云南黄牛血液中阿卡斑病毒的分离鉴定及S基因序列分析

论文摘要

为了解阿卡斑病毒在云南师宗的流行情况及病毒的遗传特征,本研究在云南师宗设立哨兵动物,2014年5～11月每周1次连续采集血清、血液样品,血清用做AKAV抗体检测,血液在C6/36、BHK-21、MDBK和Vero细胞上进行病毒分离工作,用S基因特异引物对阳性分离物进行鉴定及序列分析。结果显示,15头哨兵动物共采集到28批420份血清、420份血液样品,其中有3头牛和1只羊感染AKAV,从这些样品中分离获得2株AKAV（编号09312D和09312H）,它们在BHK-21和MDBK细胞上48 h产生明显CPE。2株新分离AKAV的S片段序列核苷酸同源性为100%,氨基酸同源性为100%,与所引用的9株其他不同地区分离的AKAV的S片段序列核苷酸同源性在83.8%～97.7%之间,氨基酸同源性在90.6%～99.6%之间,且新分离毒株处于同一进化小分支,具有高度亲缘性,形成了一个独立的次级分支,同时与其他2株中国AKAV分离株处于同一进化簇。结果表明,云南省师宗县为AKAV流行地区,病毒在当地活动频繁,新分离得到的2株病毒与其他AKAV毒株具有较高的核苷酸同源性和氨基酸同源性,提示亚洲太平洋地区AKAV病毒长期流行且关系密切,同时其氨基酸同源性高于核苷酸同源性也提示了AKAV S片段良好的氨基酸遗传稳定性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂
•   1.2 样品采集
•   1.3 AKAV C-ELISA抗体检测
•   1.4 病毒分离
•   1.5 电镜检查
•   1.6 病毒鉴定
•     1.6.1 引物设计
•     1.6.2 RNA提取、反转录及PCR扩增
•     1.6.3 S基因克隆与序列分析
• 2 结果
•   2.1 AKAV抗体检测
•   2.2 病毒分离
•   2.3 电镜观测
•   2.4 病毒鉴定
•     2.4.1 S片段核苷酸氨基酸同源性分析
•     2.4.2 S片段核苷酸和氨基酸同源性分析
•     2.4.3 S片段核苷酸序列遗传进化分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孟锦昕,李楠,肖雷,何于雯,寇美玲,宋建领,牛保生,李华春

关键词: 阿卡斑病毒,病毒分离,基因,序列分析

来源: 中国兽医学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南省师宗县动物疾病与预防控制中心

基金: 云南省应用基础研究计划(青年基金)资助项目(2015FD065),公益性行业(农业)科研专项资助项目(201303035)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.09.08

页码: 1703-1709

总页数: 7

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