导读:本文包含了根癌农杆菌介导法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:杆菌,突变,基因,镰刀,稻瘟病,功能,甘蓝。
根癌农杆菌介导法论文文献综述
王欢,付小蕾,毛洪玉,祝朋芳[1]（2019）在《根癌农杆菌介导观赏羽衣甘蓝遗传转化体系优化》一文中研究指出为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系'Mark 10','W02-7'和'Curly 6'为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体的再生体系。将播种后6d的子叶于最适再生培养基上进行黑暗预培养,以根瘤农杆菌为介导侵染子叶后,于黑暗条件下进行农杆菌与植物材料的共培养。随后转入含有头孢霉素的抑菌培养基中进行抑菌培养,再将子叶移入含有卡那霉素浓度的筛选培养基中进行抗性芽选择,并提取植物基因组DNA进行目的基因的PCR验证,从而建立高效的羽衣甘蓝遗传转化体系。结果表明:最佳的外植体是羽衣甘蓝的子叶,在培养基MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1上,不定芽分化率可达100%;子叶经2～3d预培养,将OD600值为0.3～0.5的携带DFR基因表达载体的农杆菌菌液离心,以50mL MS重悬液重悬,侵染外植体5min,共培养2d;采用头孢霉素300mg·L-1,抑菌培养3d后,采用10mg·L-1卡那霉素进行抗性芽选择。在播种后30～40d共获得了24个抗性芽,以抗性芽的基因组DNA为模板进行PCR扩增,9株呈DFR阳性,显示外源基因已经成功整合到羽衣甘蓝基因组中,平均转化率为37.5%。本研究结果可以为羽衣甘蓝重要性状基因的遗传转化提供依据。(本文来源于《沈阳农业大学学报》期刊2019年05期）
冯连荣,矫丽曼,王占斌,赵继梅,尹杰[2]（2019）在《根癌农杆菌介导山葡萄VaCBF3基因转化欧美杨111的研究》一文中研究指出以欧美杨111为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘法进行了山葡萄VaCBF3基因的遗传转化,分析了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间对转化效率的影响,并对获得抗性植株进行PCR检测。结果表明:欧美杨111遗传转化过程中适宜的预培养时间为3 d,适宜菌液浓度为OD600为0.3～0.4,适宜侵染时间为2～4 min,适宜共培养时间为3 d。经过对转化子的PCR鉴定,获得4株阳性转基因植株,初步说明外源山葡萄CBF3基因已导入至欧美杨111号中,转化体系已成功建立。(本文来源于《西南林业大学学报(自然科学)》期刊2019年05期）
郭丽,程征[3]（2019）在《根癌农杆菌介导大岩桐遗传转化体系探究》一文中研究指出本研究以大岩桐叶片为外植体,以LEA基因为目的基因,为实施根癌农杆菌介导转化大岩桐,研究了卡那霉素和头孢霉素、预培养时间、共培养时间和延迟筛选时间等因素对大岩桐外植体及转化的影响,结果表明,外植体分化卡那霉素浓度为50 mg/L,头孢霉素浓度为250 mg/L,生根筛选压浓度为10 mg/L,外植体预培养时间为2 d,共培养时间为4 d,延迟筛选时间为6 d;以上述条件下,将农杆菌与大岩桐叶盘共培养,共获得16株抗性植株,GUS染色有3株转LEA基因的阳性植株,初步建立了外源基因LEA导入大岩桐植株遗传转化体系,以遗传改良大岩桐品种的抗旱性。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年14期）
