导读:本文包含了卵清蛋白基因端调控序列论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:卵清蛋白基因,调控序列,载体,荧光素酶活性
卵清蛋白基因端调控序列论文文献综述
黄菁,朱志伟,陈晓宇,于福先,潘建治[1]（2016）在《鸡卵清蛋白基因调控序列的克隆与载体构建》一文中研究指出卵清蛋白(ovalbumin)基因在鸡基因组中只有一对等位基因,却能每天合成分泌多达2 g的蛋白,占据卵白蛋白质的50%以上,是外源基因载体表达调控构件的首选。该研究从输卵管特异性启动子方面着手,通过对卵清蛋白基因启动子的筛选优化,找出启动子增强因子的位置以及组织特异性区域。将卵清蛋白基因上游-922~-2 073和-2 801~-3 100区域平均分成12个长度约为150 bp的序列,分别插入到-921~+38序列的上游,成功构建12个系列表达载体,为进一步筛选短缩版优化启动子提供材料;卵清蛋白基因第一内含子区域截断成300 bp左右的迷你内含子序列,成功构建8个迷你内含子系列载体,为筛选优化的迷你内含子提供必要的材料;成功分离鸡输卵管上皮细胞并优化电转染条件,通过荧光素酶活性检测初步筛选出具有最强活性重组质粒pGL4-UP-1412和内含子重组质粒pGL4-mini-intron-3,同时推断出若干包含增强子序列区域。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2016年03期）
张彦,于晓婕,李娟,王亚军[2]（2014）在《家鸡卵清蛋白基因调控序列克隆与分析》一文中研究指出本文扩增了包含卵清蛋白5’侧翼上游约3.4kb片段及其第一外显子、第一内含子与第二外显子的一部分,并分别删除5’端的一个DNA酶超敏感位点(DHSs)和第一内含子,得到四个不同长度的调控序列.经测序后,将四个片段分别连接在带有绿色荧光蛋白基因的pcDH-EGFP载体上,并同时为了消除载体上的CMV启动子的影响而将之切除,从而得到OV1.1k-EGFP,OV3.4k-EGFP,OV1.1k-intron-EGFP和OV3.4k-intron-EGFP四种慢病毒载体.经酶切鉴定这四种表达载体构建正确,并且尝试用OV1.1k-EGFP慢病毒载体转染培养家鸡原代输卵管细胞后,标记基因(EGFP)成功表达.这些结果为后续深入探究家鸡卵清蛋白基因调控序列功能奠定基础.(本文来源于《四川大学学报(自然科学版)》期刊2014年03期）
杜立新,赵英会,张念华[3]（2004）在《鸡卵清蛋白基因调控序列指导人促红细胞生成素转基因鸡的制备》一文中研究指出本研究将鸡卵清蛋白 5!@端调控区调控人促红细胞生成素的pOV -hEPO特异表达载体用脂质体包埋 ,和供体细胞融合后 ,显微注射入 4 5 0枚受体胚盘 ,采用代用蛋壳法培养制备转基因鸡 ,PCR和斑点杂交检测外源基因已整合入早期鸡胚胎生殖系统 ,为制备表达人促红细胞生成素的鸡输卵管生物反应器奠定了基础(本文来源于《山东农业大学学报(自然科学版)》期刊2004年03期）
逄越[4]（2004）在《鸡卵清蛋白基因调控序列调控人α1抗胰蛋白酶基因在CHO细胞中的表达》一文中研究指出人α1抗胰蛋白酶(α1AT)是哺乳动物血液中一种重要的蛋白酶抑制剂,抑制人体内多种不同的丝氨酸蛋白酶免受弹性蛋白酶的水解。它是一种含有碳水化合物侧链的单链糖蛋白,分子量52KDa,由394个aa组成,α1AT基因全长12.2Kb定位于14q31-32,含有3个非编码外显子,4个编码外显子和6个内含子,α1AT肝细胞中的片段全长1434bp包括49bp5’非编码区,1254bp编码区,一个终止密码子,79bp3’非编码区及一个poly(A)尾。随着对α1AT 缺乏者基因缺陷特征的认识及基因序列的克隆,基因治疗已成为一种有前途的治疗措施,近年来对α1AT 的重组表达研究进展很快,大致有原核生物细胞水平,真核生物细胞水平及转基因动物叁个阶段。本研究采用5’RACE方法确定鸡卵清蛋白基因转录起始点的位置,通过序列分析得出转录起始点为G,从而确定出核心启动子及上游调控区的位置。应用PCR技术特异性扩增家鸡卵清蛋白基因上游调控序列-1340bp～+1655bp片段和第一内含子+49bp～+1655bp片段,长度分别为2.9kb和1.5kb,经PCR产物直接测序和克隆测序后,针对突变的碱基进行修复,并将修复的两片段分别连接在带有绿色荧光蛋白报告基因pGFP-N2载体上,为使pGFP-N2载体本身的CMV启动子不影响对鸡卵清蛋白启动子的研究,将其切去,构建了P2. 9koval-GFP和P1. 5koval-GFP两种表达载体,经测序和酶切鉴定这两种表达载体构建正确。采用脂质体转染法分别将上述两种构建载体、pGFP-N2(阳性对照)质粒及阴性对照转染鸡原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞中。用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达。