基于末端脱氧核糖核酸转移酶的纳米界面上DNA的生长策略及用于恩诺沙星的适配体传感器构建研究

论文摘要

在纳米金（Au nanoparticles,AuNPs）表面通过组装巯基DNA制得AuNPs-DNA生物探针后,末端脱氧核糖核酸转移酶（Terminal deoxynucleotidyl transferase,TdTase）催化探针DNA的3′-OH端,实现DNA的生长,并得到生长产物长单链DNA（Single-stranded DNA,ssDNA）。通过琼脂糖凝胶电泳和原子力显微镜成像（Atomic force microscope,AFM）对探针及ssDNA进行表征,结果表明TdTase能够实现纳米界面上DNA的高效生长,卷曲状态下链长可达850 nm。进一步将这种DNA的生长策略与适配体（Aptamer）技术相结合。首先在纳米金表面组装适配体片段1,在醛基化的磁珠颗粒表面组装适配体片段2,以此构建针对恩诺沙星的适配体生物传感器（Aptasensor）。该传感器对ENR在10～1.0×105 ng/mL具备良好的响应性能,检出限为1.0 ng/mL,能明显区分环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等对照组信号。研究表明,基于TdTase的适配体传感器操作便捷,具备良好的靶分子响应性能和特异性,可为食品安全检测等领域提供新的研究思路。

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 试剂与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 纳米金的制备
•     1.2.2 纳米生物探针Au-DNA1的制备
•     1.2.3 纳米生物界面DNA的生长
•     1.2.4 琼脂糖凝胶电泳的表征
•     1.2.5 原子力显微镜的表征
•     1.2.6 MBs的活化
•     1.2.7 MBs-DNA2的制备
•     1.2.8 MBs-ENR-AuNPs三明治夹心适配体传感器的构建
•     1.2.9 比色测定
• 2 结果与讨论
•   2.1 实验原理
•   2.2 AuNPs-DNA1与MBs-DNA2的紫外可见光谱
•   2.3 纳米界面DNA生长产物的表征
•   2.4 基于TdTase的适配体传感器用于恩诺沙星的检测
•     2.4.1 检测原理
•     2.4.2 MBs-ENR-AuNPs三明治复合结构的验证
•     2.4.3 纳米界面的DNA生长策略用于ENR适配体传感器的可行性验证
•     2.4.4 基于TdTase的适配体传感器对ENR的响应性能分析
• 3 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杜玉梅,周洋洋,卞晓军,颜娟

关键词: 纳米生物探针,末端脱氧核糖核酸转移酶,生长,适配体传感器,恩诺沙星

来源: 分析测试学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,信息科技

专业: 化学,轻工业手工业,自动化技术

单位: 上海海洋大学食品学院,上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心,农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海)

基金: 国家自然科学基金资助项目(21775102,21405167),上海市教育发展基金会“晨光计划”项目(15CG54)

分类号: TP212;O657;TS207.3

页码: 784-791

总页数: 8

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