导读:本文包含了酵母菌胞嘧啶脱氨酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:脱氨酶,胞嘧啶,酵母菌,基因,逆转录,酵母,载体。
酵母菌胞嘧啶脱氨酶论文文献综述
陈思乡,姜庆,张俊勇[1]（2018）在《恢复connexin26表达联合载酵母菌胞嘧啶脱氨酶自杀基因纳泡杀灭膀胱癌细胞》一文中研究指出目的分析载双基因的阳离子纳泡联合超声靶向微泡破坏技术进行基因转染的有效性,探索恢复或上调膀胱癌细胞的缝隙连接蛋白connexin26(Cx26)表达,能否增强自杀基因系统(yeast cytosine deaminase/5-fluorocytosine,YCD/5-FC)的旁观者效应,提高杀灭肿瘤细胞的效率。方法阳离子纳泡结合超声辐照(US)转染人膀胱癌T24细胞,荧光显微镜及流式细胞仪观测转染效率;qRT-PCR和Western blot检测质粒转染后的mRNA或蛋白相对表达量。将实验分为无处理空白对照、载pc DNA3.1-EGFP纳泡组、载Cx26纳泡组、载YCD纳泡组、载YCD+Cx26纳泡组;通过流式细胞术观察恢复Cx26表达后对膀胱癌细胞凋亡的影响。结果 qRT-PCR、Western blot显示纳泡结合超声辐照成功将目的基因转染并有效表达。恢复Cx26表达后,载YCD+Cx26纳泡组的细胞凋亡率为(60.68±2.61)%,明显高于单载YCD纳泡组的(46.42±2.13)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论恢复缝隙连接蛋白Cx26表达,可改善细胞间通讯连接,加强自杀基因系统YCD/5-FC的旁观者效应,促进肿瘤细胞凋亡,提高杀灭膀胱癌细胞的效率。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2018年04期）
齐海燕,许崇安,王健民,温丽敏,姚程[2]（2009）在《新型自杀基因酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因修饰供者T淋巴细胞防治移植物抗宿主病体外研究》一文中研究指出目的将新型自杀基因——酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因(YCD)导入人T淋巴细胞,在体外证明YCD自杀基因体系的有效性,为自杀基因应用于体内防治移植物抗宿主病(GVHD)提供了理论基础。方法利用脂质体法转染包装细胞293T,分离、培养人外周血单个核细胞,病毒上清转染活化后的人T细胞,应用Pu-romycin筛选扩增,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测目的基因的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞因子的分泌情况,噻唑蓝(MTT)法检测其对前体药物的敏感性。结果通过高速离心富集RV、CH-296包被+离心感染法等,对经高效扩增的人T淋巴细胞基因感染率可达38.2%。RT-PCR可检测到转基因T-YCD细胞中YCD基因的表达,筛选出的转基因T淋巴细胞的细胞因子分泌无显着变化。体外实验证实转基因T淋巴细胞可被前体药物5氟胞嘧啶(5-FC)显着杀伤。结论利用pMSCV-YCD-Puro载体,可将YCD基因高效导入人T淋巴细胞,快速筛选出阳性细胞;转基因T淋巴细胞的细胞因子分泌功能未受显着影响,在体外证实导入YCD的转基因T淋巴细胞可被5-FC有效杀伤。(本文来源于《山西医药杂志》期刊2009年05期）
江千里,王健民,张雨生,温丽敏,胡晓霞[3]（2007）在《酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶自杀基因系统对人原代T细胞的作用》一文中研究指出目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因(YCD)是新型自杀基因,利用重组逆转录病毒载体(RV),将YCD高效导入人原代T细胞,并在体内外探讨转基因T细胞的功能及"自杀"效应。方法:构建RV载体MSCV-YCD-puroR,瞬时质粒共转染法制备RV,流动感染法或Retronectin+离心法感染人原代T细胞,嘌呤霉素筛选获得T-YCD-puroR,检测转基因T细胞对肿瘤细胞的杀伤及细胞因子分泌功能,在体外和SCID小鼠体内,探讨前体药物5氟胞嘧啶(5-FC)对T-YCD-puroR细胞的杀伤效应等。结果:病毒滴度为(5.0±3.7)×106TU/mL。流动转染法对人原代T细胞的基因导入率46.0%±9.6%,2轮离心+Retronectin法的基因导入率为60.3%±7.6%(n=3)。经嘌呤霉素筛选48h获得T-YCD-puroR细胞,其基因阳性率96.7%±1.5%,并可大量扩增。与野生T细胞比较,T-YCD-puroR细胞杀伤K562肿瘤细胞的能力及细胞因子分泌功能无统计学意义。体外实验显示,与野生T细胞比较,T-YCD-puroR细胞对puromycin的IC50上升了304.9倍(0.071mg/Lvs22.3mg/L),对5-FC的IC50下降了133.3倍(656.0μmoL/Lvs4.9μmoL/L)。T-YCD-puroR细胞静脉接种于SCID小鼠,7d后每只小鼠腹腔注射5μmoL的5-FC,连续7d,首次给药24h后即可观察到SCID小鼠外周血中CD45+细胞显着下降(P<0.01)。结论:YCD自杀基因导入对人原代T细胞功能无显着影响,T-YCD-puroR细胞可以在体内外被5-FC有效杀伤。本研究为进一步研究打下了良好的基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2007年08期）
