠埃希菌原核表达体系,分别获得轮状病毒疫苗Rotateq及Rotarix的VP8*基因表达产物,为深入研究轮状病毒VP8*蛋白的结构和功能奠定基础。方法 :基因合成轮状病毒疫苗Rotateq及Rotarix的P[8]型VP8*基因序列,将其克隆到携带有GST标签的pGEX-4T1表达载体中构建重组质粒pGEX-4T1-VP8*,测序正确后转化大肠杆菌BL21（DE3）,通过SDS-PAGE电泳检测表达产物,并通过Glutathione Sepharose 4B纯化柱进行纯化,Western Blot鉴定。结果 :SDS-PAGE电泳结果显示分子量52KD处有深染带,Western-Blot显示该处蛋白能与GST标签抗体结合。结论 :成功构建了包含Rotateq及Rotarix VP8*基因的重组表达载体pGEX-4T1-VP8*,获得了可溶性GST-VP8*重组蛋白。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料、试剂
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 基因合成
•     1.2.2 克隆构建
•     1.2.3 重组蛋白表达和纯化
•     1.2.4 重组蛋白鉴定
• 2 结果
•   2.1 重组质粒的构建与鉴定
•   2.2 重组质粒在大肠杆菌BL21的诱导表达
•   2.3 重组蛋白的纯化
•   2.4 重组蛋白western-blot鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邓中华,郭妮君,陈杰,谭超超,熊艺灿,曹友德

关键词: 轮状病毒,疫苗,原核表达,蛋白

来源: 湖南师范大学学报(医学版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 湖南师范大学第一附属医院湖南省人民医院,湖南省妇幼保健院

基金: 湖南省自然科学基金(2017JJ2151)

分类号: R392

页码: 4-7

总页数: 4

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