深绿木霉嗜酸性阿魏酸酯酶酶学性质及生物质转化分析

论文摘要

为实现生物质的高效降解,制备具有重要生理功能的阿魏酸,本实验从深绿木霉XS6发酵液中分离纯化深绿木霉阿魏酸酯酶（Trichoderma atroatroviride feruloyl esterase,TaFAE）,并研究酶学特性。发酵液经（NH4）2SO4沉淀、DEAE-Cellulose DE52阴离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析后,得到电泳纯的TaFAE,比活力134.3 U/mg,回收率28.9%,纯化倍数31.52。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳测得酶分子质量约为66.4 kDa。TaFAE对阿魏酸甲酯亲和力最高,以其为底物,酶Km值和Vmax值分别为0.53 mmol/L和16.74 μmol/（min·mg）。以芥子酸甲酯为底物,酶促反应速率最大,达到32.21 μmol/（min·mg）,是阿魏酸甲酯的2倍,对咖啡酸甲酯无活性,说明该酶具有严格的底物特异性。TaFAE最适pH值和温度分别为pH 4.0和40℃。在pH 2.0～9.0的范围内,30～40℃温度下都表现出良好的稳定性。金属离子Ca2+和Mg2+对TaFAE活性有显著激活作用,重金属离子Hg2+和Pb2+几乎完全抑制酶活性;β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、十二烷基硫酸钠、Trition X-100增强酶活性,苯甲基磺酰氟有较强的抑制作用。木聚糖酶降解生物质的体系中加入TaFAE可显著增加阿魏酸和还原糖产量,表明TaFAE和木聚糖酶有良好协同作用。综上所述,TaFAE优良的耐酸性及其他酶学性质说明其在食品和饲料行业有较好的应用潜力。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•     1.1.1 菌种
•     1.1.2 试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 粗酶液的制备
•     1.3.2 酶的分离纯化
•       1.3.2.1 （NH4） 2SO4分级沉淀
•       1.3.2. 2 离子交换层析
•       1.3.2. 3 分子筛凝胶过滤层析
•     1.3.3 酶活性检测
•     1.3.4 蛋白含量测定
•     1.3.5 蛋白质分子质量测定
•     1.3.6 酶学性质分析
•       1.3.6. 1 温度对TaFAE活性和稳定性的影响
•       1.3.6. 2?pH值对TaFAE活性和稳定性的影响
•       1.3.6. 3 金属离子及各试剂对酶活性的影响
•     1.3.7?TaFAE的底物特异性及动力学分析
•     1.3.8?TaFAE作用于脱淀粉麸皮释放阿魏酸的功能
•     1.3.9?TaFAE在生物质降解中的应用
•   1.4 数据统计与分析
• 2 结果与分析
•   2.1?TaFAE的分离纯化
•   2.2?TaFAE纯度和分子质量的测定
•   2.3 温度对TaFAE活性的影响
•   2.4?pH值对TaFAE活性及稳定性的影响
•   2.5 金属离子及化学试剂对TaFAE活性的影响
•   2.6?TaFAE底物特异性及动力学分析
•   2.7?TaFAE作用于脱淀粉麸皮释放阿魏酸的功能
•   2.8?TaFAE在生物质降解中的应用
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 高兆建,许祥,王先凤,芦宁,王旭东,张铁柱,张抗震,焦巍

关键词: 阿魏酸酯酶,深绿木霉,分离纯化,酶学性质,生物质转化

来源: 食品科学 2019年10期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 徐州工程学院食品(生物)工程学院

基金: 江苏省重点研发计划项目(BE2016316),江苏省苏北科技计划项目(BC2013417,BN2015021),徐州市科技计划项目(XF13C027)

分类号: TQ925

页码: 121-128

总页数: 8

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