江千里,王健民,温丽敏,周虹[4]（2004）在《酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因MSCV载体的构建及原代T细胞表达》一文中研究指出以自杀基因修饰供者T细胞防治移植物抗宿主病(GVHD)的方案是一个巧妙的设计,而且在Ⅱ期临床试验中取得了明显的效果,但早期的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)自杀基因系统存在缺陷,促使研究者寻找新型自杀基因以替代之。研究者已就新型自杀基因酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因(YCD)进行了系列研究,本研究是其深入研究的过程。(本文来源于《中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编》期刊2004-11-01）
何志颖[5]（2003）在《报告基因标记的D-氨基酸氧化酶基因及酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因转基因小鼠的建立》一文中研究指出随着分子生物学及其相关学科的发展，肿瘤的基因疗法受到越来越多的关注，有望成为临床肿瘤治疗的一种重要辅助手段，其中自杀基因疗法显示了较好的应用前景。为了探讨自杀基因在临床肿瘤治疗中的应用前景，建立自杀基因肿瘤治疗评价的动物模型，我们克隆了D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase，DAAO)基因和酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)基因，希望建立DAAO基因及YCD基因转基因小鼠，为研究DAAO及YCD基因的生物学特性、开发和评价DAAO／D-Ala及YCD／5-FC自杀基因系统进行肿瘤治疗建立良好的实验动物模型。 来源于红色酵母的D-氨基酸氧化酶可氧化代谢D-丙氨酸(D-Ala)，产生对细胞具有杀伤作用的H_2O_2。H_2O_2是一种反应氧(ROS)，极易穿过细胞膜及核膜，通过直接氧化或还原产生羟自由基损伤细胞DNA、蛋白质和脂质等而致细胞死亡。哺乳动物组织的DAAO活性水平很低(0.18～780 mU／g湿组织)，且局限于过氧化物小体。另外，哺乳动物氨基酸为L型，不含D-氨基酸，因此DAAO基因可望成为新的可用于肿瘤治疗的安全的自杀基因。细菌胞嘧啶脱氨酶(bacterial cytosine deaminase，BCD)是存在于细菌中的一种蛋白酶，不存在于哺乳动物细胞内，它能催化5-氟胞嘧啶(5-FC)脱氨基转变为5-氟尿嘧啶(5-FU)，而5-FU是广泛应用的一种化疗药物，具有广谱抗癌性。研究表明，来源于酿酒酵母菌的胞嘧啶脱氨酶具有比细菌胞嘧啶脱氨酶更高的胞嘧啶脱氨酶活性，YCD／5-FC系统较BCD／5-FC系统具有更高的杀伤效率。 本研究采用基因重组技术分别构建了含有CMV启动子、以绿色荧光蛋白基因为报告基因的DAAO基因表达载体pIRES-DAAO，含有CMV启动子、以红色荧光蛋白基因为报告基因的YCD基因表达载体pIRES-YCD，酶切鉴定证实两载体构建成功。将两载体分别转染Hela细胞，荧光显微镜下可见阳性转染细胞中有绿色荧光蛋白及红色荧光蛋白表达。阳性转染细胞经筛选后分别加入前体药物D-Ala、5-FC，MTT法检测细胞活力证实，D-Ala、5-FC分别对DAAO、YCD转基因细胞具有杀伤作用，这证实表达载体pIRES-DAAO、pIRES-YCD中DAAO及YCD基因具有功能性表达活性。将pIRES-DAAO用BglⅡ限制性内切酶酶切线性化，采用 WMMffertWWdewrtteat原核显微注射法将其注射入受精卵雄原核制备转基因小鼠，目前得到19只存活的新生鼠。经复合式PCR方法检测获得4只Founder转基因小鼠，命名为C57＊gN（DAAO）SMMU，其表型正在分析中。同时本研究获得异常死亡幼鼠一只，经复合式PCR检测为基因组整合阳性鼠，按常规冰冻切片，激光共聚焦扫描显微镜下可见大部分组织中均有绿色荧光蛋白表达。将plaxs－YCD用BstBI限制性内切酶酶切线性化，经原核显微注射目前获得9只存活的新生鼠，经复合式PCR方法检测获得 2只 Founder转基因小鼠，命名为 C571gN（YCD）SloTh。目前原核注射工作仍在紧张进行中。 同时本研究对前体药物处理后的Hela－Dt细胞和Hela－Yi细胞进行流式细胞仪分析，结果表明Hela－Dt细胞与Hela－Yi细胞均出现明显的细胞凋亡，这提示DAAOto叭la及YCD乃FC自杀基因系统可能是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡而对其进行杀伤。(本文来源于《第二军医大学》期刊2003-05-01）