杨明明,高海京,马啸燕,孙英楠,邵宇鹏[4]（2019）在《利用GUS基因的瞬时表达优化大豆根癌农杆菌介导的遗传转化》一文中研究指出高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、切豆方法、侵染时间、共培养方式以及共培养时间等方面对东农47、垦农18和B12088大豆栽培品种的遗传转化体系进行优化。结果表明:东农47萌发1 d,侵染30 min;垦农18和B12088萌发12 h,侵染30 min,GUS基因瞬时表达率最高。在其它的处理上,3个品种表现结果一致,即蘸取菌液切豆,共培养中子叶伤口朝下摆放,黑暗条件下共培养3～5 d,GUS基因瞬时表达最高。3个品种在最适条件下,GUS染色效率均达到90%以上,垦农18遗传转化效率较高。本研究为大豆农杆菌介导子叶节转化方法提供了一个改进的方案,并且为拓宽可利用于大豆遗传转化的种质资源奠定基础。(本文来源于《大豆科学》期刊2019年03期）
张萍[5]（2019）在《根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究》一文中研究指出以NHD_3、NC、NF叁种马铃薯品种的茎段为外植体,筛选出诱导形成愈伤组织的培养基,探讨不同转化条件对马铃薯遗传转化效率的影响。结果表明:在1.0 mg·L~(-1) 6-BA浓度不变情况下,愈伤诱导培养基中NHD_3、NC、NF茎段分别在NAA浓度为0.2、0.3、0.4 mg·L~(-1)时愈伤形成及生长最好;在茎段预培养2 d,共培养2d,农杆菌菌液在OD_(600)=0.6的条件下转化所得抗性愈伤诱导率最高。(本文来源于《陕西农业科学》期刊2019年04期）
何丽云,张树林,崔百元,朱庆锋,刘圣杰[6]（2019）在《根癌农杆菌介导的遗传转化及其在稻瘟病菌中的应用》一文中研究指出根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)技术是近20年发展起来的真菌研究中最具变革性的技术之一,它作为一种转化工具已被广泛应用于真菌基因功能研究中,使人们对真菌基因组学的理解有了很大的改变。利用ATMT获得随机的T-DNA插入突变体库,结合突变体菌株表型筛选,使许多过程的遗传基础得到阐明。ATMT法具有操作简单,转化受体广泛,转化效率高以及转化子遗传稳定性高等优势。稻瘟病菌是植物十大重要真菌之一,是引发水稻稻瘟病的病原真菌。目前,培育水稻抗病品种是控制稻瘟病最经济和环保的方法。通过克隆稻瘟病菌相关致病基因并研究其功能,在解释致病机理和生理特性,以及培育抗病品种方面具有重要的理论和实践意义。以根癌农杆菌为介导的遗传转化为稻瘟病菌的插入突变、基因敲除和标记克隆等方面研究提供了一个重要工具。针对根癌农杆菌介导的遗传转化原理、特点、步骤、影响因素以及该技术在稻瘟病菌功能基因组学研究中的应用进行综述,以期能够为稻瘟病菌等真菌的遗传转化方面研究提供相关的参考。(本文来源于《广东农业科学》期刊2019年03期）
贺丹,冯泽庆,王丽[7]（2018）在《根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌T-DNA插入突变研究》一文中研究指出镰刀菌感染严重危害人类健康,特别是播散性感染病死率极高。该菌是天然多重耐药真菌,几乎对所有临床抗真菌药物均具有耐药性。因此解析其致病和耐药机制至关重要。本研究建立并优化了根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌遗传转化体系,获得了1450株T-DNA插入突变体,并筛选获得了1株药物敏感性改变的突变体FOM1123,其对酮康唑、伊曲康唑、伏立康唑及泊沙康唑敏感性均明显增强。利用TAIL-PCR获得了该突变体的T-DNA插入位点侧翼序列,生物信息学分析表明假定蛋白基因(HPG)和NADPH-细胞色素P450还原酶基因(CPR1)被打断。分别构建基因敲除株ΔCPR1和ΔHPG,分析发现仅ΔCPR1的药物敏感性增强,表明CPR1基因与尖孢镰刀菌耐药性相关。有研究表明,CPR和细胞色素b5均可为甾醇合成关键酶CYP51提供电子。