牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素基因cylE缺失突变株的构建

论文摘要

目的构建牛乳腺炎无乳链球菌cylE基因缺失突变菌株,为进一步开展其致病机制与免疫机制研究奠定实验基础。方法参考GenBank上公布的无乳链球菌cylE基因上、下游序列（AF157015.2）,利用primer 5.0生物信息软件设计扩增引物,经PCR扩增出cylE基因上游序列L、下游序列R,并根据pACYC184质粒氯霉素抗性基因cat r序列设计引物,扩增cat r基因片段C,依次将L、R和C片段克隆至温敏型自杀质粒pSET4S中,构建cylE基因缺失重组质粒pSET4S-LCR,通过电转化技术将其转化至无乳链球菌,通过温度和抗生素抗性筛选cylE缺失突变株。结果经PCR和溶血表型鉴定结果表明,成功获得1株牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素cylE基因缺失突变菌株。结论为进一步研究其致病机制与免疫机制奠定了良好的研究基础。

论文目录

• 材料与试剂
•   1 材料
•     1.1 菌株和质粒
•     1.2 主要试剂
•   2 方法
•     2.1 分离菌株16S rDNA序列鉴定
•     2.2 牛乳腺炎无乳链球菌△cylE突变菌株基因PCR引物设计
•     2.3 无乳链球菌cylE基因缺失突变株的构建
•       2.3.1 cylE基因敲除
•       2.3.2 pSET4S-C重组质粒构建
•       2.3.3 pSET4S-L-C重组质粒构建
•       2.3.4 pSET4S- L- C-R重组质粒构建
•     2.4 pSET4S-L-C-R重组质粒电转至无乳链球菌
•     2.5 △cylE基因缺失突变株的筛选
•     2.6 cylE基因缺失菌株溶血活性检测
• 结 果
•   1 分离菌株的16S rDNA分子鉴定
•   2 无乳链球菌△cylE突变菌株的构建计及鉴定
•     2.1 pSET4S-C质粒的构建
•     2.2 pSET4S-L-C重组质粒构建
•     2.3 pSET4S-L-C-R重组质粒构建
•   3 pSET4S-L-C-R重组质粒电转化至无乳链球菌
•   4 无乳链球菌△cylE基因缺失突变株的筛选
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 布日额,吴金花,锡林高娃,孙立杰

关键词: 无乳链球菌,溶血素,基因敲除

来源: 中国病原生物学杂志 2019年07期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所

基金: 国家自然科学基金项目(No.31760725),内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题(No.MDK2018001,MDK2018002)

分类号: S852.61

DOI: 10.13350/j.cjpb.190707

页码: 773-779

总页数: 7

文件大小: 2356K

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