非洲爪蛙Klf4基因新转录本的克隆及功能研究

论文摘要

[目的]克隆非洲爪蛙Klf4基因的新转录本,并研究其在早期胚胎发育中的功能。[方法]提取胚胎总RNA,反转录构建c DNA文库。从Xenbase数据库中获得Klf4的基因组序列,分析序列发现新的ATG位点,设计引物、PCR扩增,将扩增的目的片段插入p CS2+,插入位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序鉴定,发现载体中插入的目的片段为编码483个氨基酸的Klf4的新转录本。体外转录获得mRNA,显微注射入胚胎,进行表型分析以及原位杂交检测。[结果]成功克隆出了Klf4基因的新转录本;过表达该转录本,表型分析发现胚胎发育异常,原位杂交检测发现Xag2和Dkk1的表达上升。[结论]成功克隆编码483个氨基酸的Klf4基因的新转录本,过表达该转录本胚胎发育异常,Xag2和Dkk1的表达被激活。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验材料
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 仪器
•     1.1.4 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 体外受精、胚胎培养和收集
•     1.2.2 总RNA的提取和反转录制备cDNA
•     1.2.3 引物设计和Klf4新转录本的扩增
•     1.2.4 载体构建、双酶切鉴定和测序
•     1.2.5 体外转录mRNA和显微注射
•     1.2.6 探针制备和原位杂交
• 2 结果与分析
•   2.1 非洲爪蛙总RNA的提取和cDNA的合成
•   2.2 从非洲爪蛙的cDNA文库中扩增Klf4基因的新转录本
•   2.3 p CS2+x Klf4（483）重组质粒的构建和双酶切鉴定
•   2.4 体外转录获得xKlf4（483）的mRNA
•   2.5 xKlf4（483）对非洲爪蛙胚胎早期发育的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 曹青,徐西兵,刘浩,刘晨

关键词: 转录本,非洲爪蛙,早期胚胎发育

来源: 生物技术 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 河南科技大学医学遗传学教研室,南京医科大学医学遗传学系

基金: 河南科技大学博士启动基金项目(13480027),南京医科大学科技发展基金重点项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,2015NJMUZD002),江苏省高校自然科学研究面上项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,16KJB180020),江苏省自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,BK20171053),国家自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,81702747)

分类号: Q132.4;Q78

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.06.0085

页码: 519-524

总页数: 6

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