产肠毒素大肠杆菌感染IPEC-J2细胞后IL-17细胞因子表达变化及其功能初探

论文摘要

产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic E.coli, ETEC）是引起新生和断奶仔猪腹泻（post-weaning diarrhea, PWD）的最重要的病原之一。ETEC进入肠道后与肠上皮细胞的相互作用既是该细菌致病的前提条件,也是激发宿主免疫反应的基础。本研究旨在分析ETEC感染猪肠上皮细胞后IL-17细胞因子表达变化,同时探索细胞因子在抵抗ETEC感染中的免疫防御机制。本研究采用猪肠上皮细胞系IPEC-J2和产肠毒素大肠杆菌标准株（C83901）为主要研究材料,通过RT-PCR、ELISA、免疫荧光及免疫印迹的方法分析了IL-17细胞因子及肠黏膜免疫防御相关基因在感染前后的变化。同时,进一步研究了IPEC-J2细胞中相关IL-17细胞因子刺激对肠黏膜防御相关基因的调控作用。结果表明,除IL-17D未检测到外,C83901能促进所有IL-17细胞因子mRNA的转录,尤其能显著上调IL-17A、IL-17C在基因和蛋白水平的表达。ETEC感染或者体外添加IL-17A/IL-17C有利于IPEC-J2细胞中黏蛋白（mucin-2）、紧密连接蛋白（claudin-1、 claudin-2）及防御素pBD-2的表达。结果提示,ETEC感染后,肠上皮细胞通过调节IL-17细胞因子的表达进而增强肠黏膜屏障功能以抵抗该细菌的入侵。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验菌株与细胞系
•   1.2 细胞感染试验
•   1.3 细胞因子刺激试验
•   1.4 qRT-PCR检测基因mRNA相对表达量
•     1.4.1 总RNA提取和反转录
•     1.4.2 引物设计与合成
•     1.4.3 qRT-PCR
•   1.5 免疫荧光染色
•   1.6 ELISA检测IL-17A、IL-17C
•   1.7 免疫印迹方法检测蛋白的表达
•   1.8 数据分析
• 2 结 果
•   2.1 IL-17细胞因子基因的转录
•   2.2 IL-17细胞因子蛋白水平的检测
•   2.3 IL-17A及IL-17C功能分析
•     2.3.1 黏膜防御相关基因的转录
•     2.3.2 IL-17A及IL-17C调控肠黏膜免疫相关基因的转录
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 罗雨,许佳,张超颖,蒋春燕,何海健,余建国,章红兵

关键词: 产肠毒素大肠杆菌,肠上皮细胞,先天免疫,宿主防御

来源: 畜牧兽医学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 金华职业技术学院农业与生物工程学院动物医学检测中心

基金: 浙江省自然科学基金(LQ18C180001),金华职业技术学院人才引进项目(JHC-20160808)

分类号: S852.61

页码: 830-839

总页数: 10

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