贝类中GⅠ、GⅡ诺如病毒快速检测与分群方法的建立

论文摘要

目的建立贝类中GⅠ、GⅡ诺如病毒快速检测与分群方法。方法对比分析6株主要流行的GⅠ、GⅡ诺如病毒及参考诺如病毒的基因序列,筛选保守区域引物,优化建立SYBR Green Ⅰ荧光定量检测与熔解曲线快速分群方法,并对实际样品检测验证。结果引物P289/290可同时检测GⅠ、GⅡ诺如病毒,SYBR Green Ⅰ荧光定量检测方法在病毒浓度10~3～10~9 copies之间呈现良好的线性关系(R~2=0.993,P<0.01),熔解曲线Tm值可区分GⅠ和GⅡ不同基因群的诺如病毒(F=7 507.60,P<0.05)。120份贝类样品阳性检出率5.83%,其中阳性结果测序鉴定与快速分群方法结论一致。结论该方法成本低、检测快速、分群准确,具有良好重复性,适用于贝类中GⅠ、GⅡ诺如病毒的快速检测与分群。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 设备与试剂
•   1.3 引物筛选
•   1.4 实验方法
•     1.4.1 病毒人工污染、回收、RNA提取
•     1.4.2 普通RT-PCR与荧光定量反应体系优化
•     1.4.3 荧光定量标准品制备
•     1.4.4 SYBR Green I荧光定量PCR的TM曲线
•     1.4.5 特异性与准确性试验
•     1.4.6 稳定性与重复性
•     1.4.7 验证性试验
•   1.5 数据处理
• 2 结 果
•   2.1 普通RT-PCR结果
•   2.2 荧光定量检测
•   2.3 准确性和特异性
•   2.4 方法的稳定性
•   2.5 样品中诺如病毒检测与鉴定
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 苏来金,赵峰,马丽萍,周德庆

关键词: 贝类,诺如病毒,快速检测,分群

来源: 中国人兽共患病学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业,预防医学与卫生学

单位: 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所,温州市农业科学研究院,上海海洋大学食品学院

基金: 国家自然科学基金项目(No.31471663)~~

分类号: R155.5

页码: 909-914

总页数: 6

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