张雨生,王健民,翟勇平[6]（2002）在《酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶基因治疗系统对K562B细胞杀伤效应的初步研究》一文中研究指出目的 :克隆酵母菌胞嘧啶脱氨酶 (YCD)基因 ,观察 YCD/ 5氟胞嘧啶 (YCD/ 5 - FC)系统对转基因肿瘤细胞的杀伤效应。 方法 :扩增 YCD基因并构建 YCD基因重组逆转录病毒载体 ;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染高致瘤细胞K5 6 2 B,筛选并鉴定阳性转基因克隆 ;以 MTT法检测 5 - FC对 YCD转基因细胞的杀伤效应 ,测定转基因细胞裂解产物对5 - FC→ 5 - FU的转化。结果 :PCR法扩增出全长 YCD基因 ,经测序证实序列正确 ;构建了 MSCV - YCD- IRES- EGFP逆转录病毒载体 ,载体转染包装细胞Ф NX- A,获得滴度为 3.5× 10 6 CFU / m l的逆转录病毒 ;病毒转染 K5 6 2 B,转染率为 30 % ,经筛选获得转基因阳性克隆 YCD- K 5 6 2 B,RT- PCR检测显示 YCD- K5 6 2 B有 YCD基因的 m RNA表达 ,其细胞裂解产物可使 5 - FC转化为 5 - FU,表明其有 CD酶活性 ;MTT法检测低浓度 5 - FC(15μmol/ L )作用 96 h对 YCD- K5 6 2 B有明显的杀伤效应。 结论 :YCD/ 5 - FC系统对转基因肿瘤细胞有明显的杀伤效应。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2002年02期）
酵母菌胞嘧啶脱氨酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的将新型自杀基因——酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因(YCD)导入人T淋巴细胞,在体外证明YCD自杀基因体系的有效性,为自杀基因应用于体内防治移植物抗宿主病(GVHD)提供了理论基础。方法利用脂质体法转染包装细胞293T,分离、培养人外周血单个核细胞,病毒上清转染活化后的人T细胞,应用Pu-romycin筛选扩增,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测目的基因的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞因子的分泌情况,噻唑蓝(MTT)法检测其对前体药物的敏感性。结果通过高速离心富集RV、CH-296包被+离心感染法等,对经高效扩增的人T淋巴细胞基因感染率可达38.2%。RT-PCR可检测到转基因T-YCD细胞中YCD基因的表达,筛选出的转基因T淋巴细胞的细胞因子分泌无显着变化。体外实验证实转基因T淋巴细胞可被前体药物5氟胞嘧啶(5-FC)显着杀伤。结论利用pMSCV-YCD-Puro载体,可将YCD基因高效导入人T淋巴细胞,快速筛选出阳性细胞;转基因T淋巴细胞的细胞因子分泌功能未受显着影响,在体外证实导入YCD的转基因T淋巴细胞可被5-FC有效杀伤。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酵母菌胞嘧啶脱氨酶论文参考文献
[1].陈思乡,姜庆,张俊勇.恢复connexin26表达联合载酵母菌胞嘧啶脱氨酶自杀基因纳泡杀灭膀胱癌细胞[J].第叁军医大学学报.2018
[2].齐海燕,许崇安,王健民,温丽敏,姚程.新型自杀基因酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因修饰供者T淋巴细胞防治移植物抗宿主病体外研究[J].山西医药杂志.2009
[3].江千里,王健民,张雨生,温丽敏,胡晓霞.酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶自杀基因系统对人原代T细胞的作用[J].细胞与分子免疫学杂志.2007
[4].江千里,王健民,温丽敏,周虹.酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因MSCV载体的构建及原代T细胞表达[C].中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编.2004
[5].何志颖.报告基因标记的D-氨基酸氧化酶基因及酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因转基因小鼠的建立[D].第二军医大学.2003
[6].张雨生,王健民,翟勇平.酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶基因治疗系统对K562B细胞杀伤效应的初步研究[J].第二军医大学学报.2002
论文知识图
