莱茵衣藻中IFT80蛋白多克隆抗体的制备及其应用

论文摘要

IFT80蛋白是莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）纤毛内运输蛋白（intraflagellar transport, IFT）复合体中的一个重要组分,获得IFT80蛋白抗体为研究该蛋白作用机理提供有力的实验材料。通过构建大肠杆菌重组表达载体pGEX-4T-ift 80,将重组表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta中,构建表达IFT80蛋白的重组菌株;在合适的时间点加入浓度适当的IPTG诱导重组菌株表达IFT80蛋白;将收集的蛋白上清液过柱纯化,再以纯化后的IFT80蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,动脉取血后,将血清分离纯化获得莱茵衣藻IFT80多克隆抗体。结果:经ELISA法测定该抗体效价达到512 000,Westernblot测定该抗体特异性好。该抗体可用于莱茵衣藻IFT80蛋白的检测和功能鉴定,对于研究莱茵衣藻IFT80蛋白的作用机理及生物学功能研究等具有重要意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•     1.1.1 质粒
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 主要仪器
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 莱茵衣藻ift80基因的扩增
•     1.2.2 原核表达载体pGEX-4T-ift80的构建与鉴定
•     1.2.3 抗原蛋白的制备与纯化
•     1.2.4 多克隆抗体的制备及鉴定
•     1.2.5 免疫荧光法检测IFT80蛋白定位
• 2 结果与分析
•   2.1 莱茵衣藻ift 80基因的克隆和表达载体的构建
•   2.2 抗原蛋白的诱导表达及纯化
•   2.3 抗体的效价及特异性鉴定
•   2.4 免疫荧光法检测IFT80蛋白定位
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 冯雳,丁梅,邢俊俏,李丽丽,蒋俊龙

关键词: 纤毛,抗体制备,血清分离纯化,莱茵衣藻

来源: 湖北师范大学学报(自然科学版) 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 江汉大学系统生物学研究院遗传与生物技术研究中心

基金: 国家自科科学基金青年项目(31601090)

分类号: Q946

页码: 53-58

总页数: 6

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