转录水平分析结果显示,当CPR1表达缺失时,其同源基因CPR2及cyt b5、CYP51A、CYP51B表达均上调,而同源基因CPR3、CPR4表达未见明显变化。对CPR1的同源基因进行敲除,发现3个同源基因与唑类耐药无关。麦角甾醇含量分析显示,与野生株相比ΔCPR1的麦角甾醇含量降低。表明CPR1是尖孢镰刀菌麦角甾醇合成通路中的关键基因,CPR同源基因中仅有CPR1与唑类耐药相关。上述结果可为寻找新型抗真菌药物靶标、揭示真菌耐药机制奠定基础,亦可为其他真菌相关研究提供参考。(本文来源于《中国菌物学会2018年学术年会论文汇编》期刊2018-08-11）
李金红,付莉,关晓溪,霍岩,陶承光[8]（2018）在《根癌农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化体系》一文中研究指出为建立以潮霉素为选择标记的农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的玉米高效遗传转化体系,本研究利用携带p MDC141-CYP79A1(含GUS基因)质粒的农杆菌浸染玉米A188幼胚,共培养7d后通过GUS基因瞬时表达率,研究农杆菌的菌液浓度、热激时间和浸染时间等因素对玉米幼胚遗传转化效率的影响。研究结果表明:随着农杆菌的菌液浓度的增加、热激时间和浸染时间的延长,GUS表达效率均呈现先增后减的趋势;当农杆菌菌液的OD_(600)为0.8、热激预处理时间3min和浸染时间5min时,其GUS瞬时表达率均最高,分别为46.8%、46.4%和51.7%。并在最佳条件下将GUS基因转入到玉米幼胚,以潮霉素为选择标记,进行3次选择培养,将重新分化的抗性愈伤组织进一步分化成苗,获得56株潮霉素抗性植株,经PCR分子鉴定,获得22株阳性植株,初步建立根癌农杆菌介导的高效玉米幼胚遗传转化体系,为以抗潮霉素基因作为筛选标记的玉米遗传转化和基因功能验证提供技术基础,获得的抗潮霉素转化植株为玉米育种提供新材料。(本文来源于《沈阳农业大学学报》期刊2018年03期）
王澜[9]（2018）在《根癌农杆菌介导柑橘指状青霉突变体库的扩建及其致病性分析》一文中研究指出由指状青霉引起的绿霉病是柑橘采后最严重的真菌性病害之一。目前柑橘防治还是以化学防治为主,然而化学药剂的环境污染、农药残毒量及抗药病原菌的出现都迫使我们去寻找更安全的防治方法。因此研究柑橘指状青霉的致病机理,对其更好防控具有重要的理论和应用价值。实验通过根癌农杆菌介导指状青霉转化体系,建立扩大转化子突变体库。对筛选出的不致病突变株P44-14-44,从生理水平分析其与野生菌株的表型差异,在分子水平上确定导致表型变化的突变基因,针对突变基因进行定点敲除,分析基因功能。主要研究结果如下:1、突变体库的扩建。通过农杆菌介导指状青霉转化已获得1000多个转化子,能在潮霉素上稳定生长,经过随机PCR验证均能扩增出潮霉素磷酸转移酶基因。2、比较突变株与野生株的生理水平差异。(1)对突变株与野生株分别进行扫描和透射电镜观察。扫描电镜下,观察到野生株明显的帚状结构,突变株只有菌丝体,没有帚状结构。透射电镜下,野生株分生孢子细胞结构完整,细胞壁、隔膜、细胞膜及内部的细胞器明显,突变株细胞壁外围明显加黑加粗;(2)测量了接种突变株与野生株柑橘表面的p H。将无菌水、野生菌和突变菌孢子悬浮液分别接种到温州蜜柑和纽荷尔脐橙,用平面p H计测量伤口表面p H,接种野生菌温州蜜柑伤口处第叁天p H从5.5下降到3.9,纽荷尔脐橙伤口p H从5.3下降到3.3,但是接种突变菌的和接种无菌水的结果保持一致,都没有明显的变化;(3)分析野生菌与突变菌的生长速率与孢子产量,培养第8 d时,野生菌菌苔的生长直径是突变菌的5倍,第13 d时野生菌菌苔直径是突变菌的近4倍,野生菌的孢子数量是突变菌的近7倍,发现突变菌的生长速率和孢子产量都明显低于野生菌。3、突变株分子水平解析。(1)通过重测序技术确定了突变菌的T-DNA拷贝数与插入位点,测序结果与之前的Southern blot和Tail-PCR结果保持一致。突变菌有3个T-DNA拷贝插入,有2个T-DNA插入导致两个基因发生突变,分别命名为269、275基因,还有一个T-DNA插入位点位于两个基因间隔区;(2)针对两个突变基因269、275,通过基因敲除的方法研究突变基因与指状青霉致病性之间的关系。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