结果表明两种表达质粒在鸡原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞中都可以表达萤光蛋白基因。结果显示本文构建的卵清蛋白基因的5’调控区和第一内含子对基因的表达起到一定的调控作用。用人α1抗胰蛋白酶(α1-AT)基因的信号肽编码序列替换鸡卵清蛋白基因的信号肽编码序列,构建了包括鸡卵清蛋白基因启动子和外显子1,内含子1共约2.9Kb片段以及人α1抗胰蛋白酶全长cDNA序列和鸡卵清蛋白基因3’非编码区部分序列的表达载体P5’UTR-AT-3’UTR,融合基因经脂质体转染至中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary)中,通过PCR、ELISA和Western 杂交鉴定,证明所构建的鸡卵清蛋白基因启动子能有效调控α1-AT基因在CHO 细胞中高效表达,并能保持α1-AT的生物活性。为进一步研究转基因鸡输卵管生物反应器高效表达人α1-AT提供了可行性。(本文来源于《辽宁师范大学》期刊2004-06-01）
宇丽,赵君,张艳玲,刘斌,张守峰[5]（2001）在《鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达》一文中研究指出将氯霉素乙酰转移酶 ( CAT)基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合 ,构建了 p CAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因 5′调控序列 )表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液 ,转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表明 ,在鸡原代输卵管上皮细胞 ,转染后 4 8h表达量最高 ,为 0 .67μg/L;而在鸡成纤维细胞 ,不论有无类固醇激素存在 ,均不表达。结果提示 ,在输卵管细胞中存在细胞特异性转录因子。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2001年01期）
宇丽,赵君,岳军明,余兴龙,李红卫[6]（1999）在《鸡卵清蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析》一文中研究指出应用PCR 技术从鸡肝脏基因组中克隆了1.1 kb 的鸡卵清蛋白基因上游调控序列,并进行了序列分析。结果发现,扩增产物只有2 个碱基发生了突变,其TATA 框、组织特异性因子和卵清蛋白上游启动子均未发生变异,表明已成功地克隆了鸡卵清蛋白基因上游调控序列,这为应用卵清蛋白提取生物活性物质的转基因鸡的构建研究奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊1999年06期）
卵清蛋白基因端调控序列论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文扩增了包含卵清蛋白5’侧翼上游约3.4kb片段及其第一外显子、第一内含子与第二外显子的一部分,并分别删除5’端的一个DNA酶超敏感位点(DHSs)和第一内含子,得到四个不同长度的调控序列.经测序后,将四个片段分别连接在带有绿色荧光蛋白基因的pcDH-EGFP载体上,并同时为了消除载体上的CMV启动子的影响而将之切除,从而得到OV1.1k-EGFP,OV3.4k-EGFP,OV1.1k-intron-EGFP和OV3.4k-intron-EGFP四种慢病毒载体.经酶切鉴定这四种表达载体构建正确,并且尝试用OV1.1k-EGFP慢病毒载体转染培养家鸡原代输卵管细胞后,标记基因(EGFP)成功表达.这些结果为后续深入探究家鸡卵清蛋白基因调控序列功能奠定基础.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
卵清蛋白基因端调控序列论文参考文献
[1].黄菁,朱志伟,陈晓宇,于福先,潘建治.鸡卵清蛋白基因调控序列的克隆与载体构建[J].浙江农业学报.2016
[2].张彦,于晓婕,李娟,王亚军.家鸡卵清蛋白基因调控序列克隆与分析[J].四川大学学报(自然科学版).2014
[3].杜立新,赵英会,张念华.鸡卵清蛋白基因调控序列指导人促红细胞生成素转基因鸡的制备[J].山东农业大学学报(自然科学版).2004
[4].逄越.鸡卵清蛋白基因调控序列调控人α1抗胰蛋白酶基因在CHO细胞中的表达[D].辽宁师范大学.2004
[5].宇丽,赵君,张艳玲,刘斌,张守峰.鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达[J].中国兽医学报.2001
[6].宇丽,赵君,岳军明,余兴龙,李红卫.鸡卵清蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析[J].中国兽医学报.1999