牛诺如病毒和冠状病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用

论文摘要

为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)和牛冠状病毒(BCoV)的聚合酶链反应(PCR)检测方法,根据BNoV和BCoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增BNoV和BCoV的片段大小分别为542 bp和896 bp。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BNoV和BCoV的目的条带,未扩增出其他犊牛腹泻病毒性病原;BNoV和BCoV的最低检测限分别为6.71×10~4 copies/μL和1.38×10~5 copies/μL。对采集自河南地区的127份犊牛腹泻样品的检测结果显示,BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BCoV的阳性率为14.96%(19/127),与单项PCR检测结果相一致。结果表明,建立的双重PCR方法可用于BNoV和BCoV的检测及流行病学调查。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 主要材料及临床病料收集
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 临床样品处理及病毒核酸提取
•     1.2.2 引物的设计及合成
•     1.2.3 双重PCR扩增
•     1.2.4 特异性试验
•     1.2.5 敏感性试验
•     1.2.6 重复性试验
•     1.2.7 应用性试验
• 2 结果
•   2.1 双重PCR扩增结果
•   2.2 特异性试验
•   2.3 敏感性试验
•   2.4 双重PCR重复性试验
•   2.5 双重和单项PCR临床检测结果比较
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王文佳,师志海,兰亚莉,徐照学

关键词: 牛诺如病毒,牛冠状病毒,犊牛腹泻,双重聚合酶链反应

来源: 动物医学进展 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南牧业经济学院制药工程学院,河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室

基金: 国家现代农业肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-37),河南省农业科学院自主创新专项基金项目(2017ZC51,2018ZC56),河南省“四优四化”科技支撑行动计划项目(2017-106-2130106)

分类号: S852.653

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.10.002

页码: 6-9

总页数: 4

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