冯泽庆[10]（2018）在《根癌农杆菌介导尖孢镰刀菌T-DNA插入突变的研究》一文中研究指出镰刀菌属(Fusarium spp.)分布广泛,形态多样,种类繁多。其寄主范围广,能够感染人类、动物,侵染植物,引起镰刀菌病。近年来由于免疫力低下人群增多,导致侵袭性和播散性镰刀菌感染逐年增多。该属已成为真菌性角膜炎最常见的病原菌,在丝状真菌深部感染中仅次于曲霉属(Aspergillus spp.)居于第二位。镰刀菌感染严重危害人类健康,特别是播散性镰刀菌感染的病死率极高。镰刀菌是天然多重耐药真菌。在临床上,该菌对几乎所有的抗真菌药物都具有耐药性,包括唑类、棘白菌素类及多烯类药物。目前,对于病原真菌的耐药机制研究多集中于临床感染较多的假丝酵母属(Candida spp.)和曲霉属。其耐药性形成大多数是由靶基因变异引起,例如对唑类药物产生耐药多是由于羊毛甾醇14α-去甲基化酶(CYP51)突变。此外还有形成生物膜、药物外排、药物降解等机制。而关于镰刀菌耐药机制的研究报道较少,因此对其耐药性产生的机制研究迫在眉睫。本研究成功构建了含有G418抗性基因(neo)筛选标签的质粒pXEN。利用该质粒对尖孢镰刀菌(F.oxysporum)成功进行了根癌农杆菌介导的遗传转化(Agrobacterimu tumefaciens-mediated transformation,ATMT),并对影响转化效率的主要因素进行了优化,建立了高效、稳定的ATMT转化体系。优化后,转化效率达250个转化子/10~4个孢子。利用该转化体系获得了1450株尖孢镰刀菌T-DNA插入突变体,初步建立了耐药尖孢镰刀菌的突变体库。生物学性状和核酸分析表明,获得的突变体遗传稳定性好,并可通过TAIL-PCR扩增技术获得突变体的插入位点侧翼序列,通过生物信息学分析确定打断基因。这为尖孢镰刀菌耐药、致病等相关机制的解析提供了突变体资源。本研究对上述尖孢镰刀菌突变体进行了药物敏感性筛选,分析了其对唑类、多烯类及棘白菌素类药物敏感性的变化,获得了一株对唑类药物敏感性改变的突变体FOM1123,对除氟康唑以外的唑类药物敏感性均明显增强,而对两性霉素B、卡泊芬净的最小抑菌浓度(MIC)均未见改变。利用TAIL-PCR获得了突变体FOM1123的T-DNA插入位点侧翼序列,与NCBI数据库比对发现假定蛋白基因(hypothetical protein gene,HPG)和NADPH-细胞色素P450还原酶基因(NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR1)被打断。为了明确影响该突变体药物敏感性的基因,对这两个基因分别进行基因敲除,获得敲除株ΔCPR1和ΔHPG。药物敏感性实验结果发现,ΔCPR1的药物敏感性增强,与突变体FOM1123一致;而ΔHPG无改变,表明药物敏感性改变仅与CPR1相关。有研究表明,NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)和细胞色素b5(cyt b5)是生物体内的电子传递蛋白。在真菌中两者可以为甾醇合成过程中的关键酶CYP51提供电子。生物信息学分析显示,CPR在尖孢镰刀菌中存在四个同源基因,即CPR1、CPR2、CPR3及CPR4;CYP51存在叁个同源基因,即CYP51A、CYP51B及CYP51C。为了分析CPR、cyt b5及CYP51与尖孢镰刀菌唑类耐药的关系,本研究检测了它们在野生型和ΔCPR1中转录水平的变化。