鼠抗人CD28单克隆抗体的制备及体外生物学活性的初步研究

论文摘要

目的:制备纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,初步研究其体外生物学活性。方法:采用诱生腹水法制备抗体,Protein A免疫亲和层析法进行纯化,并对纯化的抗体进行SEC-HPLC分析测定其纯度; ELISA及流式细胞术检测抗体与重组CD28抗原及Jurkat膜表达CD28的结合活性,表面等离子体共振技术检测抗体与CD28的结合动力学参数,并研究抗体对外周血T细胞增殖的影响。结果:制备获得纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,其纯度>95%,能够结合重组及天然表达的CD28,其半数效应浓度（EC50）分别为19. 8μg/ml和15. 2μg/ml,该抗体与CD28结合亲和力常数（KD）为2. 13×10-9M。基于细胞的活性分析结果表明,该抗体具有明显的促进人外周血T细胞增殖的活性。结论:本研究制备获得纯化的鼠抗人CD28单克隆抗体,该抗体具有良好的识别CD28的特性以及促进外周血T细胞增殖的活性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 试剂、仪器
•     1.1.2 细胞株及实验动物
•   1.2 方法
•     1.2.1 杂交瘤细胞6E8的复苏和抗体的制备与纯化
•     1.2.2 分子筛高效液相色谱法（SEC-HPLC）分析纯度、降解和聚体
•     1.2.3 ELISA检测抗体与重组人CD28的结合活性
•     1.2.4 流式细胞术（FCM）检测抗体与Jurkat细胞膜表达的天然人CD28结合活性
•     1.2.5 表面等离子共振技术（SPR）检测抗体与人CD28结合动力学特性
•     1.2.6 CD28抗体对外周血T细胞增殖的影响
•   1.3 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 CD28抗体的制备、纯化及纯度分析
•   2.2 CD28抗体结合重组及Jurkat膜表达的天然人CD28活性分析
•   2.3 CD28抗体结合人CD28动力学特性
•   2.4 CD28抗体对外周血T细胞增殖的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 沈立军,孔永,颜天铭,王玉玉,王婧,邱玉华

关键词: 单克隆抗体,生物学活性,表面等离子共振技术,结合动力学

来源: 中国免疫学杂志 2019年18期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 苏州大学基础医学与生物科学学院免疫学系,苏州大学实验动物中心

基金: 国家自然科学基金项目(81373236)资助

分类号: R392

页码: 2253-2257

总页数: 5

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