低温电转联合Sleeping beauty转座子系统增强CAR-T修饰效率

论文摘要

嵌合抗原受体T淋巴细胞（chimeric antigen receptor T cells, CAR-T cells）在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效。CAR-T治疗通过分离病人外周血单个核细胞PBMC,经适当的基因编辑手段表达CAR结构,令T细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,扩增后过继到体内完成对肿瘤的杀伤。该文主要探索在低温状态将含有睡美人（Sleeping beauty）转座子/转座酶系统的质粒电转进PBMC内表达CD19-CAR制备CAR-T细胞,并添加特定细胞因子进行增殖,并验证CAR表达、细胞活性与杀伤能力。结果表明,转染效率高达58.8%±4.1%,增殖后的CAR-T细胞能够整合并表达CAR基因,在与靶细胞共培养后,表现出与慢病毒制备的CD19-CAR相似的细胞活性和毒性。该文确定了一种基于Sleeping beauty转座子/转座酶和电转制备CAR-T细胞的方法,为临床CAR-T治疗提供了新的思路。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞和质粒
•   1.2 试剂与仪器
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 PBMC的分离培养
•     1.3.2 Sleeping beauty转座载体的构建
•     1.3.3 pMax-GFP电转染PBMC
•     1.3.4 低温状态下pMax-GFP电转染PBMC及扩增
•     1.3.5 流式细胞检测
•     1.3.6 Western blot检测CD3ζ蛋白水平
•     1.3.7 PCR检测a CD19-CAR的表达
•     1.3.8慢病毒载体p CDH-CAR-T细胞构建
•     1.3.9细胞活性及杀伤能力检测
•   1.4 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 成功构建p SVneo-CD19和p SVneo-CD19-T2A-GFP载体
•   2.2 不同条件对pMax-GFP电转染PBMC的影响
•   2.3 Sleeping beauty转座子电转PBMC目的基因表达和整合的鉴定
•   2.4 低温处理SB-CAR-T细胞的构建及其活性与毒性检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵军红,郑立群,傅雅娟,蔡少丽

关键词: 嵌合抗原受体,电转淋巴细胞,睡美人转座子,慢病毒

来源: 中国细胞生物学学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 肿瘤学

单位: 福建师范大学南方生物医学研究中心,福建省天然免疫生物学重点实验室

基金: 福建省自然科学基金(批准号:2017J01621)资助的课题~~

分类号: R730.51

页码: 2368-2378

总页数: 11

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