结果显示,与野生型相比ΔCPR1中CPR2、cyt b5、CYP51A、CYP51B基因表达均上调。野生型在受到伏立康唑胁迫后,CPR两个同源基因CPR1、CPR2、cyt b5、CYP51A、CYP51B表达均上调。为了探讨CPR另外叁个同源基因与尖孢镰刀菌唑类耐药的关系,分别对其进行了敲除,结果表明叁个同源基因与唑类耐药无关。麦角甾醇含量分析显示,与野生型相比,ΔCPR1麦角甾醇含量降低,在受到伏立康唑胁迫时,ΔCPR1与野生型麦角甾醇含量均明显降低。以上结果表明,CPR1是尖孢镰刀菌麦角甾醇合成通路中的关键基因,是唯一与唑类耐药相关的CPR,其缺失可影响麦角甾醇的合成,导致对唑类药物敏感。综上所述,本研究成功建立了根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌遗传转化体系,构建了耐药尖孢镰刀菌的T-DNA插入突变体库,并深入分析了CPR基因与耐药性的关系。研究发现该基因与麦角甾醇的合成相关,缺失会导致麦角甾醇合成量降低,对唑类药物敏感。上述结果为寻找新型抗真菌药物靶标、揭示病原真菌的耐药机制奠定了基础,也为其他病原真菌相关研究提供了参考和借鉴。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-05-01）
根癌农杆菌介导法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以欧美杨111为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘法进行了山葡萄VaCBF3基因的遗传转化,分析了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间对转化效率的影响,并对获得抗性植株进行PCR检测。结果表明:欧美杨111遗传转化过程中适宜的预培养时间为3 d,适宜菌液浓度为OD600为0.3～0.4,适宜侵染时间为2～4 min,适宜共培养时间为3 d。经过对转化子的PCR鉴定,获得4株阳性转基因植株,初步说明外源山葡萄CBF3基因已导入至欧美杨111号中,转化体系已成功建立。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
根癌农杆菌介导法论文参考文献
[1].王欢,付小蕾,毛洪玉,祝朋芳.根癌农杆菌介导观赏羽衣甘蓝遗传转化体系优化[J].沈阳农业大学学报.2019
[2].冯连荣,矫丽曼,王占斌,赵继梅,尹杰.根癌农杆菌介导山葡萄VaCBF3基因转化欧美杨111的研究[J].西南林业大学学报(自然科学).2019
[3].郭丽,程征.根癌农杆菌介导大岩桐遗传转化体系探究[J].分子植物育种.2019
[4].杨明明,高海京,马啸燕,孙英楠,邵宇鹏.利用GUS基因的瞬时表达优化大豆根癌农杆菌介导的遗传转化[J].大豆科学.2019
[5].张萍.根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究[J].陕西农业科学.2019
[6].何丽云,张树林,崔百元,朱庆锋,刘圣杰.根癌农杆菌介导的遗传转化及其在稻瘟病菌中的应用[J].广东农业科学.2019
[7].贺丹,冯泽庆,王丽.根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌T-DNA插入突变研究[C].中国菌物学会2018年学术年会论文汇编.2018
[8].李金红,付莉,关晓溪,霍岩,陶承光.根癌农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化体系[J].沈阳农业大学学报.2018
[9].王澜.根癌农杆菌介导柑橘指状青霉突变体库的扩建及其致病性分析[D].华中农业大学.2018
[10].冯泽庆.根癌农杆菌介导尖孢镰刀菌T-DNA插入突变的研究[D].吉林大学.2018
论文知识图
